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Neuroscience

थेइलर के मुराइन एन्सेफैलोमाइलाइटिस वायरस का उपयोग करके संक्रामक एटियलजि के मिर्गी के लिए एक मॉडल

Published: June 23, 2022 doi: 10.3791/63673
Automatic Translation
1, 1, 1,2, 3, 1,2, 3
1Department of Pharmacology and Toxicology, University of Utah, 2Interdepartmental Program in Neuroscience, University of Utah, 3Faculty of Veterinary Medicine, Institute of Pharmacology and Toxicology, Freie Universität Berlin

Summary

सी 57बीएल /6 चूहों में थेइलर के मुराइन एन्सेफैलोमाइलाइटिस वायरस (टीएमईवी) के साथ इंट्रासेरेब्रल संक्रमण मानव रोगियों में वायरल एन्सेफलाइटिस और बाद में मिर्गी के कई शुरुआती और पुराने नैदानिक लक्षणों को दोहराता है। यह पेपर टीएमईवी मॉडल के वायरस संक्रमण, लक्षण और हिस्टोपैथोलॉजी का वर्णन करता है।

Abstract

मिर्गी के मुख्य कारणों में से एक केंद्रीय तंत्रिका तंत्र (सीएनएस) का संक्रमण है; इस तरह के संक्रमण से बचने वाले लगभग 8% रोगी परिणामस्वरूप मिर्गी विकसित करते हैं, कम आर्थिक रूप से विकसित देशों में दर काफी अधिक होती है। यह काम संक्रामक एटियलजि के मिर्गी मॉडलिंग का अवलोकन प्रदान करता है और इसे उपन्यास एंटीसेज़्योर यौगिक परीक्षण के लिए एक मंच के रूप में उपयोग करता है। सी 57बीएल /6 चूहों में थीइलर के मुराइन एन्सेफैलोमाइलाइटिस वायरस (टीएमईवी) के गैर-स्टीरियोटैक्टिक इंट्रासेरेब्रल इंजेक्शन द्वारा मिर्गी प्रेरण का एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत किया गया है, जो मानव रोगियों में वायरल एन्सेफलाइटिस और बाद में मिर्गी के कई शुरुआती और पुराने नैदानिक लक्षणों को दोहराता है। जब्ती गतिविधि की निगरानी करने और नए यौगिकों के संभावित एंटीसेज़्योर प्रभावों का पता लगाने के लिए एन्सेफलाइटिस के दौरान चूहों का नैदानिक मूल्यांकन वर्णित है। इसके अलावा, वायरल एन्सेफलाइटिस और हिप्पोकैम्पल क्षति और न्यूरोइन्फ्लेमेशन जैसे दौरे के हिस्टोपैथोलॉजिकल परिणाम दिखाए जाते हैं, साथ ही साथ सहज मिर्गी के दौरे जैसे दीर्घकालिक परिणाम भी दिखाए जाते हैं। टीएमईवी मॉडल सीएनएस संक्रमण के परिणामस्वरूप मिर्गी के विकास के तंत्र की जांच की अनुमति देने के लिए पहले ट्रांसलेशनल, संक्रमण-संचालित, प्रयोगात्मक प्लेटफार्मों में से एक है। इस प्रकार, यह सीएनएस संक्रमण के बाद मिर्गी के विकास के जोखिम वाले रोगियों के लिए संभावित चिकित्सीय लक्ष्यों और यौगिकों की पहचान करने का भी कार्य करता है।

Introduction

वायरल एन्सेफलाइटिस के लगातार परिणामों में से एक मिर्गी के दौरे हैं। कई वायरल संक्रमण संक्रमण के तीव्र चरण के दौरान रोगसूचक दौरे को ट्रिगर करते हैं; आम जनता के बीच इस तरह के दौरे का जोखिम 20% से अधिक बढ़ जाता है 1,2,3. संक्रमण से बचने वाले रोगियों में संक्रमण 1,4 के बाद महीनों से वर्षों में पुरानी मिर्गी के विकास का 4% -20% का खतरा बढ़ जाता है। वायरल एन्सेफलाइटिस 5,6,7 के माउस मॉडल में तीव्र और पुरानी बरामदगी का अध्ययन करने के लिए थेइलर के मुराइन एन्सेफलोमाइलाइटिस वायरस (टीएमईवी) को एक उपयुक्त वायरस के रूप में पहचाना गया है। टीएमईवी पिकोर्नविरिडे परिवार का एक गैर-आवरण, सकारात्मक-भावना, एकल-फंसे आरएनए वायरस है और पारंपरिक रूप से एसजेएल चूहों की रीढ़ की हड्डी में डिमाइलिनेशन का अध्ययन करने के लिए उपयोग किया जाता है, जिससे सी 57बीएल / 6 (बी 6) चूहों को बचाया जाता है क्योंकि उनके पास संक्रमण के बाद वायरस को तेजी से साफ करने की क्षमता होती है। हालांकि, टीएमईवी पहले सप्ताह के भीतर पुरुष और महिला बी 6 चूहों के 50% -75% में तीव्र दौरे को प्रेरित करता है, जबकि लगभग 25% -40% पुरानी मिर्गी के हफ्तों से लेकर महीनोंतक 2,5,6,8,9 तक विकसित करते हैं। दौरे के अलावा, चूहे न्यूरोडीजेनेरेशन और ग्लिओसिस 5,6,8,10,11,12 के साथ मिर्गी हिप्पोकैम्पस की सामान्य हिस्टोपैथोलॉजी भी प्रदर्शित करते हैं। इसके अलावा, टीएमईवी-संक्रमित बी 6 चूहे सीखने और स्मृति के लिए व्यवहार परीक्षणों में काफी खराब प्रदर्शन करते हैं और संज्ञानात्मक कोमोर्बिडिटी होती है, जो मिर्गी13,14,15 के नैदानिक रोगियों में भी देखी जाती है।

परंपरागत रूप से, मिर्गी और दौरे के मॉडल या तो केमोकोनवल्सेंट पदार्थों के आवेदन या दौरे को प्रेरित करने के लिए विद्युत उत्तेजना का उपयोग करते हैं; हालांकि, इन मॉडलों में निर्माण वैधता की कमी होती है और अक्सर नैदानिक रोगियों की तुलना में अधिक गंभीर दौरे और मस्तिष्क क्षति प्रदर्शित होतीहै। ऐसा कोई मॉडल नहीं है जो प्रत्येक शोध प्रश्न17 के लिए उपयुक्त हो। टीएमईवी मॉडल का उपयोग करना विशेष रूप से दिलचस्प है यदि सीएनएस के संक्रमण के बाद जब्ती विकास के पूर्ववर्ती कारकों पर शोध किया जाता है या यदि यौगिकों को उनकी एंटीसेज़्योर दक्षता के लिए जांच की जाती है।

चूंकि टीएमईवी मॉडल को अंतरराष्ट्रीय स्तर पर कई अलग-अलग प्रयोगशालाओं में स्थापित और उपयोग किया गया है, लेखकों ने कई विवरणों की पहचान की है जो मॉडल के सफल कार्यान्वयन की अनुमति देते हैं, उदाहरण के लिए, विभिन्न वायरस और माउस उपभेदों की विशिष्टता। सबसे विश्वसनीय जब्ती प्रेरण टीएमईवी और बी 6 जे चूहों 2,5,6,8,9 के डैनियल के तनाव के साथ उत्पन्न हुआ था। मॉडल वर्तमान में नेशनल इंस्टीट्यूट ऑफ न्यूरोलॉजिकल डिसऑर्डर एंड स्ट्रोक (एनआईएनडीएस) द्वारा मिर्गी और दौरे के खिलाफ नई दवाओं की पहचान करने के लिए एक मंच के रूप में उपयोगकिया जाता है। इस पेपर में वायरस प्रेरण और नैदानिक निगरानी के विस्तृत प्रोटोकॉल शामिल हैं ताकि अन्य शोधकर्ताओं को रोग तंत्र की समझ को आगे बढ़ाने के साथ-साथ दवा परीक्षण के लिए वायरल एन्सेफलाइटिस के इस मॉडल का उपयोग करने की अनुमति मिल सके।

निम्नलिखित प्रोटोकॉल इस मॉडल में यौगिक परीक्षण के लिए डिज़ाइन किए गए एक अध्ययन को दर्शाता है, हालांकि कई अन्य प्रकार के अध्ययन किए जा सकते हैं। चूहों को दाहिने गोलार्ध के अस्थायी क्षेत्र (दाईं आंख के पीछे और औसत दर्जे) में टीएमईवी के डैनियल के तनाव के साथ इंजेक्शन से पहले संक्षेप में एनेस्थेटाइज किया जाता है। शोध प्रश्न के आधार पर, यदि गैर-संक्रमित नियंत्रण जानवरों की आवश्यकता होती है, तो चूहों को टीएमईवी के बजाय बाँझ फॉस्फेट-बफर्ड खारा (पीबीएस, पीएच7.4, केएच2पीओ 4 [1.06 एमएम], एनएसीएल [155.17 एमएम], और एनए2एचपीओ4.7 एच2ओ [2.97 एमएम]) प्राप्त होता है। टीएमईवी-संक्रमित चूहों में पिछले अनुभव ने संकेत दिया है कि हैंडलिंग-प्रेरित दौरे संक्रमण के दिन 3 और दिन 7 के बीच होते हैं। इंजेक्शन की आवृत्ति, मार्ग और प्रयोगात्मक यौगिकों के परीक्षण का समय उनके गुणों के अनुसार भिन्न होता है। शुक्रवार को वायरस टीकाकरण करने की सिफारिश की जाती है, जो अगले सप्ताह, सोमवार-शुक्रवार को दिन 3-7 जब्ती निगरानी करने की अनुमति देता है। जब्ती निगरानी सप्ताह के दौरान, प्रयोगात्मक यौगिकों को दिन में दो बार (कम से कम 4 घंटे अलग) प्रशासित किया जा सकता है जब तक कि यौगिक के कैनेटीक्स या कार्रवाई के तंत्र द्वारा अन्यथा सुझाव नहीं दिया जाता है। उपचार के दौरान जब्ती निगरानी पहले से निर्धारित समय बिंदु पर की जा सकती है। इंजेक्शन और अवलोकन समय अलग-अलग यौगिकों के आधार पर भिन्न होते हैं। जानवरों को परीक्षण यौगिक के साथ या दवा यौगिक के बदले एक वाहन के साथ इंजेक्शन दिया जाता है। इन दो समूहों को प्रयोगात्मक समूह के अनुरूप संभाला और देखा जा सकता है। प्रयोग के दौरान, चूहों को संभालने और दौरे को स्कोर करने वाले एक व्यक्ति को उपचार के लिए अंधा कर दिया जाना चाहिए।

Protocol

सभी वर्णित प्रक्रियाओं को संबंधित अधिकारियों द्वारा अधिकृत किया गया था। जानवरों को "प्रयोगशाला जानवरों की देखभाल और उपयोग के लिए गाइड" (राष्ट्रीय अनुसंधान परिषद) और सार्वजनिक स्वास्थ्य सेवा नीति और यूटा विश्वविद्यालय में संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति, पशु प्रोटोकॉल (संख्या: 21-11009, फार्माकोलॉजी और विष विज्ञान विभाग) और फ्री यूनिवर्सिटी बर्लिन (प्रोटोकॉल: जी 0015/21) में सिफारिशों के बाद बनाए रखा जाता है। LAGeSo Berlin, फार्माकोलॉजी और विष विज्ञान संस्थान, क्रमशः। चित्रा 3 और चित्रा 5 में दिखाए गए परिणामों को 33.9-42502-04-11/0516 और 33.9-42502-04-15/1892 (लावेस ओल्डेनबर्ग, फार्माकोलॉजी, विष विज्ञान और फार्मेसी विभाग, पशु चिकित्सा हनोवर विश्वविद्यालय) के तहत अनुमोदित किया गया था।

1. अध्ययन को डिजाइन करने के लिए विचार और तैयारी

  1. वायरस
    1. टीएमईवी के डैनियल के तनाव को यूटा विश्वविद्यालय के रॉबर्ट फुजीनामी द्वारा प्रदान किया गया था। मूल रूप से, इसे हार्वर्ड कॉलोनी20 में एक माउस से अलग किया गया था। टीएमईवी को संभालने से पहले संबंधित देशों में जैविक एजेंटों के लिए विशिष्ट वर्गीकरण और नियमों को देखें, और नियमों के अनुपालन को सुनिश्चित करने के लिए संस्थागत जैव सुरक्षा कर्मियों के साथ चर्चा करें। आमतौर पर, तनाव और आनुवंशिक संशोधनों के आधार पर टीएमईवी को बीएसएल 2 के रूप में वर्गीकृत किया जाता है। अधिकांश जानवरों में दौरे को प्रेरित करने के लिए आवश्यक मानक खुराक 3 x 105 पट्टिका बनाने वाली इकाइयां (पीएफयू) है।
      नोट: खुराक को अनुकूलित करना पड़ सकता है, उदाहरण के लिए, यदि ट्रांसजेनिक चूहों का उपयोग किया जाता है। कुल मिलाकर, बरामदगी को सफलतापूर्वक प्रेरित करने के लिए 2 x 104 PFU और 2.44 x 107 PFU के बीच टिटर्स का उपयोग किया गया है। नियंत्रण जानवर बाँझ पीबीएस प्राप्त करते हैं और दौरे का अनुभव नहीं करते हैं। वायरस मनुष्यों को संक्रमित नहीं करता है; हालांकि, पीपीई (लैब कोट, दस्ताने, सुरक्षा चश्मा) को हर समय प्रयोगकर्ताओं द्वारा पहना जाना चाहिए, और निपटान से पहले माउस शवों और बिस्तर को आटोक्लेव किया जाना चाहिए।
  2. जीवधारी
    1. बरामदगी को प्रेरित करने और जांच करने के लिए, बी 6 जे चूहों का उपयोग करें, क्योंकि अन्य माउस उपभेद जरूरी दौरे प्रदर्शित नहीं करते हैं, जैसे, एसजेएल / जे, एफवीबी / एन, या बाल्ब / सी चूहे5। तीव्र जब्ती आवृत्ति5 में मादा और पुरुष चूहों के बीच कोई अंतर नहीं है। किशोर से वयस्क चूहों (5-6 सप्ताह की उम्र से शुरू) पर प्रयोग करें।
  3. आहार
    1. आहार को रोग की गंभीरता में प्रयोगशाला-से-प्रयोगशाला परिवर्तनशीलता के एक स्रोत के रूप में निर्धारित किया गया है; इसलिए, आहार को भिन्नता के लिए एक संभावित कारक के रूप में विचार करें।
  4. समूह का आकार
    1. चूंकि सभी जानवर इस मॉडल में तीव्र या पुरानी दौरे विकसित नहीं करते हैं, इसलिए यौगिक परीक्षण के लिए लगभग 20 चूहों / समूह का उपयोग करें।
  5. पशु कल्याण
    1. यदि कोई माउस स्थानीय आईएसीयूसी दिशानिर्देशों (जैसे, 48 घंटे) द्वारा निर्धारित अवलोकन समय के बाद जांच यौगिक के संक्रमण या प्रशासन से महत्वपूर्ण प्रतिकूल प्रभाव प्रदर्शित करता है (उदाहरण के लिए, सुस्ती, खराब ग्रूमिंग, अत्यधिक लालिमा, और घाव से शुद्ध निर्वहन), तो माउस को मानवीय रूप से इच्छामृत्यु दें।
    2. संक्रमण अवधि के दौरान अत्यधिक शरीर के वजन घटाने (>20%) का प्रदर्शन करने वाले किसी भी माउस को मानवीय रूप से इच्छामृत्यु करें।
    3. यदि जानवर ठीक से नहीं खाते हैं, तो उन्हें बाल चिकित्सा इलेक्ट्रोलाइट समाधान या इसी तरह से नम पूरक छर्रों तक पहुंच दें।

2. वायरस टीकाकरण

  1. इंजेक्शन सिरिंज की नसबंदी
    1. इंसुलिन सिरिंज की टोपी हटा दें। 2.5 मिमी की पर्याप्त इंजेक्शन गहराई सुनिश्चित करने के लिए सुई के चारों ओर कॉलर के रूप में पॉलीथीन टयूबिंग जोड़ें। सिरिंज को इथेनॉल में 30 मिनट के लिए डुबोएं। सिरिंज को 30 मिनट के लिए यूवी प्रकाश के नीचे रखें।
    2. टोपी को वापस सुई पर रखो। सिरिंज को एक स्टरलाइज़िंग थैली में लपेटें और इसे बंद कर दें। तैयारी की तारीख के साथ लेबल करें।
  2. वायरस इंजेक्शन
    1. -80 डिग्री सेल्सियस फ्रीजर से टीएमईवी के डैनियल के तनाव के एलिकोट प्राप्त करें। वायरस को पिघलाएं और इसे बर्फ पर रखें। वायरस को पिघलाने और फिर से फ्रीज करने से बचें। वायरस निलंबन के साथ सिरिंज लोड करें (3 x 105 पीएफयू पीबीएस या डीएमईएम संस्कृति माध्यम के 20 μL में पतला)।
      चेतावनी: वायरस चूहों के लिए संक्रामक है लेकिन मनुष्यों के लिए नहीं।
    2. बेंच को कीटाणुनाशक से साफ करें और फ्यूम अवशोषक के तहत काम करें। वायरस टीकाकरण बाँझ नहीं है, लेकिन जितना संभव हो उतना साफ है।
    3. माउस को संज्ञाहरण प्रेरण कक्ष में स्थानांतरित करें, और संज्ञाहरण को प्रेरित करने के लिए ऑक्सीजन में 2% आइसोफ्लुरेन का उपयोग करें। सर्जिकल सहिष्णुता तक पहुंचने में कुछ मिनट लगते हैं; पशु की श्वास और संज्ञाहरण की गहराई के आधार पर एकाग्रता को समायोजित करें।
    4. एनेस्थेटाइज्ड माउस को हुड के नीचे संज्ञाहरण बॉक्स से स्थानांतरित करें। सर्जिकल सहिष्णुता की जांच करें, उदाहरण के लिए, पैर की अंगुली चुटकी द्वारा। पूरी प्रक्रिया 30 सेकंड से कम समय में की जाती है, इसलिए जानवर को इंजेक्शन के दौरान आइसोफ्लुरेन को सांस लेने की आवश्यकता नहीं होती है। कॉर्निया को सूखने से रोकने के लिए आंखों का मलहम जोड़ें।
    5. शराब पैड के साथ जानवर के सिर को साफ करें। माउस के सिर को बाईं ओर थोड़ा झुकाएं ताकि इंजेक्शन साइट ऊपर की ओर इशारा कर रही हो।
    6. त्वचा को थोड़ा पीछे की ओर खींचें, सुई को सिर में डालें, और दाएं गोलार्ध के अस्थायी क्षेत्र (दाईं आंख के पीछे और औसत दर्जे) में 2.5 मिमी की गहराई तक 20 μL इंजेक्ट करें।
    7. सभी जानवरों में एक ही गोलार्ध में एकतरफा इंजेक्शन करें। पार्श्विका प्रांतस्था के स्थान के लिए मील के पत्थर के रूप में आंख और कान का उपयोग करें। प्लेसमेंट को पहले हिस्टोलॉजिकल रूप से सत्यापित किया गया है; चित्र 1 देखें। ब्रेग्मा के संबंध में स्टीरियोटेक्सिक इंजेक्शन के अनुसार इंजेक्शन निर्देशांक -2.0 (एपी) हैं; +3.0 (एमएल); -1.5 (डीवी)।
    8. सिरिंज को 5-15 सेकंड के लिए छोड़ दें। यदि इंजेक्शन से कोई रिसाव होता है या यदि हवा के बुलबुले दिखाई देते हैं तो लिखें - उस स्थिति में, एक नई सिरिंज तैयार करें। सिरिंज को ध्यान से खींचते समय, इसे थोड़ा घुमाएं। एनेस्थीसिया के तहत सूखापन को रोकने के लिए आंखों का मलहम लगाएं।
    9. वैकल्पिक: स्थानीय प्रक्रियाओं के आधार पर पूंछ या कान पर जानवर को कोड करें (वैकल्पिक लेकिन आसान क्योंकि जानवर बेहोश है)।
    10. जानवर को एक नए पिंजरे में स्थानांतरित करें, जिसे संज्ञाहरण से वसूली के दौरान हीटिंग पैड (35-40 डिग्री सेल्सियस) पर आधा-आधा रखा जाता है। जानवरों को तब तक लावारिस न छोड़ें जब तक कि वे उरोस्थि पुनरावृत्ति बनाए रखने के लिए पर्याप्त चेतना प्राप्त न कर लें।
      नोट: जानवरों को ठीक होने के बाद फिर से समूह में रखा जा सकता है (संक्रमित जानवरों को नकली संक्रमित जानवरों के साथ नहीं मिलाया जाता है)। संक्रमित चूहों को गैर-संक्रमित चूहों के समान कमरे में नहीं रखा जाना चाहिए।
    11. पहले 7 दिनों के लिए चूहों के वजन का ट्रैक रखें क्योंकि वे संक्रमण के बाद वजन कम करते हैं और अतिरिक्त भोजन की आवश्यकता हो सकती है।

Figure 1
चित्रा 1: टीएमईवी इंजेक्शन प्रक्रिया का योजनाबद्ध। बाएं से दाएं: दाएं पार्श्विका कॉर्टेक्स इंजेक्शन के लिए, सुई को आंख और विपरीत कान के बीच एक काल्पनिक रेखा के थोड़ा पार्श्व में इंजेक्ट किया जाता है। गहराई नियंत्रण के लिए कॉलर पीले रंग में इंगित किया गया है। इंजेक्शन पथ को कोरोनल मस्तिष्क अनुभाग में देखा जा सकता है, जिसे तीर द्वारा चिह्नित किया गया है। इंजेक्शन साइट तीर के ऊपर दिए गए निर्देशांक से मेल खाती है। सही छवि हिप्पोकैम्पल गठन के सीए 1 के भीतर थीलर वायरस (वायलेट) के वितरण को दर्शाती है। यह आंकड़ा biorender.com का उपयोग करके तैयार किया गया था। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

3. यौगिक परीक्षण

  1. यौगिक तैयारी
    1. सूत्रीकरण निर्देशों की समीक्षा करें। सिफारिशों या प्रदान किए गए निर्देशों के अनुसार वाहन समाधान तैयार करें। एक उदाहरण के रूप में, एंटीपीलेप्टिक दवा लेवेटिरैसिटाम (एलईवी) के लिए प्रक्रिया प्रस्तुत की गई है। लेव 350 मिलीग्राम / किग्रा की खुराक पर वाहन के स्तर के 30% -40% तक जब्ती बोझ को कम करता है। इस अध्ययन में उपयोग किया जाने वाला वाहन 0.5% मिथाइलसेल्यूलोज है।
    2. यौगिक के आधार पर खुराक की गणना करें। गणना के अनुसार दवा का वजन करें। 1 किलो चूहों के इलाज के लिए, 350 मिलीग्राम एलईवी का वजन करें।
    3. वाहन समाधान की उचित मात्रा के साथ एक स्टॉक समाधान तैयार करें, जैसा कि सूत्रीकरण निर्देशों (जैसे, सोनिकेशन, वाहन एक्सिपिएंट, आदि) द्वारा निर्देशित किया गया है। माउस के 0.01 एमएल / जी की इंजेक्शन मात्रा को ध्यान में रखते हुए, 1 किलोग्राम के लिए इंजेक्शन की मात्रा 350 मिलीग्राम एलईवी के साथ 10 एमएल होगी, जिसके परिणामस्वरूप 35 मिलीग्राम / एमएल19 का समाधान होगा। गणना और खुराक मिलीग्राम / किग्रा में और एमएल में मात्रा की रिपोर्ट करें।
      नोट: पूरक सामग्री 1 के पृष्ठ 2 पर एक अनुकरणीय प्रोटोकॉल पाया जा सकता है।
  2. यौगिक प्रशासन
    1. वाहन या यौगिक समूह के लिए पिंजरों को यादृच्छिक करें। मिर्गी के विकास के तंत्र पर अध्ययन के लिए या सत्यापन उद्देश्यों के लिए नकली संक्रमित चूहों का उपयोग करें लेकिन नियमित दवा स्क्रीनिंग के लिए नहीं।
    2. तापमान, आर्द्रता, दिन का समय आदि जैसे पर्यावरण की स्थिति की रिपोर्ट करें।
    3. भंवर यौगिक के साथ-साथ वाहन समाधान के साथ समाधान। वाहन या यौगिक को सिरिंज में एस्पिरेट करें और मिश्रण को रोकने के लिए सिरिंज को कलर कोड करें।
    4. जानवरों का वजन करें। सुनिश्चित करें कि बी 6 जे चूहों को दिन 3 पाई (गोल नहीं) पर >18 ग्राम है। वजन की रिपोर्ट करें।
    5. यौगिक का प्रशासन करें (उदाहरण के लिए, इंट्रापरिटोनियल इंजेक्शन या अन्य उपयुक्त मार्गों द्वारा)। प्रशासन का समय और मार्ग लिखिए।
    6. यौगिक प्रशासन के बाद किसी भी व्यवहार परिवर्तन के लिए जानवरों की निगरानी करें, खासकर पहले इंजेक्शन के बाद। यदि दौरे होते हैं, तो रेसीन स्केल23 के अनुसार जब्ती की तीव्रता की रिपोर्ट करें; चरण 3.2 देखें।
      नोट: यौगिक प्रशासन के लिए एक अनुकरणीय प्रोटोकॉल पूरक सामग्री 1, पृष्ठ 3 में पाया जा सकता है, जबकि प्रशासन के दौरान देखी गई बरामदगी पूरक सामग्री 1, पृष्ठ 4-5 पर दर्ज की जाएगी।
  3. हैंडलिंग-प्रेरित बरामदगी की जब्ती निगरानी
    1. उपचार के लिए अंधे प्रयोगकर्ता द्वारा इस प्रक्रिया को करें। सभी पिंजरों को बेंच पर लाओ। प्रकाश चरण के दौरान प्रतिदिन 2x दौरे के लिए जानवरों का निरीक्षण करें।
    2. एक संशोधित रैसीन स्केल23: 0 = व्यवहार में कोई बदलाव नहीं, 1 = मुंह और चेहरे की गति, 2 = सिर हिलाना, 3 = एकतरफा फोरलिम्ब क्लोनस, 4 = पालन के साथ द्विपक्षीय फोरलिम्ब क्लोनस, 5 = पोस्टुरल टोन की हानि के साथ सामान्यीकृत टॉनिक-क्लोनिक गतिविधि, कभी-कभी कूदना, 6 = लंबे समय तक और अत्यधिक कूदना और अति सक्रियता। बरामदगी की संख्या और तीव्रता की रिपोर्ट करें।
    3. कुछ शोर मचाने के लिए पिंजरे के पार एक पेन स्लाइड करें।
    4. प्रत्येक जानवर को दूसरे बॉक्स में और वापस स्थानांतरित करें।
    5. धीरे-धीरे आगे-पीछे की गति का उपयोग करके पिंजरे को हिलाएं, इस बात का ध्यान रखें कि पिंजरे को इतनी जोर से न हिलाएं कि जानवर पिंजरे के किनारों या शीर्ष से टकराएंगे और शारीरिक चोट लगने का खतरा है।
    6. दौरे के लिए पिंजरे में सभी जानवरों की निगरानी करें। किसी भी समय, यदि किसी माउस को दौरा पड़ता है, तो इसे घर के पिंजरे में वापस स्थानांतरित करें और शोर या हैंडलिंग द्वारा आगे जब्ती उत्तेजना के बिना जब्ती के स्तर को लिखें।
    7. उन जानवरों के लिए जिन्होंने अनायास या कोमल पिंजरे के झटकों के बाद जब्त नहीं किया है, अधिक तीव्र हैंडलिंग द्वारा दौरे को ट्रिगर करें: सावधानीपूर्वक माउस को बाएं से दाएं अपनी पूंछ पर पलटकर घुमाएं।
      नोट: दौरे वाले जानवर अतिउत्तेजित होते हैं, और उछल-कूद कर सकते हैं।
    8. जब्ती व्यवहार के लिए प्रत्येक जानवर को फिर से देखें। बाद के पिंजरों के लिए प्रक्रिया दोहराएं।
      नोट: जब्ती निगरानी के लिए एक अनुकरणीय प्रोटोकॉल पूरक सामग्री 1, पृष्ठ 6-7 में पाया जा सकता है।
  4. यौगिक प्रभावों पर डेटा रिपोर्ट
    1. दोहराए गए उपायों (आरएम) एनोवा का उपयोग करके दैनिक शरीर के वजन का विश्लेषण करें।
    2. डेटा के ग्राफिकल प्रतिनिधित्व के लिए दैनिक संचयी जब्ती बोझ मानों का उपयोग करें। प्रभावकारिता डेटा (बिना रेसीन चरण 3-5 दौरे वाले जानवरों की संख्या) को प्रत्येक संबंधित समूह (आमतौर पर एन = 20) में संरक्षित संख्या / परीक्षण की गई संख्या के रूप में प्रस्तुत करें। इसलिए, फिशर के सटीक परीक्षण का उपयोग करके प्रतिक्रियाओं (जब्त या गैर-जब्ती) के लिए वाहन- और नशीली दवाओं के इलाज वाले समूहों के बीच डेटा की तुलना करें।
      नोट: एक जानवर को दौरे से "संरक्षित" माना जाता है यदि चरण 2 या उससे कम का दौरा पड़ता है और गैर-संरक्षित जानवरों को चरण 3-5 के दौरे पड़ते हैं।
    3. सहनशीलता डेटा का विश्लेषण इसी तरह करें, जैसे कि व्यवहार संबंधी हानि या विषाक्त प्रभाव वाले जानवरों की संख्या / प्रत्येक समूह में परीक्षण की गई संख्या। मौतों सहित किसी भी प्रतिकूल प्रभाव पर ध्यान दें।
    4. यदि वाहन के साथ इंजेक्ट किए गए चूहों में से 50% से कम तीव्र रूप से जब्त हो जाते हैं, तो डेटा पर विचार न करें।

Representative Results

तीव्र दौरे पर यौगिक प्रभाव
व्यवहार संबंधी दौरे दर्ज किए जाते हैं यदि वे ड्रग इंजेक्शन (डीआई) के दौरान या बाद के एएम / पीएम जब्ती हैंडलिंग / निगरानी सत्रों के दौरान होते हैं। बरामदगी से निपटने के दौरान देखे गए दौरे को गर्मी मानचित्र के रूप में प्रस्तुत किया जा सकता है, जिसे एलईवी (350 मिलीग्राम / किग्रा) के लिए चित्रा 2 में दिखाया गया है। जब्ती बोझ के विश्लेषण के लिए, वाहन-उपचारित समूह के लिए अंतिम (दिन 7) संचयी जब्ती बोझ मूल्यों का औसत लिया जाता है और मान-व्हिटनी यू परीक्षण द्वारा यौगिक उपचारित समूह से तुलना की जाती है (जब्ती बोझ मूल्यों में इंजेक्शन के बाद के अवलोकन में एकत्र किए गए शामिल हैं)। यौगिक प्रभावकारिता के लिए, फिशर का सटीक परीक्षण यह निर्धारित करता है कि वाहन- और दवा-उपचारित समूहों के बीच प्रभावकारिता में सांख्यिकीय अंतर है या नहीं। इसी तरह, फिशर के सटीक परीक्षण के साथ सहनशीलता डेटा का विश्लेषण किया जाता है। प्रयोग के दौरान परिवर्तनों को निर्धारित करने के लिए बॉडीवेट विश्लेषण एनोवा को बार-बार मापकर किया जाता है, साथ ही यौगिक- और वाहन-उपचारित चूहों के बीच अंतर भी।

Figure 2
चित्रा 2: वाहन (0.5% मिथाइलसेल्यूलोज) या एलईवी (350 मिलीग्राम / किग्रा) के साथ परीक्षण के बाद व्यवहार संबंधी दौरे का एक गर्मी मानचित्र। हैंडलिंग और जब्ती अवलोकन से 1 घंटे पहले दो बार दैनिक इंजेक्शन हुए। व्यवहार संबंधी दौरे दर्ज किए गए थे यदि वे ड्रग इंजेक्शन (डीआई) के दौरान या बाद में एएम / पीएम जब्ती हैंडलिंग / निगरानी सत्रों के दौरान हुए थे। लेव (350 मिलीग्राम / किग्रा) 5 दिन की अवलोकन अवधि में हैंडलिंग सत्र (वाहन जब्ती बोझ का 35.9%) के दौरान देखे गए दौरे को काफी कम कर देता है। गर्मी का नक्शा हरे रंग में चरण 1-3, पीले रंग में 4 और नारंगी में 5 को चित्रित करके बनाया गया है। यह नया आंकड़ा प्रकाशित डेटासेट19 से बनाया गया था। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

पुरानी मिर्गी
पहले सप्ताह पाई में रिपोर्ट किए गए जब्ती बोझ के अलावा, कई रीडआउट हैं जो अध्ययन और परिकल्पना के आधार पर उपयोगी हो सकते हैं। यदि जानवरों को लंबे समय तक रखा जाता है, तो संक्रमित जानवरों का एक उप-समूह कई हफ्तों में सहज मिर्गी के दौरे विकसित करेगा, जो तीव्र दौरे की तुलना में कम बार होता है और इस प्रकार, ईईजी रिकॉर्डिंग की आवश्यकता होती है। चूहों से ईईजी रिकॉर्ड करने के लिए, इलेक्ट्रोड को स्टीरियोटैक्सिक सर्जरी24 में प्रत्यारोपित करने की आवश्यकता होती है। चित्रा 3 टीएमईवी 8 से संक्रमित चूहों में ईईजी रिकॉर्डिंग द्वारा पुराने चरण में विभिन्न मिर्गी की घटनाओं को दर्शाताहै।

Figure 3
चित्र 3: चूहों में डीए वायरस संक्रमण के बाद क्रोनिक चरण (14 सप्ताह पाई) में विशिष्ट ईईजी निशान। (ए-सी) प्रतिनिधि ईईजी घटनाएं जिनमें कोई व्यवहार मोटर सहसंबंध नहीं देखा गया था, यानी, (ए) एकल स्पाइक्स, (बी) स्पाइक क्लस्टर, (सी) के साथ-साथ एक इलेक्ट्रोग्राफिक, संभवतः फोकल जब्ती। (डी-एफ) व्यवहार संबंधी सहसंबंधों के साथ प्रतिनिधि ईईजी घटनाएं। डी में चित्रित माउस में मायोक्लोनिक स्विच ("एम" द्वारा इंगित, आंदोलन कलाकृतियों के साथ), रूढ़िवादी आंदोलनों ("हेड प्रेस" द्वारा इंगित, जब माउस ने सिर को जमीन पर सपाट रूप से दबाया), या व्यवहार गिरफ्तारी के साथ जब्ती जैसी घटनाएं थीं; "एससीआर" खरोंच के एक आंदोलन विरूपण साक्ष्य का वर्णन करता है, (ई) और (एफ) सामान्यीकृत स्वास्थ्य दौरे के दौरान विशिष्ट ईईजी परिवर्तन दिखाते हैं: (ई) 22 एस और 1 हर्ट्ज की अवधि के साथ एक रेसीन चरण 3 जब्ती, और (एफ) 34 एस और 5.4 हर्ट्ज की अवधि के साथ चरण 5 दौरे। यह आंकड़ा8 से पहले प्रकाशित किया गया है और एल्सेवियर की अनुमति से पुनर्मुद्रित किया गया है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

प्रोटोकॉल
चूंकि मिर्गी और दौरे आमतौर पर रोगियों में हिप्पोकैम्पल पैथोलॉजी के साथ होते हैं, जिसे प्रयोगात्मक मॉडल में पुन: परिभाषित किया जाता है, इसलिए अधिकांश प्रयोगशालाएं हिप्पोकैम्पल परिवर्तनों या पैथोलॉजी पर संभावित एंटीसेज़्योर उपचार के प्रभाव का भी विश्लेषण करती हैं। आमतौर पर विश्लेषण किए गए मापदंडों में हिप्पोकैम्पल न्यूरोडीजेनेरेशन और सिकुड़न, साथ ही विशिष्ट प्रतिरक्षा कोशिका आबादी के लिए लेबलिंग द्वारा सूजन शामिल है। इस तरह के विश्लेषणों के लिए, प्रयोग के अंत में, चूहों को गहराई से एनेस्थेटाइज किया जाता है जब तक कि श्वास गिरफ्तारी नहीं होती है और हृदय गति काफी धीमी हो जाती है या अतालता दिखाती है। ऊतक को ठीक करने के लिए पीबीएस के इंट्राकार्डियल छिड़काव द्वारा रक्त को हटा दिया जाता है, जिसके बाद 4% पैराफॉर्मलडिहाइड (पीएफए) 25 होता है। ऊतक को तब क्रायोसेक्शनिंग और (प्रतिरक्षा-) धुंधला26 द्वारा संसाधित किया जाता है, इसके बाद सूक्ष्म विश्लेषण किया जाता है।

Figure 4
(ए, बी) क्रेसिल वायलेट-सना हुआ कोरोनल सेक्शन एक (ए) नियंत्रण (पीबीएस) माउस में सामान्य साइटोआर्किटेक्चर और 2 महीने की पाई पर एक (बी) टीएमईवी माउस में हिप्पोकैम्पल अपघटन दिखाते हैं। नोट: बढ़े हुए पार्श्व वेंट्रिकल्स, एल्वस का पतन, और पिरामिड सेल परत का पतला होना। (सी) इस क्षति का परिमाणीकरण हिप्पोकैम्पल क्षेत्र में उल्लेखनीय कमी और टीएमईवी चूहों (एन = 7) बनाम पीबीएस चूहों (एन = 6) के वेंट्रिकुलर क्षेत्र में इसी वृद्धि को दर्शाता है; डेटा एसईएम ± औसत है; पी < 0.001; छात्र का टी-टेस्ट)। (D, E) न्यून लेबलिंग आगे 6 महीने पाई पर लिए गए वर्गों में न्यूरोनल सेल हानि के परिमाण को दर्शाता है। तीर पूर्ण पिरामिड सेल हानि वाले क्षेत्रों को इंगित करते हैं। (ई) डेंटेट गाइरस मिर्गी चूहों में भी अपेक्षाकृत बरकरार प्रतीत होता है। स्केल बार = (ए, बी) 2 मिमी; (डी, ई) 0.5 मिमी। यह आंकड़ा6 से पहले प्रकाशित किया गया है और ऑक्सफोर्ड यूनिवर्सिटी प्रेस की अनुमति से पुनर्मुद्रित किया गया है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 5
चित्रा 5: संक्रमण के 7 दिनों के बाद तीव्र एन्सेफलाइटिस के कारण टी सेल घुसपैठ की विभिन्न गंभीरता के प्रतिनिधि फोटोमाइक्रोग्राफ। टी-लिम्फोसाइटों को लेबल करने के लिए पृष्ठीय हिप्पोकैम्पस वाले सीरियल सेक्शन को सीडी 3 के खिलाफ एंटीबॉडी से दाग दिया गया था। (ए, डी) टी सेल घुसपैठ के बिना एक सामान्य हिप्पोकैम्पस जैसा कि यह नकली संक्रमित जानवरों में दिखाई देता है। (बी, ई) मध्यम टी सेल घुसपैठ जैसा कि टीएमईवी-संक्रमित चूहों के बहुमत में देखा जाता है। (C, F) टी लिम्फोसाइटों की एक गंभीर घुसपैठ, जो केवल कुछ संक्रमित चूहों में देखी गई थी। यह आंकड़ा8 से पहले प्रकाशित किया गया है और एल्सेवियर की अनुमति से पुनर्मुद्रित किया गया है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

पूरक फ़ाइल 1: पूरक फ़ाइल में टीएमईवी मॉडल में यौगिक परीक्षण के लिए उपयोग किया जाने वाला फॉर्म होता है। पृष्ठ 1 प्रयोगात्मक सेटअप का अवलोकन देता है। यौगिक, वाहन और यौगिक समाधान तैयार करने की जानकारी पृष्ठ 1-2 पर दर्ज की गई है। यौगिक अनुप्रयोग पृष्ठ 3 पर दर्ज किया गया है। पृष्ठ 4-5 पर स्कोरिंग शीट का उपयोग यौगिक इंजेक्शन करने वाले प्रयोगकर्ता द्वारा देखे गए और परिमाणित बरामदगी को रिकॉर्ड करने के लिए किया जाता है। पृष्ठ 4 पर, प्रत्येक 5 चूहों के पिंजरों 1-4 के लिए डेटा एकत्र किया जा सकता है, और पृष्ठ 5 पर, पिंजरों 5-8 को दर्ज किया जा सकता है, जो हमारे हाथों में यौगिक परीक्षण के लिए जानवरों की मानक संख्या है। पृष्ठ 6-7 पर स्कोरिंग शीट का उपयोग अंधे पर्यवेक्षक द्वारा किया जाता है जो प्रत्येक यौगिक इंजेक्शन के 1 घंटे बाद अवलोकन, हैंडलिंग और कोमल पिंजरे हिला रहा है। फिर, इन अनुकरणीय स्कोर शीटों पर कुल आठ पिंजरों के लिए जब्ती स्कोर नोट किया जा सकता है। अंतिम पृष्ठ 8 का उपयोग किसी भी अन्य अवलोकन या नोट्स को रिकॉर्ड करने के लिए किया जा सकता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Discussion

यह मिर्गी के लिए पहला संक्रमण-आधारित कृंतक मॉडल है जो तीव्र और पुरानी जब्ती विकास की जांच की अनुमति देता है। यह मिर्गी के सबसे आम ईटियोलॉजी में से एक के लिए रोग की रोकथाम या संशोधन के लिए दवा लक्ष्यों और नए यौगिकों की पहचान करने में मदद करेगा।

जैसा कि ऊपर वर्णित है, बैच और वायरल टिटर का सावधानीपूर्वक विचार यह सुनिश्चित करने के लिए आवश्यक हो सकता है कि टीएमईवी-उपचारित चूहों का पर्याप्त अनुपात हैंडलिंग-प्रेरित दौरे का प्रदर्शन करता है। यदि जानवरों को सामान्य से कम दौरे पड़ते हैं, तो वायरस दक्षता को सत्यापित करने के लिए एन = 20 जानवरों के बैच का उपयोग करें। यदि इसकी गतिविधि कम हो जाती है (50% से कम), तो नए एलिकोट बनाने और उन्हें एन = 20 जानवरों के साथ परीक्षण करने का समय है। यदि नए एलिकोट अधिक कुशल नहीं हैं, तो वायरस के एक नए बैच को शुद्ध किया जाना चाहिए। कुछ ट्रांसजेनिक माउस लाइनों के लिए, कम वायरल टिटर का उपयोग करना आवश्यक हो सकता है; इसलिए, प्रारंभिक प्रयोगों के बाद वायरल टिटर को आवश्यकतानुसार पतला किया जाना चाहिए। बी 6 चूहों पर उपलब्ध अधिकांश डेटा जैक्सन प्रयोगशालाओं (बार हार्बर, एमई, यूएसए या चार्ल्स नदी, सल्ज़फेल्ड, जर्मनी) से उत्पन्न हुए; हालांकि, हार्लन (आइस्ट्रप, जर्मनी) से प्राप्त बी 6 चूहों में समान जब्तीदर की पुष्टि की गई है। बी 6 पृष्ठभूमि वाले ट्रांसजेनिक जानवरों की जब्ती दर जंगली प्रकार के बी 6 चूहों के बराबर है, लेकिन यदि आनुवंशिक परिवर्तनों का वायरस आक्रमण, भड़काऊ प्रतिक्रिया या न्यूरोडीजेनेरेशन21 पर प्रभाव पड़ता है तो यह भिन्न हो सकता है। तीव्र दौरे अनायास देखे जाते हैं लेकिन हैंडलिंग और शोर से ट्रिगर होते हैं, इसलिए जब जब्ती दरों की तुलना की जा रही है तो सभी जानवरों को समान तरीके से संभालना अत्यंत महत्वपूर्ण है। दो बार दैनिक हैंडलिंग सत्रों ने पहले एक उच्च जब्ती बोझ और संक्रमण 6,8,19 के बाद 3-7 दिनों के दौरान दौरे का प्रदर्शन करने वाले चूहोंके अधिक अनुपात को प्रदान किया है। जब्ती बोझ बढ़ाने के लिए अतिरिक्त हैंडलिंग सत्र (दिन 1 और दिन 2) भी नियोजित किए जा सकते हैं। इसके अलावा, जानवरों को प्रत्येक हैंडलिंग सत्र से पहले देखा जा सकता है ताकि यह सुनिश्चित किया जा सके कि सहज दौरे नहीं हो रहे हैं। उदाहरण के लिए, एक जोर से प्रयोगशाला वातावरण, दौरे पैदा कर सकता है, जो बदले में, जानवरों को परीक्षण के समय के दौरान हैंडलिंग-प्रेरित दौरे के लिए दुर्दम्य बना सकता है।

जबकि टीएमईवी संक्रमण चूहों के बहुमत में हैंडलिंग-प्रेरित दौरे पैदा करता है, यह अज्ञात है कि कुछ जानवर इस उपचार के लिए प्रतिरोधी क्यों हैं। जैसा कि ऊपर वर्णित है, यह हो सकता है कि इलेक्ट्रोग्राफिक दौरे (न्यूनतम या कोई संबद्ध व्यवहार के साथ) होते हैं और सामान्य रूप से सहवर्ती ईईजी रिकॉर्डिंग के बिना परिमाणित नहीं होते हैं। यह भी हो सकता है कि इंजेक्शन स्थान में छोटे अंतर मस्तिष्क में कम वायरल प्रभाव की सुविधा प्रदान करते हैं; हालांकि, हिप्पोकैम्पस में वायरस के ट्रोपिज्मके कारण कॉर्टिकल और स्ट्रिएटल संक्रमण 5,6,8,9 के बाद दौरे की सूचना मिली है। इस मॉडल में ड्रग स्क्रीनिंग अध्ययनों के लिए, बरामदगी में कमी की पहचान करने के लिए (उदाहरण के लिए, जब्ती बोझ में 50% की कमी), प्रत्येक समूह के लिए जानवरों की एक बड़ी संख्या की आवश्यकता होती है (उदाहरण के लिए, एन = 20)। इसके अलावा, इस मॉडल में जब्ती व्यवहार में परिवर्तनशीलता एक महत्वपूर्ण जब्ती कमी की पहचान करने के लिए दवा बनाम वाहन प्रभाव में बड़े अंतर की आवश्यकता होती है। इसलिए, इस मॉडल की एक सीमा बड़े समूह आकारों की आवश्यकता है। फिर भी, पर्याप्त समूह आकार भी इस मॉडल 19 में विरोधी जब्ती और विरोधी भड़काऊ प्रभावों की पहचान के लिए अनुमतिदेते हैं।

इस मॉडल में अवलोकन योग्य दौरे का विशाल बहुमत तीव्र संक्रमण अवधि के दौरान होता है। टीएमईवी के साथ इलाज किए गए चूहों में हिप्पोकैम्पल अपघटन, प्रतिरक्षा कोशिका सक्रियण और संज्ञानात्मक घाटे की घटना के बावजूद, इलाज किए गए जानवरों का केवल एक छोटा सा हिस्सा अंततः पुरानी, सहज दौरे विकसित करता है। इस कम समग्र जब्ती बोझ को इस मॉडल में सहज दौरे का ठीक से अध्ययन करने के लिए बड़ी संख्या में संक्रमित चूहों की आवश्यकता होगी, जो कई परियोजनाओं के दायरे और क्षमता से परे है। गहराई इलेक्ट्रोड आरोपण और ईईजी निगरानी भी प्रयोगात्मक जानवरों पर बोझ बढ़ाएगी। जबकि गहराई इलेक्ट्रोड सहज जब्ती गतिविधि की पहचान में सहायता कर सकते हैं, संक्रमण के बाद हिप्पोकैम्पल शरीर रचना विज्ञान में परिवर्तन लगातार इलेक्ट्रोड प्लेसमेंट को एक चुनौती बना सकता है।

मिर्गी के लिए नए उपचारों की पहचान करने की तत्काल आवश्यकता के लिए उन मॉडलों के विकास की आवश्यकता होती है जिनका उपयोग एंटीसेज़्योर प्रभावकारिता के लिए त्वरित स्क्रीनिंग विधि के रूप में किया जा सकता है। यह मॉडल इस तत्काल अनुरोध को संबोधित करने के लिए सुविधाएँ प्रदान करता है। इसके अलावा, तथ्य यह है कि इसे किसी भी स्टीरियोटैक्टिकल सर्जरी की आवश्यकता नहीं है, यह एंटीसेज़्योर यौगिकों की जांच के लिए एक उपयुक्त और आसान प्रदर्शन मॉडल बनाता है।

Disclosures

लेखक घोषणा करते हैं कि उनके पास कोई प्रतिस्पर्धी वित्तीय हित नहीं हैं।

Acknowledgments

एसबी को एफयू बर्लिन के शुरुआती अनुदान द्वारा समर्थित किया जाता है। केएसडब्ल्यू को R37 NS065434 और ALSAM फाउंडेशन द्वारा समर्थित किया जाता है। LAB एक D-SPAN पुरस्कार 1F99NS125773-01 द्वारा समर्थित है। हम रॉबर्ट फुजीनामी, पीएचडी को हमें थेइलर वायरस और माइक्रोस्कोपी समर्थन के लिए यूटा सेल इमेजिंग कोर सुविधा विश्वविद्यालय प्रदान करने के लिए धन्यवाद देते हैं।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Absorbent paper - - any
Analytical balance Mettler Toledo (Columbus, OH, U.S.A.) 30216542 0. 1 mg–220 g 
Animal balance Ohaus (Parsippany, NJ, U.S.A.) STX2202 0.01 g–2200 g 
BD Lo-Dose U-100 Insulin Syringes BD (Mississauga, ON, Canada)  BD329461 Lo-Dose sterile syringes with permanent BD Micro-Fine IV needle - 1 mL
Daniel's strain of TMEV kindly provided by Robert Fujinami (University of Utah) - 3 x 105 plaque-forming units aliquot(s)
Disinfectant, e.g. VennoVet 1 super Menno Chemie Vertriebsgesellschaft GmbH, Germany - Recommended by campus veterinarians with less than or equal to 5% alcohol
Fisherbrand medium sterile Alcohol prep pad C7  Thermo Fisher Scientific (Waltham, MA, U.S.A.) 22-363-750
Fluriso VETone (Boise, ID, U.S.A) 502017 Isoflurane 250 mL, 2%–5%
Fume absorber  Labconco (Kansas City, MO, U.S.A.) - -
General Protection Disposable SMS White Lab Coats   Thermo Fisher Scientific (Waltham, MA, U.S.A.) 17-100-810A
GraphPad Prism version 9  (La Jolla, CA, U.S.A.)
Ice bucket - - any
Microsoft Excel Microsoft  (Redmond, WA, U.S.A.)
Microsoft Word Microsoft  (Redmond, WA, U.S.A.)
Mouse cage - - any mouse cage holding at least 5 mice
PrecisionGlide needles  BD (Mississauga, ON, Canada) 329652 BD Slip Tip with PrecisionGlide Needle Insulin Syringes - 26 G x 3/8 - 0.45 mm x 10 mm
Self-Sealing Sterilizing Pouch  Fisher Scientific (Hampton, NY, U.S.A.) NC9241087  12.6 x 25.5 cm
Small glass flask - - any, volume 25 mL
sterile PBS Thermo Fisher Scientific (Waltham, MA, U.S.A.) 10010056
Stir bar Carl Roth GmbH & CO. KG X171.1 size according to volume of solution
Stir plate Carl Roth GmbH & CO. KG AAN2.1
Syringe Luer-Lok BD (Mississauga, ON, Canada) 309628 1 mL syringe only
Ultrasonic Cleaner, Heater/Mechanical Timer Cole-Parmer (Vernon Hills, IL, U.S.A.) EW-08895-23 Bath sonicator - 0.5 gal, 115 V
Vehicle solution - - depending on compound vehicle
Vortex REAX  Heidolph Instruments GmbH & Co. KG, Germany 541-10000-00

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References

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थेइलर के मुराइन एन्सेफैलोमाइलाइटिस वायरस का उपयोग करके संक्रामक एटियलजि के मिर्गी के लिए एक मॉडल
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Batot, G., Metcalf, C. S., Bell, L. A., Pauletti, A., Wilcox, K. S., Bröer, S. A Model for Epilepsy of Infectious Etiology using Theiler's Murine Encephalomyelitis Virus. J. Vis. Exp. (184), e63673, doi:10.3791/63673 (2022).

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