Summary
प्राकृतिक और सिंथेटिक यौगिकों की क्षमता का परीक्षण करने के लिए यूनिनक्यूबैटेड वाणिज्यिक ब्रॉयलर अंडे का उपयोग करके ओवो फीडिंग अनुसंधान परीक्षणों में आयोजित करने के लिए एक मजबूत पद्धति विकसित की गई है, इस मामले में, निकोटिनामाइड राइबोसाइड, मांसपेशियों के विकास और विकास को प्रभावित करने के लिए।
Abstract
पिछले तीन दशकों के भीतर, लाल मांस और पोल्ट्री वैज्ञानिकों ने भ्रूण और भ्रूण के विकास के दौरान मांसपेशियों के विकास में हेरफेर करने के लिए रणनीतियों और प्रौद्योगिकियों को विकसित करने पर ध्यान केंद्रित किया। यह क्षेत्र फ़ोकस का एक क्षेत्र बना हुआ है क्योंकि इस समय के दौरान मांसपेशी फाइबर संख्या स्थापित की जाती है और भविष्य के सभी विकास के लिए आधार निर्धारित करती है। पोल्ट्री में, विकास कारकों, विटामिन, या अन्य पोषक तत्वों के ओवो फीडिंग में कई अध्ययनों ने चूजे की भ्रूण की मांसपेशियों और आंतों के विकास में सुधार किया। ओवो मांसपेशियों के विकास में सुधार संभवतः मांस की उपज, विकास दर, या मायोपैथी स्थितियों को प्रभावित करके पोल्ट्री उद्योग को लाभ पहुंचा सकता है। पिछले पांच वर्षों के दौरान, जॉर्जिया विश्वविद्यालय में गोंजालेज प्रयोगशाला ने ब्रॉयलर-चिकन भ्रूण के लिए ओवो फीडिंग पद्धति में एक निकोटिनामाइड राइबोसाइड विकसित किया, जिसने मांसपेशियों के विकास को बदल दिया। जब एक विकासशील भ्रूण की जर्दी थैली में इंजेक्ट किया जाता है, तो निकोटिनामाइड राइबोसाइड ने हैच पर पेक्टोरलिस प्रमुख मांसपेशियों के वजन और मांसपेशियों के फाइबर घनत्व में वृद्धि की। यह प्रोटोकॉल वाणिज्यिक मानक और उच्च उपज वाले ब्रॉयलर भ्रूण का उपयोग करके ओवो फीडिंग अध्ययनों में सटीक और पुनरुत्पादक रूप से आचरण करने के लिए एक पद्धति का प्रदर्शन करेगा। ये डेटा और विधियां अन्य अनुसंधान समूहों को बहुत सफलता और पुनरुत्पादन के साथ ओवो फीडिंग अध्ययनों में प्रदर्शन करने की अनुमति देंगी।
Introduction
1 9 60 के बाद से, पोल्ट्री से मांस की संयुक्त राज्य अमेरिका की प्रति व्यक्ति खपत एक आश्चर्यजनक दर से बढ़ी है, जबकि अन्य प्राथमिक प्रोटीन स्रोत स्थिर रहे हैं, गिरावट आई है, या न्यूनतम रूप से वृद्धि हुई है। पोल्ट्री उद्योग ने मांग को बनाए रखने के लिए एक कुशल पक्षी का उत्पादन करने के लिए पोषण और आनुवांशिकी को अनुकूलित करने के लिए काफी समय और अनुसंधान प्रयासों का निवेश किया। क्योंकि पोल्ट्री उद्योग का मुख्य उद्देश्य मांस में रूपांतरण के लिए मांसपेशियों का उत्पादन करना है, इसलिए उनके प्रयासों ने फसल पर पक्षी के अंतिम मांसपेशी द्रव्यमान को काफी बदल दिया है।
अधिकांश प्रजातियों की तरह, पोल्ट्री एक बिफैसिक तरीके से मांसपेशियों को विकसित करता है। प्राथमिक मायोजेनेसिस प्राथमिक मांसपेशी फाइबर का उत्पादन करने के लिए मेसेनकाइमल स्टेम कोशिकाओं का उपयोग करता है, जो मांसपेशियों के फाइबर विकास की दूसरी लहर के लिए पाड़ के रूप में कार्य करताहै। पोल्ट्री में, प्राथमिक मायोजेनेसिस भ्रूण के दिनों 3 से 8 के दौरान होता है, और माध्यमिक मायोजेनेसिस 8 से21 2 दिनों तक होता है। एक बार विकसित होने के बाद, प्राथमिक और माध्यमिक मांसपेशी फाइबर सेलुलर हाइपरट्रॉफी के माध्यम से सभी भविष्य की मांसपेशियों के विकास के लिए आधार के रूप में कार्य करते हैं। इसलिए, वैज्ञानिकों और उद्योग ने मांस की उपज को अधिकतम करने के लिए सभी मांस उत्पादक प्रजातियों में प्राथमिक और माध्यमिक मायोजेनेसिस में हेरफेर करने का प्रयास करने के लिए काफी प्रयास किए।
पोल्ट्री में खोजी गई एक तकनीक, जिसे ओवो फीडिंग में कहा जाता है, में इंजेक्शन के माध्यम से यौगिकों को खिलाना शामिल है। ओवो फीडिंग में, लगभग 40 वर्षों के लिए पोल्ट्री उद्योग द्वारा नियोजित एक तकनीक, शुरू में टीका प्रशासन के लिए विकसित कीगई थी। साहित्य दस्तावेज है कि विभिन्न विकास ता्मक अवधियों और अंडे के भीतर स्थानों पर विभिन्न यौगिकों और पोषक तत्वों के ovo खिला में ovo मांसपेशियों के विकास और विकास 4,5,6 में सकारात्मक रूप से प्रभावित. आज तक, जॉर्जिया विश्वविद्यालय में गोंजालेज प्रयोगशाला पोल्ट्री मांसपेशियों के विकास में हेरफेर करने के लिए ओवो फीडिंग में निकोटिनामाइड राइबोसाइड का उपयोग करने में अग्रणी है।
निकोटिनामाइड राइबोसाइड, विटामिन बी 3 का एक पाइरिडीन-न्यूक्लियोसाइड एनालॉग, बचाव मार्ग 7 के माध्यम से एनएडी + का उत्पादन करताहै। चूंकि यह मार्ग एनएडी + का उत्पादन करने के लिए कम एंजाइमेटिक चरणों का उपयोग करता है, इसलिए उत्पादन सबसे कुशल8 है। गोंजालेज और जैक्सन9 ने प्रदर्शित किया कि निकोटिनामाइड राइबोसाइड के साथ ब्रॉयलर भ्रूण जर्दी थैली के विकास के पूरक ने हैच किए गए चिक पेक्टोरलिस प्रमुख मांसपेशियों के वजन और मांसपेशियों के फाइबर घनत्व में वृद्धि की। बाद में इसकी पुष्टि Xu et al.10 द्वारा की गई थी, जिन्होंने पाया कि निकोटिनामाइड राइबोसाइड खुराक में वृद्धि से मांसपेशियों का वजन बढ़ गया और मांसपेशियों के फाइबर घनत्व में वृद्धि हुई। ये पहले दो अध्ययन एक वाणिज्यिक उपज ब्रॉयलर में आयोजित किए गए थे। क्योंकि उच्च उपज broilers अंतिम मांसपेशी द्रव्यमान आकार के लिए एक और अधिक महत्वपूर्ण आनुवंशिक क्षमता के अधिकारी, अध्ययन का उद्देश्य उच्च उपज broiler hatched चिक पेक्टोरलिस प्रमुख मांसपेशी विकास और हैच पर विकास पर निकोटिनामाइड राइबोसाइड खुराक के प्रभाव ों को निर्धारित करने के लिए किया गया था।
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Protocol
सभी तरीकों को जॉर्जिया संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति के विश्वविद्यालय द्वारा अनुमोदित किया गया था।
1. अंडा इनक्यूबेशन और उपचार प्रशासन
- अंडे की खरीद और उपचार असाइनमेंट
- Unincubated, निषेचित उच्च उपज ब्रॉयलर अंडे प्राप्त करें और उन्हें प्रयोगशाला में परिवहन करें।
- निरीक्षण और खराब गुणवत्ता माना अंडे त्याग.
नोट: मिसशेपेन अंडे (गोल, लम्बी, स्लैब-तरफा), फटा हुआ, गंदा / दाग, पतली खोल, और झुर्रीदार को खत्म करें। सड़े हुए अंडे के जोखिम को कम करने के लिए यह महत्वपूर्ण है। - स्प्रेडशीट सॉफ़्टवेयर प्रोग्राम में अलग-अलग अंडे की संख्या, वजन, और रिकॉर्ड अंडे की संख्या और वजन असाइन करें.
- वजन के आधार पर अंडे को सॉर्ट करने के लिए स्प्रेडशीट सॉफ़्टवेयर प्रोग्राम का उपयोग करें।
- अंडे की संख्या और अंडे के वजन स्तंभों को हाइलाइट करें।
- डेटा टैब का चयन करें और फिर सॉर्ट करें - अंडे के वजन से डेटा को सबसे छोटे से सबसे बड़े तक सॉर्ट करें।
नोट: सबसे अच्छी हैचिंग दर के लिए, 40 और 70 ग्राम के बीच वजन वाले अंडे का उपयोग करें। - प्रयोग के डिजाइन के आधार पर, अंडे (संख्यात्मक रूप से या वर्णानुक्रम में) एक इंजेक्शन उपचार और इच्छामृत्यु के दिन को असाइन करें। अलग-अलग स्तंभों में उपचार संख्या और इच्छामृत्यु का दिन दर्ज करें और यादृच्छिक रूप से प्रत्येक स्तर के भीतर इन कारकों को असाइन करें।
नोट: इस प्रकाशन के लिए, उपचार यादृच्छिक रूप से प्रत्येक 8-अंडे के स्तर के भीतर असाइन किए गए थे।
- स्प्रेडशीट सॉफ़्टवेयर प्रोग्राम के भीतर एक PivotTable उत्पन्न करें ताकि यह सुनिश्चित किया जा सके कि प्रत्येक उपचार में समान शुरुआती अंडे के वजन हैं।
- विश्लेषण करने के लिए स्प्रेडशीट के भीतर सभी डेटा को हाइलाइट करें।
- सम्मिलित करें टैब के अंतर्गत PivotTable विकल्प का चयन करें.
- PivotTable फ़ील्ड्स उप-विंडो में स्वतंत्र चर (इच्छामृत्यु स्तंभ का दिन) का चयन करें और पंक्तियाँ फ़ील्ड में खींचें.
- B उप-विंडो के भीतर स्वतंत्र चर (उपचार स्तंभ) का चयन करें और इच्छामृत्यु दिवस के अंतर्गत पंक्तियाँ फ़ील्ड में खींचें.
- ब्याज के निर्भर चर (अंडे का वजन) का चयन करें और इसे मान फ़ील्ड में खींचें।
- निर्भर चर पर क्लिक करके और मान फ़ील्ड सेटिंग्स का चयन करके मान फ़ील्ड सेटिंग्स परिवर्तित करें.
- सेटिंग को औसत में परिवर्तित करें.
- ट्रे असाइनमेंट
- स्प्रेडशीट सॉफ़्टवेयर प्रोग्राम में, एक ट्रे (संख्यात्मक रूप से या वर्णानुक्रम में) को अंडे असाइन करें, इसलिए उपचार को ट्रे के भीतर समान रूप से दर्शाया जाता है।
- ट्रे 1 को असाइन किए गए उपचार के साथ पहले चार अंडे असाइन करें। ट्रे 2 को अगले चार अंडे असाइन करें और तब तक जारी रखें जब तक कि सभी अंडे ट्रे को असाइन नहीं किए जाते।
नोट:: यह चरण प्रयोग में उपयोग किए गए इनक्यूबेटर और ट्रे की संख्या के आधार पर भिन्न होगा।
- ट्रे 1 को असाइन किए गए उपचार के साथ पहले चार अंडे असाइन करें। ट्रे 2 को अगले चार अंडे असाइन करें और तब तक जारी रखें जब तक कि सभी अंडे ट्रे को असाइन नहीं किए जाते।
- स्प्रेडशीट सॉफ़्टवेयर प्रोग्राम में, एक ट्रे (संख्यात्मक रूप से या वर्णानुक्रम में) को अंडे असाइन करें, इसलिए उपचार को ट्रे के भीतर समान रूप से दर्शाया जाता है।
- सुनिश्चित करें कि PivotTable फ़ंक्शन का उपयोग करके सभी उपचारों को ट्रे पर समान रूप से दर्शाया गया है.
- विश्लेषण करने के लिए स्प्रेडशीट के भीतर सभी डेटा को हाइलाइट करें।
- सम्मिलित करें टैब के अंतर्गत PivotTable विकल्प का चयन करें.
- PivotTable फ़ील्ड्स उप-विंडो में स्वतंत्र चर (ट्रे स्तंभ) का चयन करें और पंक्तियाँ फ़ील्ड में खींचें.
- ब्याज के निर्भर चर (अंडे का वजन) का चयन करें और इसे मान फ़ील्ड में खींचें।
- निर्भर चर पर क्लिक करके और मान फ़ील्ड सेटिंग्स का चयन करके मान फ़ील्ड सेटिंग्स परिवर्तित करें.
- सेटिंग को गणना में परिवर्तित करें.
- इनक्यूबेशन
- अंडे को उनके उपयुक्त इनक्यूबेशन ट्रे में रखें और उन्हें 26.6 डिग्री सेल्सियस पर 40% ± 4% सापेक्ष आर्द्रता के साथ 6 घंटे के लिए पूर्व-इनक्यूबेट करें।
नोट: कुछ इनक्यूबेटरों में स्व-निगरानी सिस्टम होते हैं जो पूरी तरह से सटीक नहीं हो सकते हैं। स्थितियों को नियंत्रित करने के लिए अन्य तापमान और आर्द्रता निगरानी उपकरणों का उपयोग करें। - इनक्यूबेटर के तापमान को 40% ± 4% सापेक्ष आर्द्रता के साथ 37 डिग्री सेल्सियस तक बढ़ाएं और इन स्थितियों को इनक्यूबेशन दिन 18 तक बनाए रखें।
- उचित इनक्यूबेटर तापमान सुनिश्चित करने के लिए, सतह के तापमान को सुनिश्चित करने के लिए थर्मल सतह थर्मामीटर के साथ इनक्यूबेटर में दो बार दैनिक रूप से कई अंडों की सतह के तापमान को मापें ताकि सतह का तापमान 37 डिग्री सेल्सियस हो।
- अंडों को प्रति घंटा घुमाएं ताकि पुन: स्थिति बनाई जा सके।
- इनक्यूबेशन के पहले 18.5 दिनों के दौरान 10% -12.5% अंडे के वजन में कमी सुनिश्चित करने के लिए दैनिक रिकॉर्ड अंडे का वजन।
नोट: यदि वजन घटाने वांछित सीमा के भीतर नहीं है, तो समायोजित (वृद्धि या कमी) आर्द्रता।
- अंडे को उनके उपयुक्त इनक्यूबेशन ट्रे में रखें और उन्हें 26.6 डिग्री सेल्सियस पर 40% ± 4% सापेक्ष आर्द्रता के साथ 6 घंटे के लिए पूर्व-इनक्यूबेट करें।
- इनक्यूबेशन दिन-10 में ovo इंजेक्शन
- 290.07 ग्राम / मोल के सूत्र वजन का उपयोग करके प्रत्येक उपचार के लिए आवश्यक निकोटिनामाइड राइबोसाइड की मात्रा की गणना करें, जिसमें प्रत्येक अंडे की जर्दी थैली में इंजेक्ट किए गए समाधान के 100 μL के साथ।
नोट: बाँझ खारा (0.9%) समाधान सभी समाधानों के लिए diluent के रूप में इस्तेमाल किया जाएगा।
गणना: 50 अंडे × 100 μL = 5,000 μL (5 mL) समाधान की आवश्यकता है। यह सुनिश्चित करने के लिए 6 मिलीलीटर तक गोल करें कि इंजेक्शन के लिए पर्याप्त समाधान उपलब्ध है (चित्रा 1)।- एक बार समाधान किए जाने के बाद, उन्हें अंडे के तापमान पर रखने के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पानी के स्नान में रखें।
- एक बार में इनक्यूबेटर एक ट्रे से अंडे निकालें और एक गर्म तौलिया के साथ कवर करें।
- मोमबत्ती अंडे जर्दी थैली का पता लगाने और 70% इथेनॉल के साथ इंजेक्शन के क्षेत्र को साफ करने के लिए।
- एक बाँझ 20 जी, 2.54 सेमी hypodermic सुई ~ 1 सेमी अंडे के खोल में डालें और जर्दी थैली में असाइन की गई खुराक इंजेक्ट करें। बाँझ खारा (0.9%) के 100 μL के साथ 0 mM निकोटिनामाइड राइबोसाइड उपचार से अंडे इंजेक्ट करें।
- तुरंत, अत्यधिक नमी हानि से बचने के लिए पूर्ण निविड़ अंधकार टेप के एक छोटे से टुकड़े के साथ इंजेक्शन साइट को कवर करें।
- एक बार जब सभी अंडे अपना उपचार प्राप्त कर लेते हैं, तो ट्रे को इनक्यूबेटर में वापस रखें।
- 18 इनक्यूबेशन दिन, ट्रे से अंडे निकालें और उन्हें उनके उपचार के अनुसार हैचिंग बक्से में रखें।
- इनक्यूबेटर में हैचिंग बक्से रखें और आर्द्रता को 60 ± 2% तक बढ़ाएं जब तक कि सभी अंडे हैच न हों या इनक्यूबेशन के दिन 23 तक।
नोट: यदि अंडे में कैंडलिंग पर भ्रूण नहीं होता है, तो अंडे को छोड़ दें। इससे सड़े हुए अंडे की घटना को रोका जा सकेगा।
- 290.07 ग्राम / मोल के सूत्र वजन का उपयोग करके प्रत्येक उपचार के लिए आवश्यक निकोटिनामाइड राइबोसाइड की मात्रा की गणना करें, जिसमें प्रत्येक अंडे की जर्दी थैली में इंजेक्ट किए गए समाधान के 100 μL के साथ।
2. इच्छामृत्यु और पेक्टोरलिस प्रमुख मांसपेशी नमूना संग्रह
- चिक इच्छामृत्यु
- इनक्यूबेशन दिन 18 पर, इनक्यूबेटर से भ्रूण के अंडे को हटा दें और चयापचय को रोकने के लिए उन्हें 1 घंटे के लिए कमरे के तापमान पर रखें। अंडे से भ्रूण को हटा दें, जर्दी थैली के बिना वजन करें, और फिर विच्छेदन करें। 12 ज पोस्ट-हैचिंग, 10 मिनट के लिए सीओ 2 के संपर्क मेंआने से लड़कियों को euthanize, वजन, जल्दी से मुकुट-से-रम्प लंबाई माप एकत्र करें, और फिर decapitate।
नोट: तथ्य यह है कि पक्षी के पास अब उनका सिर नहीं है, इच्छामृत्यु सुनिश्चित करता है। - भ्रूण और चूजों के लिए डिजिटल कैलिपर्स का उपयोग करके निम्नलिखित मापों (चरण 2.1.2.1-2.1.2.4) पर विचार करें।
- मुकुट-से-रम्प लंबाई निर्धारित करने के लिए, अपने सिर को नीचे और पैरों को अपने शरीर के नीचे के साथ अपनी तरफ रखें। सिर के ऊपर से पूंछ तक मापें।
- सिर की चौड़ाई को मापने के लिए, एक कान के छेद से दूसरे कान के छेद तक मापें।
- सिर की लंबाई निर्धारित करने के लिए, चोंच के पीछे से क्रैनियम के पीछे तक मापें।
- एक गैर-लोचदार स्ट्रिंग लें और सिर की परिधि को मापने के लिए इसे एक कान के छेद से दूसरे तक खोपड़ी के चारों ओर लपेटें। माप प्राप्त करने के लिए एक मीट्रिक मापनी पर स्ट्रिंग रखें।
- छाती के चारों ओर एक स्ट्रिंग लपेटकर छाती की परिधि एकत्र करें, जहां पंख शरीर से संपर्क करते हैं और माप प्राप्त करने के लिए एक मीट्रिक शासक पर स्ट्रिंग रखते हैं।
- 70% इथेनॉल के साथ स्तनों को स्प्रे करें, और उंगलियों का उपयोग करके, पेक्टोरलिस प्रमुख मांसपेशियों को प्रकट करने के लिए पंखों और त्वचा को खींचें और डिजिटल कैलिपर्स के साथ माप (चरण 2.1.4.1-2.1.4.2) लें।
- छाती की चौड़ाई निर्धारित करने के लिए, छाती के पार मापें जहां पंख शरीर से संपर्क करते हैं।
- छाती की लंबाई निर्धारित करने के लिए, वसा पैड के शीर्ष पर क्लैविकल के नीचे से मापें।
- इनक्यूबेशन दिन 18 पर, इनक्यूबेटर से भ्रूण के अंडे को हटा दें और चयापचय को रोकने के लिए उन्हें 1 घंटे के लिए कमरे के तापमान पर रखें। अंडे से भ्रूण को हटा दें, जर्दी थैली के बिना वजन करें, और फिर विच्छेदन करें। 12 ज पोस्ट-हैचिंग, 10 मिनट के लिए सीओ 2 के संपर्क मेंआने से लड़कियों को euthanize, वजन, जल्दी से मुकुट-से-रम्प लंबाई माप एकत्र करें, और फिर decapitate।
- पेक्टोरलिस प्रमुख मांसपेशी, माप, और संग्रह का निष्कर्षण
- सर्जिकल कैंची या स्केलपेल और संदंश का उपयोग करके, कील हड्डी के साथ काटकर और शरीर की दीवार से मांसपेशियों को जारी करके सही पेक्टोरलिस प्रमुख मांसपेशी को हटा दें।
नोट: सुनिश्चित करें कि पेक्टोरलिस मामूली मांसपेशी को नेत्रहीन रूप से पहचानकर एकत्र न करें कि मांसपेशी रिब पिंजरे पर बनी हुई है। - पेक्टोरलिस प्रमुख मांसपेशी को हटाने के बाद, मांसपेशियों को एक पॉप्सिकल स्टिक पर सपाट रखें, और डिजिटल कैलिपर्स का उपयोग करके निम्नलिखित माप (चरण 2.2.2.1-2.2.2.3) एकत्र करें।
- मांसपेशियों की लंबाई निर्धारित करने के लिए, कपाल से मांसपेशियों के पुच्छल भाग तक मापें।
- मांसपेशियों की चौड़ाई निर्धारित करने के लिए, मांसपेशियों के कपाल भाग के सबसे व्यापक हिस्से पर मापें।
- मांसपेशियों की मोटाई का निर्धारण करने के लिए, संदंश के साथ स्तन उठाएं और मांसपेशियों के कपाल भाग के सबसे मोटे हिस्से पर मापें।
- यदि वांछित हो, तो इस मांसपेशी और बाएं पेक्टोरलिस प्रमुख मांसपेशी को आगे के विश्लेषण (जैसे हिस्टोलॉजी, प्रोटीन और जीन अभिव्यक्ति, आदि) के लिए एक वर्ष तक -80 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें।
- सर्जिकल कैंची या स्केलपेल और संदंश का उपयोग करके, कील हड्डी के साथ काटकर और शरीर की दीवार से मांसपेशियों को जारी करके सही पेक्टोरलिस प्रमुख मांसपेशी को हटा दें।
3. सांख्यिकी
- प्रयोगात्मक इकाई के रूप में अंडे / लड़की के साथ एक पूरी तरह से यादृच्छिक डिजाइन के रूप में डेटा का विश्लेषण करें।
नोट: निकोटिनामाइड राइबोसाइड खुराक (डॉस) ने निश्चित प्रभाव के रूप में कार्य किया। सभी डेटा का विश्लेषण एक सांख्यिकीय विश्लेषण सॉफ़्टवेयर प्रोग्राम ( सामग्री की तालिका देखें) के साथ किया गया था, और उपचार के कम से कम वर्ग साधनों के बीच युग्मवार तुलना की गणना की गई थी। मतभेदों को पी < 0.05 में महत्वपूर्ण माना जाता था।
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Representative Results
दिन -18 भ्रूण और हैच किए गए चूजों के बॉडीवेट के लिए कोई डॉस प्रभाव नहीं था (पी > 0.52); चित्र 2)। सभी दिन -18 भ्रूण पेक्टोरलिस प्रमुख मांसपेशी माप (पी > 0.24) के लिए कोई डॉस प्रभाव नहीं थे; चित्रा 3)। हैच किए गए चिक पेक्टोरलिस प्रमुख मांसपेशियों की लंबाई और चौड़ाई माप (पी > 0.26) के लिए कोई डॉस प्रभाव नहीं थे; हालांकि, डॉस ने मांसपेशियों के वजन और गहराई को प्रभावित किया (पी < 0.03; चित्रा 4)। निकोटिनामाइड राइबोसाइड के साथ इंजेक्ट नहीं किए गए भ्रूण से चूजों में पेक्टोरलिस प्रमुख मांसपेशियां थीं जिनका वजन 500 और 1,000 एमएम निकोटिनामाइड राइबोसाइड (पी < 0.03) के साथ इंजेक्ट किए गए भ्रूण से चूजे से कम था, लेकिन ये उपचार एक-दूसरे से अलग नहीं थे (पी = 0.41)। 250 mM निकोटिनामाइड राइबोसाइड के साथ इंजेक्ट किए गए भ्रूण से चूजों ने अन्य उपचारों की तुलना में पेक्टोरलिस प्रमुख वजन में भिन्नता नहीं की (पी > 0.06)। 0 और 250 mM निकोटिनामाइड राइबोसाइड के साथ इंजेक्ट किए गए भ्रूण से चूजों के चूजों में 500 और 1,000 mM निकोटिनामाइड राइबोसाइड (पी < 0.05) के साथ इंजेक्ट किए गए भ्रूण से लड़कियों की तुलना में कम पेक्टोरलिस प्रमुख गहराई थी, लेकिन ये उपचार अलग नहीं थे (पी = 0.95)। भ्रूण से चूजा 500 और 1,000 mM निकोटिनामाइड राइबोसाइड के साथ इंजेक्ट किया गया था, पेक्टोरलिस प्रमुख गहराई में (पी = 0.73) भिन्न नहीं था।
चित्रा 1: निकोटिनामाइड राइबोसाइड खुराक सामान्य गणना और वर्तमान प्रयोग में उपयोग की जाने वाली तीन खुराक के उदाहरण। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्रा 2: (ए) दिन -18 भ्रूण और (बी) हैच चिक बॉडी वेट पर निकोटिनामाइड राइबोसाइड की चार खुराक के ओवो फीडिंग का प्रभाव। भ्रूण को इनक्यूबेशन के दिन -10 में चार निकोटिनामाइड राइबोसाइड खुराक के साथ जर्दी थैली में इंजेक्ट किया गया था। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्रा 3: दिन-18 भ्रूण पेक्टोरलिस प्रमुख मांसपेशी पर निकोटिनामाइड राइबोसाइड की चार खुराक के ओवो फीडिंग का प्रभाव। (क) वजन। (ख) लम्बाई। (ग) चौड़ाई। (d) गहराई। भ्रूण को इनक्यूबेशन के 10 वें दिन चार निकोटिनामाइड राइबोसाइड खुराक में से एक के साथ जर्दी थैली में इंजेक्ट किया गया था। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्रा 4: हैच चिक बॉडी पेक्टोरलिस प्रमुख मांसपेशी पर निकोटिनामाइड राइबोसाइड की चार खुराक के इन ओवो फीडिंग का प्रभाव। (ए) वजन। (ख) लम्बाई। (ग) चौड़ाई। (d) गहराई। भ्रूण को इनक्यूबेशन के 10 वें दिन चार निकोटिनामाइड राइबोसाइड खुराक में से एक के साथ जर्दी थैली में इंजेक्ट किया गया था। a, b एक उप-आकृति के भीतर एक दूसरे से सांख्यिकीय अंतर को इंगित करता है (P < 0.05)। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
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Discussion
आज तक, जॉर्जिया विश्वविद्यालय में गोंजालेज प्रयोगशाला एकमात्र समूह है जो पेक्टोरलिस प्रमुख मांसपेशियों के विकास और विकास पर ओवो फीडिंग में निकोटिनामाइड राइबोसाइड के सकारात्मक प्रभावों को प्रदर्शित करता है। पहले अध्ययन में पाया गया कि 250 mM निकोटिनामाइड राइबोसाइड के ओवो फीडिंग में मांसपेशियों के वजन और आयामों में वृद्धि हुई जब जर्दी थैली9 में इंजेक्ट किया गया। अनुवर्ती अध्ययन में, जर्दी में निकोटीनामाइड राइबोसाइड खुराक को बढ़ाने के लिए इंजेक्शन लगाना, वर्तमान अध्ययन में परीक्षण की गई खुराक के समान, 250 एमएम खुराक10 से परे पेक्टोरलिस प्रमुख मांसपेशी मोर्फोमेट्रिक्स में वृद्धि नहीं हुई। इन दो अध्ययनों ने एक वाणिज्यिक उपज ब्रॉयलर लाइन का उपयोग किया; इसलिए, यह अध्ययन निकोटिनामाइड राइबोसाइड के साथ उच्च उपज ब्रॉयलर भ्रूण के ओवो फीडिंग के प्रभावों को प्रदर्शित करने के लिए आयोजित किया गया था।
इन अध्ययनों के माध्यम से, इस प्रोटोकॉल में स्थित कई महत्वपूर्ण चरणों की पहचान की गई है जो सफलता को निर्धारित करते हैं। यह प्रक्रिया उन लोगों के लिए गंभीर रूप से महत्वपूर्ण है जो बैक्टीरिया के प्रसार को कम करने के लिए इनक्यूबेशन के लिए अंडे का चयन करने से अपरिचित हैं और हैच किए गए-चिक परिणामों को पूर्वाग्रहित नहीं करते हैं। सबसे पहले, गंदे या मिसशेपेन अंडे का चयन न करना गंभीर रूप से महत्वपूर्ण है क्योंकि उनके पास बैक्टीरिया हैं जो अन्य अंडों को बाधित कर सकते हैं। ये बैक्टीरिया इनक्यूबेटर के माध्यम से तेजी से फैलेंगे और सड़े हुए अंडे की घटनाओं में भारी वृद्धि का कारण बनेंगे; इस प्रकार, नमूने के लिए उपलब्ध भ्रूण और चूजों की संख्या को प्रभावित करता है।
प्रयोगात्मक उपचारों के लिए अंडे असाइन करने के लिए, शोधकर्ताओं को ऊपर वर्णित स्प्रेडशीट सॉफ़्टवेयर विधियों का उपयोग करना चाहिए ताकि यह सुनिश्चित किया जा सके कि अंडे के वजन शुरू करने वाले सभी उपचार समान हैं। इस चरण को पूरा करने के भ्रूण और hatched-लड़की पूरे शरीर morphometric डेटा में प्रदर्शित किया जाएगा. यह सुनिश्चित करेगा कि सभी प्रयोगात्मक उपचार मांसपेशियों के अंतर उपचार आवेदन के कारण हैं। गोंजालेज और जैक्सन9 और जू एट अल.10 अध्ययनों में सभी शरीर के मॉर्फोमेट्रिक उपायों पर कोई निकोटिनामाइड राइबोसाइड प्रभाव नहीं थे। इन सुसंगत निष्कर्षों के कारण, वर्तमान शोध में केवल भ्रूण और हैच-चिक बॉडी वेट को मापा गया था ताकि पूरे शरीर के मॉर्फोमेट्रिक्स पर निकोटीनामाइड राइबोसाइड प्रभाव की कमी को स्थापित किया जा सके; हालांकि, पूरे शरीर morphometrics इकट्ठा करने के लिए तरीकों उन लोगों के लिए इस प्रकाशन में उन डेटा को इकट्ठा करने के इच्छुक लोगों के लिए प्रस्तुत कर रहे हैं. वर्तमान अध्ययन में भ्रूण या चिक बॉडी वेट पर कोई निकोटिनामाइड राइबोसाइड खुराक प्रभाव नहीं थे, जो पहले रिपोर्ट की गई प्रवृत्ति को जारी रखते थे।
क्योंकि यह पद्धति माध्यमिक मायोजेनेसिस को सख्ती से प्रभावित करती है, भविष्य की शोध टीमों को पहले के समय बिंदु पर भ्रूण को इंजेक्ट करने के लिए लुभाया जा सकता है। लेखकों के अनुभव में, शुरुआती इंजेक्शन, इनक्यूबेशन दिनों से 0 से 5 तक, अंडे की हैचबिलिटी को 70 से 80% तक कम कर देता है। एक प्रारंभिक इंजेक्शन तकनीक की एक महत्वपूर्ण सीमा है। यह अनुसंधान के भविष्य के क्षेत्र के रूप में काम कर सकता है, लेकिन लेखकों के अनुभव में, प्रारंभिक इंजेक्शन हैचबिलिटी के लिए हानिकारक है जो इस तकनीक के मूल्य को गंभीर रूप से कम कर देता है।
पेक्टोरलिस प्रमुख मांसपेशी के मॉर्फोमेट्रिक्स को मापते समय, शोधकर्ताओं को दो महत्वपूर्ण विचारों पर विचार करना चाहिए। सबसे पहले, लेखक एक एकल, अच्छी तरह से प्रशिक्षित शोधकर्ता को मोर्फोमेट्रिक विश्लेषण के लिए उपयोग की जाने वाली सभी मांसपेशियों को हटाने की सलाह देते हैं। क्योंकि पेक्टोरलिस प्रमुख मांसपेशी इतनी छोटी है, बहुत-अवांछित भिन्नता या पूर्वाग्रह को ब्याज की मांसपेशियों के बाहर अन्य मांसपेशियों को इकट्ठा करके डेटा में पेश किया जा सकता है। एक एकल शोधकर्ता का उपयोग करना यह सुनिश्चित करेगा कि मांसपेशियों की पहचान करने के लिए उपयोग किए जाने वाले सुसंगत स्थलों के अनुसार एक ही मांसपेशी एकत्र की जाएगी। दूसरा, माप के लिए लकड़ी की सतह पर मांसपेशियों को रखते समय, सभी मांसपेशियों को प्राकृतिक स्थिति में रखने में सावधानी बरतनी चाहिए। यह लंबाई माप के लिए विशेष रूप से सच है, क्योंकि इसे माप की सतह पर बिछाते समय मांसपेशियों को खींचकर हेरफेर किया जा सकता है। इनक्यूबेशन दिन 18 पर पेक्टोरलिस प्रमुख मांसपेशी मोर्फोमेट्रिक्स के लिए वर्तमान अध्ययन में कोई निकोटिनामाइड राइबोसाइड प्रभाव नहीं देखा गया था। Xu et al.10 ने इनक्यूबेशन दिन 19 पर कोई पेक्टोरलिस प्रमुख मांसपेशियों के वजन और लंबाई के अंतर की सूचना नहीं दी; इस प्रकार, पूरे मांसपेशी morphometrics पर निकोटिनामाइड राइबोसाइड के प्रभाव को इंगित करते हुए इन दो आनुवंशिक ब्रॉयलर लाइनों में इनक्यूबेशन दिन 19 के बाद तक प्रकट नहीं हो सकता है।
पहले प्रकाशित अध्ययनों की तुलना में, वर्तमान अध्ययन में प्रमुख संशोधनों में से एक व्यावसायिक रूप से उपलब्ध कैप्सूल-फॉर्म निकोटिनामाइड राइबोसाइड का उपयोग था। पिछले अध्ययनों में 9,10, शुद्ध निकोटिनामाइड राइबोसाइड को एक निर्माता से सुरक्षित किया गया था। निर्माता की सहायता से, अनुसंधान समूह को सूचित किया गया था कि वर्तमान अध्ययन में उपयोग किए गए वाणिज्यिक उत्पाद में उत्पाद में मिश्रित सेल्यूलोज सामग्री भी थी, जिससे निकोटीनामाइड राइबोस की गणना की गई एकाग्रता 34% तक कम हो गई थी। इसलिए, वर्तमान अध्ययन में, 500 और 1,000 mM निकोटिनामाइड राइबोसाइड के साथ इंजेक्ट किए गए हैच किए गए चूजों से पेक्टोरलिस प्रमुख मांसपेशियों का वजन क्रमशः 15 और 10% द्वारा 0 mM निकोटिनामाइड राइबोसाइड के साथ इंजेक्ट किए गए भ्रूण से चूजों की तुलना में अधिक था। यह वजन मुख्य रूप से इन उपचारों के पेक्टोरलिस प्रमुख मांसपेशियों की गहराई के कारण क्रमशः 17 और 7% की वृद्धि के कारण बढ़ गया। यह प्रतिक्रिया पिछली प्रतिक्रियाओं के आधे से भी कम थी। Xu et al.10 ने निकोटिनामाइड राइबोसाइड पूरकता, 250 से 1,000 mM सांद्रता की सूचना दी, मांसपेशियों की लंबाई, चौड़ाई और गहराई में वृद्धि के कारण पेक्टोरलिस प्रमुख मांसपेशियों के वजन में 35% की वृद्धि हुई। जबकि कम प्रतिक्रिया मुख्य रूप से गणना की तुलना में कम निकोटिनामाइड राइबोसाइड के पूरक के कारण हो सकती है, यह भी अज्ञात है कि सेल्यूलोज सामग्री मायोजेनेसिस में बाधा डालती है या नहीं। इसलिए, लेखकों ने सिफारिश की कि सभी भविष्य के शोध शुद्ध निकोटिनामाइड राइबोसाइड का उपयोग करें और व्यावसायिक रूप से उपलब्ध उत्पादों का उपयोग न करें।
वर्तमान परिणामों के बावजूद, इस प्रकाशन में उल्लिखित तरीकों का पालन करने से ओवो फीडिंग अध्ययनों में मजबूत निष्पादन सुनिश्चित होगा। भविष्य के शोधकर्ता अन्य यौगिकों का परीक्षण करने के लिए उपरोक्त तरीकों का उपयोग कर सकते हैं जो ओवो मांसपेशियों के विकास और विकास में ब्रॉयलर चिकन को सकारात्मक रूप से प्रभावित कर सकते हैं।
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Disclosures
लेखकों के पास घोषित करने के लिए हितों का कोई संघर्ष नहीं है।
Acknowledgments
लेखक अंडे के दान के लिए कोब वेंट्रेस, इंक को धन्यवाद देना चाहते हैं और अंडे के इनक्यूबेशन पर तकनीकी सहायता प्रदान करते हैं। लेखकों को ChromaDex, Inc. निकोटिनामाइड राइबोसाइड तकनीकी सहायता के लिए धन्यवाद देना चाहते हैं.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Air-Tite™ Sterile Hypodermic Needles- 20 G; 1 inch | Fisher Scientific | 14-817-208 | https://www.fishersci.com/shop/products/sterile-hypodermic-needles-32/p-7182916#?keyword= |
| Analytical Balance | VWR | VWR-214B2 | https://us.vwr.com/store/product/20970740/vwr-b2-series-analytical-and-precision-balances |
| Complete Dissection Set | DOCAZON | DK1001 | https://www.amazon.com/DOCAZON-Complete-Dissection-Set-Dissecting/dp/B07VBHKSW3 |
| Fisherbrand™ Isotemp™ General Purpose Deluxe Water Baths | Fisher Scientific | FSGPD02 | https://www.fishersci.com/shop/products/isotemp-general-purpose-water-baths/p-6448020 |
| Fisherbrand™ Sterile Syringes for Single Use | Fisher Scientific | 14-955-464 | https://www.fishersci.com/shop/products/sterile-syringes-single-use-12/p-7114739#?keyword= |
| HIGH INTENSITY EGG CANDLER | Titan Incubators | N/A | https://www.titanincubators.com/collections/egg-candlers/products/egg-candler-high-intensity |
| Infrared Forehead Thermometer | HALIDODO | XZ-001 | |
| Microsoft Excel | Microsoft | N/A | |
| Neiko Tools Digital Caliper | Neiko Tools | 01408A | https://www.amazon.com/Neiko-01407A-Electronic-Digital-Stainless/dp/B000NEA0P8?th=1 |
| Nexcare Absolute Waterproof Tape | Nexcare Brand | 732 | https://www.nexcare.com/3M/en_US/nexcare/products/catalog/~/Nexcare-Absolute-Waterproof-Tape/?N=4326+3294529207+3294631805 &rt=rud |
| Pen Size Temperature and Humidity USB Data Logger with Display | Omega | OM-HL-SP-TH | https://www.omega.com/en-us/temperature-measurement/temperature-and-humidity-data-loggers/p/OM-HL-SP-Series |
| SAS 9.4 for Windows | SAS Institute | N/A | https://www.sas.com/en_us/home.html |
| Sportsman 1502 Incubator | GQF Manufacturing | 1502 | https://www.gqfmfg.com/item/1502-digital-sportsman/ |
| Tru Niagen (Nicotinamide riboside) | ChromaDex, Inc. | N/A | https://www.truniagen.com/truniagen-300mg/ - note, contact company for pure product |
| Wood Craft Sticks | Creatology | M20001547 | https://www.michaels.com/wood-craft-sticks-by-creatology/M20001547.html |
References
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