Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Biology
Click here for the English version

Biology

Сбор и длительное содержание муравьев-листорезов (Atta) в лабораторных условиях

Published: August 30, 2022 doi: 10.3791/64154
Automatic Translation
1, 1, 2, 1
1Institute of Biosciences, Department of General and Applied Biology, Laboratory of Leaf-cutting Ants, São Paulo State University, 2Institute of Psychology, Laboratory Walter Hugo Cunha, São Paulo University

Summary

Здесь описан протокол успешного сбора и поддержания здоровых колоний муравьев Atta (Hymenoptera: Formicidae) в лабораторных условиях. Кроме того, различные типы и конфигурации гнезд детализируются вместе с возможными экспериментальными процедурами.

Abstract

Муравьи являются одной из самых биоразнообразных групп животных на планете и населяют различные среды. Содержание колоний муравьев в контролируемых средах позволяет обогатить понимание их биологии, что может способствовать прикладным исследованиям. Эта практика обычно используется в исследованиях контроля популяции видов, которые вызывают экономические потери, таких как муравьи Атта . Чтобы культивировать свой взаимный грибок, эти муравьи-листорезы собирают листья и для этого считаются сельскохозяйственными вредителями, широко распространенными по всему американскому континенту. Они высоко социально организованы и населяют сложные подземные гнезда, состоящие из различных камер. Их поддержание в контролируемой среде зависит от распорядка дня, состоящего из нескольких процедур и частого ухода, которые описаны здесь. Он начинается со сбора маток во время репродуктивного сезона (то есть брачного полета), которые затем индивидуально переносятся в пластиковые контейнеры. Из-за высокой смертности маток второй сбор может быть проведен примерно через 6 месяцев после брачного полета, когда зарождающиеся гнезда с развитым грибком выкапывают, вручную собирают и помещают в пластиковые контейнеры. В лаборатории листья ежедневно подают в установленные колонии, а отходы, произведенные муравьями, еженедельно удаляют вместе с оставшимся сухим растительным материалом. По мере того, как грибовой сад продолжает расти, колонии переносятся в различные типы контейнеров в соответствии с экспериментальным назначением. Колонии муравьев-листорезов помещаются во взаимосвязанные контейнеры, представляющие собой организационную систему с функциональными камерами, построенными этими насекомыми в природе. Эта установка идеально подходит для мониторинга таких факторов, как количество отходов, здоровье сада грибка и поведение рабочих и королевы. Облегченный сбор данных и более подробные наблюдения считаются наибольшим преимуществом содержания колоний муравьев в контролируемых условиях.

Introduction

Муравьи составляют разнообразную группу особей, которые оказывают влияние на большинство наземных сред1. Они действуют как эффективные диспергаторы 2,3,4, хищники5 и экосистемные инженеры 6,7,8,9,10, подчеркивая их важность и экологический успех в природных экосистемах. Все виды муравьев классифицируются как эусоциальные насекомые; однако их социальная организация сильно варьируется между различными видовыми группами, т. е. системы разделения труда, функциональные группы, общение между индивидуумами, организация кормов, основание колонии и процесс воспроизводства11. Как высоко диверсифицированная группа, они прибегают к нескольким пищевым ресурсам и специализированному пищевому поведению. По сути, сельское хозяйство было не только огромным шагом для человеческой цивилизации, но и для видов муравьев. Примерно от 55 до 65 млн лет назад12 лет муравьи начали культивировать грибы и включать их в почти эксклюзивную диету. Они стали настолько специализированными, что развили строгие, зависимые и обязательные взаимодействия, классифицируемые как симбиоз, когда один человек не выживает без другого.

Низшие грибообразующие муравьи собирают и обрабатывают мертвое органическое вещество, такое как фрагменты гниющего листа, чтобы вырастить свой мутуалистический гриб; в то время как более высокогрибковые муравьи собирают свежий растительный материал, составляя одну из самых успешных симбиотических природных систем13. Эта узкоспециализированная сельскохозяйственная техника позволила им занять новую нишу. Муравьи с более высоким аттином включают муравьев-листорезов, монофилетическую группу, которая пробуждается между 19 Ма (15-24 Ма) и 18 Ма (14-22 Ма)14,15,16, состоящая из четырех действительных родов: Atta Fabricius, Acromyrmex Mayr, Amoimyrmex Cristiano и Pseudoatta Gallardo. Система земледелия листорезов, выполняемая муравьями-листорезами, развилась из производных систем земледелия17. Большинство из этих видов исключительно эксплуатируют вид мутуалистического гриба Leucoagaricus gongylophorus Singer18 (также называемый Leucocoprinus gongylophorus Heim19), отмечая значительный эволюционный переход11. Грибковые сорта передаются вертикально, от первоначальных гнезд к потомству, предполагая, что они размножаются клонально20.

Примечательно, что общества Атты разработали сложную организационную структуру, имеющую огромное значение в их среде и представляющую большой интерес для мирмекологов. Их популяция может состоять из миллионов особей, большинство из которых являются стерильными работницами, которые демонстрируют подчеркнутый полиморфизм, то есть различный размер и анатомическую морфологию. Популяция отличается кастами по возрасту, физиологическому состоянию, морфологическому типу, поведению и специализированной деятельности в колонии21. Рабочие могут быть дискриминированы на садовников и медсестер, универсалов внутри гнезда, собирателей и экскаваторов, а также защитников или солдат21. Эта организация позволяет выполнять задачи в сотрудничестве и самоорганизующейся системе, которая может производить высокоструктурированное коллективное поведение, позволяя им эффективно реагировать на нарушения окружающей среды22.

Роль обновления популяции играет одна королева (т. е. моногинная), до тех пор, пока она жива, составляя постоянную репродуктивную касту22. Известно, что королевы атты живут более 20 лет, откладывая яйца на протяжении всей своей жизни23. Поскольку королева незаменима, ее выносливость имеет решающее значение для выживания колонии 13,20,23,24. Тем не менее, тысячи крылатых репродуктивных самок и самцов могут быть найдены в гнезде во время сезонов размножения, но ни один из них не остается в первоначальном гнезде, образуя временную касту22. В колониях atta sexdens производится около 3000 репродуктивных самок и 14 000 репродуктивных самцов. Это происходит, когда колония достигает половой зрелости, примерно через 38 месяцев после ее реализации, и повторяется ежегодно с тех пор, пока она не исчезнет23,25. Новые колонии атты создаются путем гаплометроза, когда одна королева начинает новое гнездо.

Когда условия окружающей среды благоприятны, размножатели покидают подземное гнездо, чтобы начать брачный полет. Период его возникновения различается по регионам, начиная по годам по всей территории Бразилии в зависимости от вида. Однако этому событию, по-видимому, предшествуют осадки и высота влажности26, что может быть связано с облегчением раскопок из-за влажности почвы22. Часто, за 1-5 недель до брачного полета, входы и каналы гнезда расширяются, чтобы облегчить уход репродуктивных особей. Прежде чем покинуть свои материнские колонии, крылатые самки собирают и хранят в инфрабуккальной полости часть мутуалистического гриба20,27. Множественные совокупления выполняются в середине полета, и подсчитано, что одна матка может быть осеменена тремя-восемью самцами (т. е. полиандриями) у некоторых видов28, обеспечивая генетическую изменчивость29. После этого матки переходят в почву, отдавая предпочтение местам с отсутствием или небольшим количеством растительности25, где они удаляют свои крылья и выкапывают свою первую гнездовую камеру. Это единственный период, когда маток можно увидеть за пределами гнезда. Хотя особи временной касты были замечены в искусственных гнездах, неизвестно, было ли выполнено какое-либо успешное совокупление (т.е. брачный полет) в лабораторных условиях24.

Первоначальное строительство гнезда соответствует наиболее критическому периоду колонии, который может длиться от 6 ч до 8 ч23,25. В этот момент королева обитает в начальной камере, и в считанные дни начинается яйцекладка. Первые яйца скармливаются мицелиалу, который отрыгивает королева, отмечая начало грибкового сада колонии. Первые личинки появляются примерно через 25дней 22, и почти в конце первого месяца колония состоит из мата размножающегося гриба, где гнездятся незрелые (яйца, личинки и куколки), и королевы, которая воспитывает свое первоначальное потомство в изоляции23. Яйца также являются пищевым ресурсом первых личинок и сильно потребляются маткой13. Кроме того, королева поддерживает себя жировыми запасами тела и катаболизирует мышцы крыльев, которые больше не используются13. Первоначальная культура гриба не потребляется, так как выживание колонии зависит от ее развития, и в этот период матка оплодотворяет ее фекальной жидкостью13. Через несколько дней после появления первые рабочие открывают вход в гнездо и начинают кормовую деятельность в непосредственной близости от гнезда13. Они включают в себя материал, собранный в качестве субстрата грибного сада, который в настоящее время служит пищей длярабочих 13,22. Перед добавлением в культуру гриба растительный материал, переносимый рабочими, разрезается на крошечные кусочки и смачивается фекальной жидкостью13. Муравьи манипулируют грибком inoculum для увеличения и контроля его роста, который будет служить для разделения больших почвенных выкопанных камер, специализирующихся на кондиционировании сада 13,22,25.

Примерно через 6 месяцев после брачного перелета гнезда A. sexdens содержат грибковую камеру и несколько каналов. Большая специализация в строительстве муравьиных гнезд листорезов работает как защитный механизм от естественных врагов и неблагоприятных факторов окружающей среды22. Известно, что муравьи-листорезы фрагментируют грибной сад и переносят его в камеры с высокой влажностью, когда камеры начинают высыхать13. Таким образом, несмотря на то, что раскопки гнезда имеют значительные энергетические затраты, вложенная энергия обращена вспять в пользу самой колонии22. За некоторыми исключениями, виды Atta также делают специализированные камеры для отходов колонии, сделанные в основном из истощенного грибного субстрата и тел мертвых муравьев, изолируя его от остальной части гнезда и устанавливая важную стратегию социального иммунитета30. Кроме того, отдельная группа рабочих манипулирует мусором напрямую, чтобы избежать заражения другими людьми. Рабочие постоянно кормятся, чтобы вырастить грибок, который является основным питательным ресурсом колонии. Тем не менее, они могут питаться соком растений, а также при обрезке фрагментов. Растительный материал тщательно отбирается для ухода за грибом сада и под влиянием многих факторов, таких как черты листьев и свойства экосистемы13.

Стратегия кормления муравьев-листоносцев для получения свежего материала является весьма сложной и в сочетании с высоким спросом на урожай в устоявшихся колониях приводит к значительным экономическим потерям для сельскохозяйственных производителей и ставит под угрозу лесные восстановительные районы22,31. Таким образом, эти муравьи могут быть классифицированы как вредители в большинстве районов, где они могут встречаться, начиная от юга Соединенных Штатов до северо-восточной Аргентины 11,13,22,32. Уничтожение проблемных колоний является сложной задачей из-за ряда адаптаций, присущих биологии этих насекомых (т.е. социальная организация, кормление, выращивание грибов, гигиена и сложные структуры гнезд)33. Таким образом, стратегии борьбы с популяцией отличаются от тех, которые обычно применяются к другим насекомым-вредителям, и в основном прибегают к привлекательным предложениям загрязненных приманок33,34. Однако, поскольку эти муравьи могут отторгать вредные вещества как для гриба, так и для особей колонии и компрометировать обрабатываемые поля33, новые природные соединения и альтернативы контроля постоянно тестируются 33,35,36. Поскольку результаты эксперимента вряд ли можно контролировать на проверенных в полевых условиях колониях, предварительные эссе проводятся в контролируемой среде.

Таким образом, экспериментальные протоколы должны быть адаптированы к группам интересов, учитывающим неоднородный образ жизни муравьев, поддерживающий исследования на видовом уровне и учитывающий колонии как операционные единицы, где один муравей является элементом сложного суперорганизма11. Собранные до сих пор отчеты о роде Atta позволили успешно собирать и поддерживать колонии в лабораторных условиях и признавать их основные потребности и общее функционирование. Основываясь на их естественных процессах, таких как размножение, создание колоний и пищевое поведение, была разработана рутина практик, которая позволяет долгосрочно создавать колонии в различных типах гнезд. Здесь описан процедурный протокол для поддержания муравьев-листорезов в лаборатории и освещает возможные общие исследования с четкими экспериментальными целями и научной пропагандой.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. Коллекция маток

  1. Поиск в литературе по периоду репродуктивного сезона Атты в интересующем регионе. Возникновение репродуктивного сезона, частота и время суток брачных перелетов варьируются в зависимости от региональных климатических условий (табл. 1). Хотя обычно это происходит весной, эта информация должна быть собрана для места, где сбор должен происходить 37,38,39,40,41,42,43,44,45,46.
  2. Определите и обозначьте места с гнездами атта , рассматриваемыми как возможные районы для сбора маток и молодых колоний. Во время брачных полетов матки рассредоточиваются по местам гнездования; поэтому районы с большим количеством колоний имеют более высокие шансы иметь места посадки королевы, где они инициируют новые раскопки гнезд.
  3. Проверьте районы, выбранные ранее, на наличие признаков брачного полета во время репродуктивного сезона муравьев Атта . Следите за условиями окружающей среды брачных полетов, такими как жаркая и дождливая погода.
  4. Определите муравьиные гнезда листоносцев на выбранных ранее участках и ищите внешние признаки, указывающие на предстоящий уход крылато-репродуктивных муравьев. Особенности гнезда включают расширенные входы в туннель (рисунок 1), увеличение потока рабочих, демонстрирующих более агрессивное поведение по отношению к возможным хищникам, и крылатых репродуктивных муравьев, появляющихся на входах в туннель (рисунок 1). Остерегайтесь дней с высокой влажностью, сменяющихся осадками, так как они, как правило, предшествуют брачным полетам.
  5. Подготовьте пластиковые контейнеры с крышкой с нижним гипсовым слоем для удержания маток по отдельности. Убедитесь, что объем контейнера составляет примерно 200 мл, а слой штукатурки на дне составляет около 1 см в высоту и обладает высокой абсорбирующей способностью для контроля влажности.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Чтобы подготовить гипсовое основание, следуйте инструкциям производителя.
  6. Подготовьте среду с постоянной температурой 23 ± 1 °C и приблизительно 70% ± 10% относительной влажности. Выберите место без интенсивной деятельности и высокого потока людей, чтобы избежать вибраций и помех. Используйте чистящие средства нейтрального аромата, чтобы предотвратить любое вмешательство в поведение муравьев.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Колебания в определенных условиях окружающей среды могут вызвать конденсацию воды или потерю влаги и поставить под угрозу грибной сад.
  7. После брачного полета соберите бескрылых маток, которые начали раскопки гнезда, и аккуратно поместите их в пластиковые контейнеры, подготовленные с гипсовым слоем, по отдельности. Избегайте прикосновения к королевам голыми руками и используйте латексные перчатки или энтомологический пинцет.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Удаление крыльев и поведение при раскопках почвы указывают на репродуктивных самок, которые уже совокупились и, следовательно, способны начать новую колонию. Коллекция Queens также рассматривается как первая коллекция в этой работе.
  8. Переместите контейнеры с матками в место с ранее выбранной контролируемой средой. Выполняйте перевозку маток с особой осторожностью, избегая слишком больших помех и поддерживая минимальное температурное постоянство.
  9. Не манипулируйте и не двигайте матками в течение примерно 3 дней после сбора, чтобы избежать стресса.

Figure 1
Рисунок 1. Вход в гнездо расширен крылатыми муравьиными размножателями и рабочими. Расширенные входы в туннель являются одной из особенностей гнезд, которая указывает на возникновение брачных полетов Атты .  Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

2. Обслуживание Квинса

  1. Первоначально добавляйте 2,5 мл воды в гипсовый слой реципиента каждые 2 дня с помощью игольчатого шприца.
    1. Вместо того, чтобы открывать реципиента, осторожно проколите крышки контейнера иглой, чтобы избежать беспокойства из-за манипуляций. В этот период можно использовать такое же отверстие. Убедитесь, что добавленная вода не впитывает слой штукатурки. Избегайте непосредственного полива матки, первоначальной грибковой губки и любых незрелых. До тех пор, пока грибной сад проявляет сухой вид с отсутствием воды, орошайте слой штукатурки.
  2. Через две недели после сбора проверьте, не был ли грибок отрыгнут матками. Если грибка нет, перенесите примерно 2 г гриба, полученного из установленной колонии. Также выполните этот этап, если грибок не развивается.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Для переноса грибка необходимо собрать здоровый гриб из установленной колонии и удалить всех муравьев, которые могут быть на ней. Используйте столовую ложку, энтомологический пинцет и латексные перчатки для манипулирования грибком.
  3. После появления первых рабочих начинают регулярно предлагать фрагменты молодых и тонких листьев, в зависимости от срезанной активности колонии. Следите за тем, чтобы предлагаемые листья были здоровыми, а растения не были обработаны инсектицидами или другими химическими веществами. На ранних стадиях следите за тем, чтобы фрагменты листьев не превышали 4 см.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Поскольку первые рабочие инициируют кормление листьев, растительный материал должен быть предложен после их появления. Частота предложения зависит от ловкости, с которой рабочие включают растительный материал на грибок, но может варьироваться до 2-3 дней в неделю. Овсяные хлопья и кукурузные хлопья также могут быть предложены, но их следует чередовать с листьями, чтобы избежать грибковой сухости.
  4. При предложении новых листьев удалите отходы колонии и сухие фрагменты листьев. Избегайте использования духов, увлажняющих средств, кремов или любого вещества с сильным запахом при манипулировании матками. Кроме того, используйте латексные перчатки во время всех процессов.
  5. Следите за развитием колонии, и когда грибовой сад достигнет хотя бы половины объема контейнера, перенесите колонию в искусственное долговечное гнездо.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Поскольку темпы развития присущи каждой колонии, расчетного времени для переноса колонии не существует. Обычно колонии из первой коллекции переносят в гнезда с грибной садовой камерой объемом не более 1л, из-за небольшого гриба садового.

3. Коллекция молодых колоний

  1. Приобретайте пластиковые контейнеры объемом около 500 мл.
  2. Примерно через 6 месяцев после брачного полета определите ориентировочные башнеобразные курганы с гранулированными частицами почвы (рисунок 1) зарождающихся гнезд атта (рисунок 2) на местах с ранее отмеченным появлением муравьев-листоносителей.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Через шесть месяцев после брачного полета гнезда молодых колоний, по оценкам, находятся на глубине до 1 м в почве. Новая коллекция показана в этот период для достижения более высоких шансов на успех и долговечность колоний в больших количествах.
  3. С помощью садовой мотыги выкапывайте вход в гнездо, пока не достигнете камеры, в которой находится молодая колония. Соберите матку, грибного сада, незрелых и молодых рабочих и поместите их в пластиковый контейнер. Выполните процесс сбора как можно более мягко.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Естественно, большое количество почвы также будет собрано и должно быть удалено постепенно в будущих процедурах обслуживания в лаборатории.
  4. Переместите пластиковые контейнеры с крышкой, удерживающие колонии, в назначенную контролируемую среду. Выполняйте транспортировку молодых колоний с предельной осторожностью, избегая слишком большого беспокойства и поддерживая минимальное температурное постоянство. Воздержитесь от манипулирования или перемещения колоний в течение примерно 3 дней, чтобы избежать стресса. Если в комнате есть активный распорядок дня, на колонии можно надеть темную ткань.

Figure 2
Рисунок 2. Башневидный почвенный насыпь. Характерный башневидный курган указывает на наличие зарождающихся колоний Atta sexdens и Atta laevigata. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

4. Содержание молодняков

  1. Обеспечивают тонкие молодые листья 3 раза в неделю.
    1. Убедитесь, что предлагаемые листья здоровы, а растения не были обработаны инсектицидами или другими химическими веществами. На этом этапе убедитесь, что фрагменты листьев не менее 7 см в длину.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Овсяные хлопья и кукурузные хлопья также могут быть предложены, но их следует чередовать с листьями, чтобы избежать грибковой сухости.
    2. Частота предложения зависит от ловкости, с которой рабочие включают растительный материал в гриб. Когда активность сокращения является интенсивной, увеличьте предложение два раза в день три раза в неделю или 5 дней в неделю.
  2. При предложении новых листьев удаляйте колониальные отходы, в том числе остатки почвы, с помощью ложки. Используйте латексные перчатки во время всех процессов. При манипулировании молодыми колониями избегайте использования духов, увлажняющих средств, кремов или любого вещества с сильным запахом.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Рабочие сами отделят почву и отходы от грибка.
  3. Следите за развитием колонии, и когда грибовой сад достигнет хотя бы половины объема контейнера, перенесите колонию в искусственное долговечное гнездо.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Поскольку темпы развития присущи каждой колонии, расчетного времени для переноса колонии не существует.

Figure 3
Рисунок 3: Типы искусственных гнезд для содержания колоний Atta sexdens и Atta laevigata . Иллюстрация долговечных искусственных гнезд муравьев-листорезов: закрытая вертикальная установка гнезда, закрытая горизонтальная установка гнезда и открытая установка гнезда арены. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

5. Долговечные искусственные гнезда

  1. Подготовьте закрытую вертикальную установку гнезда, как описано ниже (рисунок 3 и рисунок 4).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Конфигурации закрытых гнезд всегда должны иметь разных получателей, чтобы отдельно представлять себя как (1) садовая камера гриба, (2) камера для удаления отходов и (3) кормовая камера. Изначально он должен начинаться с трех контейнеров, но для увеличения грибкового сада можно добавить больше получателей. Гнезда могут различаться по размеру и материалу в зависимости от их экспериментального назначения, хотя здесь описано и рекомендовано использование прозрачных материалов. Контейнеры должны быть без отверстий, иначе муравьи сбегут. Тип гнезда, описанный ниже, может быть использован для общих исследований, но он не рекомендуется для ассертивного сбора муравьев из-за беспокойства, вызванного при снятии крышки, что приводит к большому возбуждению среди особей. Тем не менее, благодаря прозрачности материала, можно найти королеву и различные касты муравьев, даже если грибной сад заполнил весь контейнер. Поскольку это тенденция, всегда предполагается, что незрелые находятся в центре грибкового сада, когда он занял большую часть пространства, доступного в вертикальных контейнерах.
    1. Выберите прозрачный контейнер с крышкой объемом около 1 л и добавьте слой 1 см высокоабсорбирующей гипсовой основы. Это будет грибковая садовая камера. Выберите два прозрачных контейнера с крышкой объемом около 500 мл каждый, которые будут камерами для удаления отходов и кормления. Муравьи будут выбирать, в какой камере будет каждая, и после этого следить за тем, чтобы они не были взаимозаменяемыми.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Чтобы подготовить гипсовое основание, следуйте инструкциям производителя.
    2. Перфорируйте и соедините три контейнера прозрачной трубкой или шлангом. При необходимости нанесите маскировочную ленту на границу трубок, чтобы гарантировать соединение бедра с контейнерами и избежать выхода муравьев. Поместите контейнер для гипсового основания в середину, а другие контейнеры с противоположных сторон.
    3. Осторожно перенесите грибковую губку выбранных колоний (см. шаг 2.5 и шаг 4.3) вместе с маткой, рабочими и незрелыми в контейнер для гипсового основания. Перед переносом убедитесь, что гипсовая основа полита. Используйте латексные перчатки.
  2. Подготовьте закрытую горизонтальную установку гнезда, как описано ниже (рисунок 3 и рисунок 4).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Гнезда с горизонтальной конфигурацией позволяют внимательно наблюдать за грибным садом и деятельностью рабочих по отношению к нему. Поскольку более молодые части грибкового сада находятся наверху, можно наблюдать, как недавно предложенные субстраты включаются рабочими. Новые части гриба могут быть замечены по его цвету, который будет похож на цвет последнего предлагаемого ресурса, тогда как старые порции обычно имеют бежевый цвет. Потомство и матка также могут быть легко расположены, так как в горизонтальных контейнерах они обычно находятся в верхней части грибкового сада, даже когда он занял большую часть пространства. Эта конфигурация может быть использована для поведенческих исследований, фокусной выборки и научных целей, поскольку она дает представление об организации внутри гнезда.
    1. Приобретите прозрачный контейнер с крышкой размером примерно 31 см х 21 см х 4,5 см и добавьте слой 1 см высокоабсорбирующей гипсовой основы. Это будет грибковая садовая камера. Выберите два прозрачных контейнера с крышкой объемом около 500 мл каждый, которые будут камерами для удаления отходов и кормления. Муравьи будут выбирать, в какой камере будет каждая, и после этого следить за тем, чтобы они не были взаимозаменяемыми.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Чтобы подготовить гипсовое основание, следуйте инструкциям производителя. При необходимости закройте небольшое пространство между крышкой и контейнером маскировочной лентой, чтобы муравьи не вырвались.
    2. Перфорировать и соединить контейнеры прозрачной трубкой или шлангом. При необходимости нанесите маскировочную ленту на границу трубок, чтобы гарантировать соединение бедра с контейнерами и избежать выхода муравьев. Поместите контейнер для гипсового основания в середину, а другие контейнеры с противоположных сторон.
    3. Осторожно перенесите грибковую губку выбранных колоний (см. шаг 2.5 и шаг 4.3) вместе с маткой, рабочими и незрелыми в контейнер для гипсового основания. Перед переносом убедитесь, что гипсовая основа полита. Используйте латексные перчатки.
  3. Подготовьте открытую настройку гнезда арены, как описано ниже (рисунок 3 и рисунок 5).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Открытые гнезда арены позволяют собирать муравьев без большого беспокойства и анализировать поведение корма. Они также могут обеспечить надежное представление о колонии, найденной в природе, для научных целей.
    1. Выберите прозрачный контейнер с крышкой объемом около 1 л и добавьте слой 1 см высокоабсорбирующего гипсового слоя основания. Это будет грибковая садовая камера.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Рекомендуется начинать с контейнеров по 1 л и постепенно переходить к контейнерам с большими объемами для большего грибного сада. Однако контейнеры не должны превышать объем 5 л. Добавьте столько контейнеров, сколько необходимо.
    2. Выберите открытую арену. Размер арены может варьироваться в зависимости от целей исследования. Если выбрана большая арена, поместите контейнеры, удерживающие грибной сад, в ее интерьер (рисунок 5). В случае небольшой арены подключите его к грибковому садовому контейнеру прозрачным шлангом или трубкой (рисунок 3). Арена будет служить камерой для кормления и утилизации отходов, поэтому следите за тем, чтобы она не была слишком маленькой.
    3. Нанесите один слой политетрафторэтиленовой жидкости одним движением к границе арены, чтобы сдержать муравьев. Используйте хлопок, пропитанный жидкостью, и нитриловую перчатку.
      ВНИМАНИЕ: Избегайте вдыхания и прикосновений к коже при использовании политетрафторэтиленовой жидкости.
    4. Осторожно перенесите грибковую губку выбранных колоний (см. шаг 2.5 и шаг 4.3) вместе с маткой, рабочими и незрелыми в контейнер для гипсового основания. Перед переносом убедитесь, что гипсовая основа полита. Используйте латексные перчатки.

Figure 4
Рисунок 4: Искусственные закрытые гнезда муравьев-листорезов Atta sexdens и Atta laevigata. Закрытая вертикальная установка гнезда сверху (А) и сбоку (В); закрытая горизонтальная установка гнезда сверху (C) и вид сбоку (D). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

Figure 5
Рисунок 5: Искусственное открытое гнездо муравьев-листорезов Atta sexdens и Atta laevigata. Открытая установка гнезда арены atta sexdens сверху (A) и бокового вида (B). 1) Грибковые садовые камеры; 2) отходы; 3) Дольки апельсина; 4) Стекло со слоем политетрафторэтилена (PTFE). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

6. Содержание развитых колоний

  1. Ежедневно предлагайте по крайней мере один большой лист в кормовую камеру на колонию с 1 л грибного сада. Если срезанная активность муравьев интенсивна, увеличьте количество листьев. Если гриб сухой, предварительно смочите листья, чтобы обеспечить дополнительную влажность. В закрытых гнездах выполняйте подношение быстро, чтобы муравьи не сбежали из кормовой камеры.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Здесь листья собраны из таких видов растений, как шелковица (Morus nigra), манго (Mangifera indica), эвкалипт (Eucalyptus sp.), джамболан (Syzygium cumini), гибискус (Hibiscus sp.), акалифа (Acalypha wilkesiana) и лигуструм (Ligustrum lucidum).
    1. Предложите фрукты, такие как апельсин и яблоко, а также овсяные и кукурузные хлопья, чтобы разнообразить и дополнить рацион. Большим колониям с интенсивной кормовой активностью предлагают овсяные хлопья и кукурузные хлопья ежедневно, а фрукты раз в неделю. Если это не так, предлагают хлопья поочередно с листьями, но не чаще трех раз в неделю, а плоды один-два раза в месяц. Отрегулируйте количество и частоту каждой пищи в соответствии с кормовой активностью муравьев.
    2. Если варианты, описанные выше, недоступны, определите предпочтения муравьев в корме среди листьев, цветов и плодов региональных деревьев и кустарников или даже коммерческих овощей, зерновых и других хлопьев. Избегайте предложения ресурсов с защитными химическими соединениями и пестицидами.
  2. Удаляйте все содержимое мусорной камеры каждые 2 недели из всех колоний. Увольнять работников также в целях контроля численности населения. Если рабочие переносят здоровый грибок в камеру отходов, убедитесь, что матка не находится на ней и удалите ее. Если количество утилизируемых отходов велико или оно слишком влажное, удаляйте его один раз в неделю.
  3. Удаляйте материал, не взятый муравьями, из кормовой камеры всякий раз, когда предлагаете новые, и убедитесь, что он всегда чист.
    1. Если рабочие переносят здоровый грибок в кормовую камеру, потревожите его, оставьте крышку контейнера открытой и нанесите нейтральный порошок талька на поверхность края камеры. Выполняйте эту процедуру только в том случае, если в грибковой камере еще есть место, таким образом, работники перенесут грибок обратно в контейнер, не потеряв его или незрелые.
  4. Если требуется больше грибкового сада, добавьте еще один оштукатуренный контейнер и переместите в него часть грибковой губки. Пока гриб не достигнет половины контейнера, добавьте листья в грибковую камеру. Рост гриба сада должен происходить постепенно, чтобы не нарушить баланс колонии. Если требуется контейнер большего размера, убедитесь, что гриб занимает все пространство самых маленьких контейнеров, прежде чем переносить его. Колониальные отходы и сухие листья не должны скапливаться в грибковой садовой камере.
  5. Проверьте гипсовое основание из контейнеров, так как со временем оно может приобрести темно-коричневый цвет и стать неэффективным из-за выделения муравьев, транспортировки отходов и высокой концентрации влажности. Также некоторые колонии могут разрезать слой и утилизировать его. В этих случаях перенесите грибной сад в новую оштукатуренную емкость.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Блок-схема, изображающая процесс сбора муравьев, показана на рисунке 6. Здесь показаны некоторые результаты, полученные с использованием протокола сбора, обслуживания и установки гнезда, описанного выше.

Figure 6
Рисунок 6: Блок-схема для сбора колоний муравьев-листорезов. Следуя протоколу, первый сбор происходит сразу после брачного перелета. Маток, которые убрали крылья, собирают и кладут в небольшой контейнер с гипсовым основанием. После 6 месяцев брачного перелета происходит второй сбор. Собираются королевы, которые раскопали почву и успешно начали фундамент колонии. После того, как колонии развиваются, они переносятся в большие контейнеры и, по желанию, в различные гнезда. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

Влияние репродуктивного статуса на иммунный ответ муравьиных маток
Матки разных видов муравьев имеют длительный срок службы и, следовательно, чаще подвергаются воздействию одного и того же возбудителя более одного раза47. Инициируя новую колонию, королевы Атты изолируются, и компромисс между размножением и иммунитетом может уменьшить инвестиции в иммунную защиту этих муравьев-основателей. Следовательно, их устойчивость к патогенам может быть связана с их репродуктивным статусом47,48. Собирая маток в разные моменты их раннего жизненного цикла и вводя нейлоновую нить в гастер особей (рисунок 7), можно было оценить индивидуальную инкапсуляционную реакцию на патогены и сравнить иммунную устойчивость между девственными матками, недавно спаренными матками и матками, которые спарились 6 месяцев назад в гастер особей.

Figure 7
Рисунок 7: Эссе по инкапсуляционному ответу. Экспериментальная установка, направленная на оценку индивидуального иммунного ответа вариации инкапсуляции в соответствии со статусом размножения королев Atta sexdens и Atta laevigata . Девственные королевы, недавно спаренные матки и королевы, которые спарились 6 месяцев назад, получили вставки нейлоновой нити между 4-м и 5-м тергитом гастера, чтобы действовать как антиген. Нейлоновые нити были удалены через 24 часа и сфотографированы для количественной оценки цвета покрытия. Королевы были собраны перед брачным полетом, сразу после брачного полета и через 6 месяцев после брачного полета, следуя шагам из тем 1, 2 и 3 описанного протокола. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

Как только неспаренные самки появляются только в брачных полетах, изучение этих особей в этом репродуктивном статусе опирается на конкретные знания, чтобы предсказать возникновение конкретного явления и знать протоколы сбора и содержания муравьев. Чтобы гарантировать, что репродукторы еще не совокупились, особей собирали непосредственно из гнездовых отверстий, в которых их входы были расширены для ухода этих муравьев (рисунок 1). Поскольку идентификация репродукторов на видовом уровне является проблематичной, рабочие из той же колонии были собраны для проверки. В случае спаривающихся особей собирались самки, у которых были удалены крылья и которые начали выкапывать почву сразу после брачного полета, предполагая, что они уже совокупились. Для обеих стадий размножения было собрано большое количество самок, чтобы обеспечить количество тестируемых особей, так как уровень смертности в этот момент значителен. После того, как спаренные муравьи рассеялись из первоначальной колонии, виды были идентифицированы путем сравнения кутикулярного углеводородного профиля49. Королевы спаривались в течение 6 месяцев с момента брачного полета уже инициировали свои колонии, которые в этот момент состоят из небольшого грибкового сада, нескольких рабочих и незрелых. Эти колонии ранней жизни были замечены отчетливой башнеобразной почвенной насыпью (рисунок 2). Сбор проводился по шагам, описанным ранее в разделе 3 «Сбор молодых колоний». Для изучения самок-репродукторов на этом этапе необходимо было поддерживать молодую колонию, так как одна только матка скоро погибнет. Идентификация производилась с использованием рабочих колоний. Всего было собрано около 200 маток с использованием описанных ранее протоколов.

После каждого сбора матки взвешивались, измерялись и вскоре получали вставки нейлоновой нити, которые были удалены через 24 часа для анализа цветового покрытия. Для видов Atta laevigata матки, которые спаривались 6 месяцев назад, показали самую темную нейлоновую нить, таким образом, более высокую скорость инкапсуляции и более эффективную иммунную защиту (рисунок 8). Тем не менее, недавно спаренные королевы собирались сразу после брачного полета, а девственные королевы, собранные перед брачным полетом, имели примерно одинаковую скорость инкапсуляции (рисунок 8). Таким образом, было подтверждено, что инкапсуляция клеточной защиты у муравьев Atta laevigata может варьироваться в зависимости от репродуктивного статуса и времени, прошедшего после спаривания, но она не изменяется с весом и длиной головы. Первоначально исследование было направлено на сбор и сравнение ферзей Atta sexdens , но собрать девственных маток не удалось, поскольку идентифицированные гнезда не имели никакой репродуктивной активности в наблюдаемых отверстиях. Несмотря на трудности, общие исследования клеточных защитных механизмов муравьев-репродукторов могут способствовать прояснению иммунных реакций насекомых и улучшению современных методов борьбы.

Предпочтение муравьев-листорезов субпродуктам, используемым в приманках
В настоящее время наиболее применяемым методом контроля популяции колоний муравьев-листорезов является предложение токсичных приманок. Как правило, они связаны с привлекательным соединением растительного происхождения, причем лимонная пульпа является наиболее используемой. Однако известно, что каким-то образом работники могут связать токсичность приманки с привлекательным соединением после предварительного контакта и отклонить его, что делает метод неэффективным. Поэтому для возможного обмена между приманками предлагается использование альтернативных привлекательных соединений, таких как соя (100%), соя плюс лимонная мякоть (50%/50%), кешью плюс целлюлоза цитрусовых (50%/50%). Эти соединения были выбраны после предпочтительных экспериментов с колониями Atta sexdens и Atta laevigata . Гнезда были прикреплены стеклянными аренами и предлагались безинсектицидные приманки с различным составом (рисунок 9).

Figure 8
Рисунок 8: Скорость инкапсуляции маток Atta sexdens и Atta laevigata на разных репродуктивных стадиях. Уровни инкапсуляции оценивались через среднее значение серого цвета из изображений нейлоновых нитей, вставленных в гастер людей. Считалось, что самые темные нити представляют собой эффективную клеточную защиту, потому что предполагалось, что больше перекрывающихся гемоцитов выстилают мишень, как показано на оси X на рисунке. Спаренные матки Atta laevigata показали самый высокий уровень инкапсуляции (ANOVA, Tukey-Kramer, Standard Deviation; p < 0,01; N=29), следовательно, эффективная индивидуальная иммунная защита. Было замечено, что недавно спаренные матки и девственные матки одного и того же вида демонстрировали, аналогичным образом, более низкие показатели инкапсуляции и, следовательно, менее эффективную индивидуальную иммунную защиту. Полученные результаты показывают, что события спаривания и создания гнезда влияют на клеточные иммунные реакции маток Atta laevigata. Королевы Atta sexdens показали противоположные результаты, а MQ имел самый низкий уровень инкапсуляции (ANOVA, Tukey-Kramer, Standard Deviation, P < 0,01; N = 46). Однако, поскольку девственные матки вида не могли быть собраны, сравнение между всеми группами было невозможным. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

Figure 9
Рисунок 9: Предпочтение муравьев-листорезов приманочным субпродуктам эссе. Экспериментальная установка, направленная на оценку предпочтения работников Atta sexdens и Atta laevigata приманкам с различными привлекательными субпродуктами. Стеклянная арена была прикреплена к грибковой камере для хранения различных приманок, которые были разделены стеклянным разделителем. 5 г каждой приманки предлагались в случайных положениях, по три за раз. Приманки взвешивались после окончания эксперимента, что происходило либо через 1 ч наблюдения, либо как только приманка была полностью взята рабочими. Предпочтение оценивалось по загрузочной деятельности, которая оценивалась по нагрузке приманки, удаленной из кормовой камеры. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

Всего было использовано 32 колонии с примерно 1 л грибного сада. Колонии были предварительно собраны и поддержаны с использованием описанных протоколов. Наиболее загруженными методами обработки A. laevigata были лимонная мякоть, соя плюс лимонная мякоть (50% / 50%) и кешью плюс лимонная мякоть (50% / 50%; Рисунок 10). Аналогичным образом, наиболее загруженными обработками муравьев A. sexdens были лимонная мякоть, соя (100%) и соя плюс лимонная мякоть (50% / 50%; Рисунок 10). Результаты, полученные для двух видов, показали, что субпродукты сои и кешью были наиболее привлекательными после лимонной мякоти, предполагая, что другие составы приманок могут быть использованы для химического контроля популяции у муравьев-листорезов.

Figure 10
Рисунок 10: Привлекательные приманки означают процент загрузки работниками Atta laevigata и Atta sexdens . Аналогичным образом, обработка лимонной целлюлозы (100%), сои (100%) и сои плюс лимонной целлюлозы (50% / 50%) была наиболее загруженной для обоих видов. Тем не менее, наименее загруженное лечение для Atta sexdens (кешью плюс лимонная пульпа) было на 60% загружено работниками Atta laevigata . На протяжении всего эксперимента было выполнено пять повторений с пятью колониями каждого вида. Приманки были по-разному расположены внутри повторений; однако лимонная пульпа всегда присутствовала в качестве положительного контроля. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

Научно-исследовательская и научная работа
Ежегодно собирается около 350 маток и 100 колоний для содержания в лаборатории с 1990 года. По крайней мере, три стажера назначены для ежедневного ухода за муравьями, и в течение этого периода времени почти 250 колоний содержались одновременно для экспериментальных и образовательных целей каждый год. В период с 2016 по 2019 год около 2020 учащихся из примерно 34 школ смогли посетить Лабораторию муравьев-листорезов (LAFC) и понаблюдать за колониями муравьев, собранными и поддерживаемыми с использованием протоколов, описанных ранее. Экскурсии преследовали разные цели, от общей биологии до изучения социального поведения. Помимо известной важности насекомых, таких как муравьи, сложные физические структуры, построенные ими в природе, также наблюдаемые в искусственных гнездах, являются примером коллективных усилий и организации труда, которые имеют образовательный интерес. Для каждого образовательного уровня (рисунок 11) была дана своя подробная презентация, иногда следуя подходу, предложенному учителями, ответственными за студентов. Для этих целей поддерживаются две колонии с открытой установкой гнезда арены, каждая из которых имеет примерно 66 камер с 177 л грибного сада (рисунок 5). К сожалению, экскурсии были отменены во время пандемии, но можно увидеть растущий интерес среди педагогов, так как количество студентов, посещающих школу, возникло в течение последних 4 лет (рисунок 12). Тем не менее, для поддержания научной пропаганды во время пандемии виртуальные визиты были сделаны через платформы для обмена видео. Видео50, показывающее, как внутри гнездо муравьев-листорезов, сделанное в партнерстве с каналом Manual do Mundo, набрало более 2,4 миллиона просмотров и более 3000 комментариев менее чем за год. Там подошли к биологии и созданию муравьев-листорезов в лаборатории.

Figure 11
Рисунок 11: Уровни образования студентов на экскурсиях в течение 2016-2019 годов. Количество студентов, присутствовавших на экскурсиях в Лабораторию муравьев-листорезов в период 2016-2019 гг., согласно уровню образования. Экскурсии были направлены на различные подходы с участием колоний муравьев-листорезов, которые содержатся в Лаборатории муравьев-листоносцев. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

Figure 12
Рисунок 12: Количество студентов на экскурсиях за 2016-2019 годы. Количество студентов, присутствовавших на экскурсиях в Лаборатории муравьев-листорезов в период 2016-2019 гг. Можно увидеть рост интереса образовательных организаций к проведению выставок живых насекомых, таких как муравьи, которые позволяют студентам внимательно наблюдать. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

Вид Месяц и день Год Город Государство Страна Континент Широта Долгота Ссылки
Atta bisphaerica 4 ноября 1996 - - Бразилия Южная Америка - - 37
Атта капигуара 6 октября 2006 Ботукату Сан-Паулу Бразилия Южная Америка 22° 50' 60" С 48° 26' 10" Вт 38
Атта капигуара 27 октября 2007 Ботукату Сан-Паулу Бразилия Южная Америка 22° 50' 60" С 48° 26' 10" Вт 38
Атта капигуара Ноябрь 2008 Ботукату Сан-Паулу Бразилия Южная Америка 22° 50' 60" С 48° 26' 10" Вт 39
Атта капигуара Ноябрь 2009 Ботукату Сан-Паулу Бразилия Южная Америка 22° 50' 60" С 48° 26' 10" Вт 39
Atta cephalotes С марта по июнь - Ильеус Баия Бразилия Южная Америка - - 40
Atta cephalotes Сентябрь - Ильеус Баия Бразилия Южная Америка - - 40
Atta colombica 4 июня 1993 - Гамбоа Панама Центральная Америка - - 41
Atta colombica 7 июня 1993 - Гамбоа Панама Центральная Америка - - 41
Atta colombica - 1998 - Гамбоа Панама Центральная Америка - - 42
Atta laevigata 6 октября 2006 Ботукату Сан-Паулу Бразилия Южная Америка 22° 50' 60" С 48° 26' 10" Вт 39
Atta laevigata 27 октября 2007 Ботукату Сан-Паулу Бразилия Южная Америка 22° 50' 60" С 48° 26' 10" Вт 39
Atta laevigata Ноябрь 2008 Ботукату Сан-Паулу Бразилия Южная Америка 22° 50' 60" С 48° 26' 10" Вт 39
Atta laevigata Ноябрь 2009 Ботукату Сан-Паулу Бразилия Южная Америка 22° 50' 60" С 48° 26' 10" Вт 39
Atta laevigata 15 октября 2016 Рио-Кларо Сан-Паулу Бразилия Южная Америка - - Эта работа
Atta laevigata 26 октября 2016 Рио-Кларо Сан-Паулу Бразилия Южная Америка - - Эта работа
Atta laevigata 31 октября 2017 Рио-Кларо Сан-Паулу Бразилия Южная Америка - - Эта работа
Atta laevigata 6 ноября 2017 Рио-Кларо Сан-Паулу Бразилия Южная Америка - - Эта работа
Atta laevigata 22 сентября 2018 Рио-Кларо Сан-Паулу Бразилия Южная Америка - - Эта работа
Atta laevigata 10 октября 2018 Рио-Кларо Сан-Паулу Бразилия Южная Америка - - Эта работа
Atta laevigata 10 октября 2019 Рио-Кларо Сан-Паулу Бразилия Южная Америка - - Эта работа
Атта Лаэвигата * 21 октября 2020 Рио-Кларо Сан-Паулу Бразилия Южная Америка - - Эта работа
Atta laevigata 15 ноября 2020 Рио-Кларо Сан-Паулу Бразилия Южная Америка - - Эта работа
Atta laevigata 20 ноября 2020 Рио-Кларо Сан-Паулу Бразилия Южная Америка - - Эта работа
Atta laevigata 17 октября 2021 Рио-Кларо Сан-Паулу Бразилия Южная Америка - - Эта работа
Atta laevigata 25 октября 2021 Рио-Кларо Сан-Паулу Бразилия Южная Америка - - Эта работа
Atta opaciceps 8 марта 2022 Макаиба Риу-Гранди-ду-Норти Бразилия Южная Америка - - **
Атта сексденс - 1986 - 1991 гг. Висоза Минас-Жерайс Бразилия Южная Америка 20.45° С 42.51° з.д. 43
Атта сексденс 21 октября 2009 Ботукату Сан-Паулу Бразилия Южная Америка 22° 49' 53.25" S 48° 25' 24.22" ЗТ 44
Атта сексденс 18 сентября 2010 Рио-Кларо Сан-Паулу Бразилия Южная Америка 22° 23' 70.50" S 47° 32' 54.40" Вт 45
Атта сексденс 31 октября 2010 Ботукату Сан-Паулу Бразилия Южная Америка 22° 49' 53.25" S 48° 25' 24.22" ЗТ 44
Атта сексденс 10 октября 2011 Рио-Кларо Сан-Паулу Бразилия Южная Америка 22° 23' 70.50" S 47° 32' 54.40" Вт 45
Атта сексденс 10 октября 2011 Ботукату Сан-Паулу Бразилия Южная Америка 22° 23' 70.50" S 47° 32' 54.40" Вт 45
Атта сексденс 15 октября 2016 Рио-Кларо Сан-Паулу Бразилия Южная Америка - - Эта работа
Атта сексденс 26 октября 2016 Рио-Кларо Сан-Паулу Бразилия Южная Америка - - Эта работа
Атта сексденс 31 октября 2017 Рио-Кларо Сан-Паулу Бразилия Южная Америка - - Эта работа
Атта сексденс 6 ноября 2017 Рио-Кларо Сан-Паулу Бразилия Южная Америка - - Эта работа
Атта сексденс 22 сентября 2018 Рио-Кларо Сан-Паулу Бразилия Южная Америка - - Эта работа
Атта сексденс 10 октября 2018 Рио-Кларо Сан-Паулу Бразилия Южная Америка - - Эта работа
Атта сексденс 10 октября 2019 Рио-Кларо Сан-Паулу Бразилия Южная Америка - - Эта работа
Атта сексденс* 21 октября 2020 Рио-Кларо Сан-Паулу Бразилия Южная Америка - - Эта работа
Атта сексденс 15 ноября 2020 Рио-Кларо Сан-Паулу Бразилия Южная Америка - - Эта работа
Атта сексденс 20 ноября 2020 Рио-Кларо Сан-Паулу Бразилия Южная Америка - - Эта работа
Атта сексденс 17 октября 2021 Рио-Кларо Сан-Паулу Бразилия Южная Америка - - Эта работа
Атта сексденс 25 октября 2021 Рио-Кларо Сан-Паулу Бразилия Южная Америка - - Эта работа
Атта сексденс С ноября по март - Ильеус Баия Бразилия Южная Америка - - 40
Atta texana Май 1992 Накогдоче Техас США Северная Америка 32° С.Ш. 95° ЗТ 43
Atta vollenweideri - 2004 - 2010 - Тайвань Аргентина Южная Америка 26° 18' С 58° 49' Вт 46
Atta vollenweideri 6 октября 2006 - Тайвань Аргентина Южная Америка 26° 18' С 58° 49' Вт 46
Atta vollenweideri Октябрь 2009 - Тайвань Аргентина Южная Америка 25° 07' С 58° 10' Вт 46
Atta vollenweideri Ноябрь 2009 - Тайвань Аргентина Южная Америка 25° 07' С 58° 10' Вт 46
Atta vollenweideri 8 декабря 2010 - Тайвань Аргентина Южная Америка 26° 18' С 58° 49' Вт 46
Atta vollenweideri 24 октября - - Тайвань Аргентина Южная Америка 26° 18' С 58° 49' Вт 46
* Наблюдались только мужчины ** Мендонса, Г. А., личное общение (данные не опубликованы)

Таблица 1: Записи брачных периодов полета видов Atta. Брачные полеты происходят в разные периоды и частоты в зависимости от регионов, однако они обычно происходят весной, как указано в отчетах, собранных с территории муравьев Атты о встречаемости 37,38,39,40,41,42,43,44,45,46. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы загрузить эту таблицу.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Протокол, описанный здесь для поддержания колоний муравьев-листоносцев, был разработан и применяется более трех десятилетий напористым и воспроизводимым способом. Это позволило развивать исследования, которые были бы ограничены полевыми условиями. Таким образом, здоровые муравьи и колонии стали доступны для исследований в нескольких областях, таких как сравнительная морфология, токсикология 51,52, гистология53 и микробиология 54,55,56 на индивидуальном и колониальном уровне. Их содержание в лаборатории включает в себя несколько описанных здесь процедур, которые включают в себя подготовку участка в благоприятных абиотических условиях, сбор маток и молодых колоний, а также постоянный уход.

Несколько шагов имеют решающее значение для успеха содержания муравьев-листоносцев в контролируемых условиях. Королевы и колонии на ранних стадиях нуждаются в выдающемся уходе, и следование первоначальным процедурам может гарантировать их выживание. Например, необходимо определить место, где встречается вид и период, когда крылатые размножатели инициируют брачный полет. В Южной Америке большинство брачных полетов происходит весной (табл. 1). В настоящее время возможности разведения в неволе крайне низки, так как именно для регистрации брачного полета в лаборатории24. Кроме того, колонии муравьев в плодородной фазе большие и их трудно раскопать, и, учитывая архитектуру гнезда, найти и собрать матку6 сложно. Например, гнезда Atta laevigata могут составлять до 67м2 площади гнезда и занимать более 563м2 внутренней площади поверхности, разделенной на 7 864 камеры на глубине 7 м57.

Преимущество сбора маток сразу после брачного полета заключается в том, чтобы гарантировать большее количество репродуктивных форм за короткий промежуток времени и близко к поверхности. Из этого первого сборника можно разработать эксперименты с репродуктивными формами (рисунок 7), включая самцов. Ограничением техники является необходимость сбора репродуктивных особей в неопределенную дату. Если выживаемость маток низкая, становится необходимой вторая коллекция молодых колоний. Сбор молодых колоний через несколько месяцев после брачного полета гарантирует, что камера королевы не находится глубоко на поверхности. В этой фазе остаются только матки с большей приспособленностью, так как они выдержали фазу нехватки пищи и смогли позаботиться о грибке и первых рабочих во время клаустральной фазы 58,59,60,61. В лабораторных условиях выживаемость маток может достигать 14,5% в первые месяцы, даже при здоровом грибке, перенесенном на 90% маток (данные не опубликованы). Аналогичные данные о выживаемости сексденов Атты были зафиксированы Mota-Filho62. Это может быть связано с отсутствием развития грибка или естественным загрязнением энтомопатогенными грибами63.

Одним из основных недостатков сбора маток или колоний на ранних стадиях (рисунок 6 и рисунок 7) является сложность таксономической идентификации, поскольку это легче сделать через крупных рабочих12, которые появляются только через несколько месяцев, когда есть больше ресурсов для кормления личинок. Некоторые критические шаги в этой технике связаны с содействием росту грибного сада, поддержанием чистоты гнезд и предотвращением возможных побегов. Некоторые действия включают в себя частое добавление свежего растительного материала, который постоянно включается в гриб рабочими. Гриб используется в качестве источника глюкозы и крахмала для рабочих, а также в качестве белка для личинок64. Удаление старых и утилизированных материалов, а также поддержание гнезд в чистоте предотвращает появление возможных вредных микроорганизмов. Чтобы избежать побегов, соединения труб всегда должны проверяться, а в случае открытых арен поддерживать слой политетрафторэтилена. Преимущество поддержания колоний в конфигурациях гнезд описано для имитации реальной структуры, найденной в природе, с конкретными камерами для кормления и отходов, и колонией с полной социальной организацией (т.е. матка, рабочие и потомство). Исследования, проведенные с колониями без королевы63,65, показывают, что рабочие демонстрируют различное поведение из-за отсутствия королевы. Поведенческие исследования пришли к выводу, что королева важна для сплоченности колоний в дополнение к репродуктивной функции66.

Реализация рассматриваемых здесь протоколов может быть применена к другим видам, представляющим научный интерес, таким как другие грибы, растущие муравьи из рода Acromyrmex. Эти муравьи-листорезы также считаются сельскохозяйственными вредителями в определенных регионах Америки и в последнее время привлекли больший интерес к исследованиям на ранней стадии развития колоний67 и взаимодействию токсичных приманок68. Хотя эта работа конкретно адресована муравьям-листорезам, протокол содержания и различные описанные типы гнезд также могут быть применимы к другим группам муравьев. В каждом разделе процедуры излагаются основные потребности муравьев, которые необходимо учитывать при их сохранении в контролируемых условиях, такие как: определение наиболее подходящей диеты; предлагать пищу через регулярные промежутки времени в кормовой камере или в определенной области; обеспечить камеру высокого уровня влажности с гипсовым основанием для сохранения матки и незрелых; избегать побега муравьев через непредвиденные вещества, добавляемые в структуры искусственных гнезд; удалять материалы, утилизированные муравьями, из гнезд; и перенос колоний в другое искусственное гнездо, когда это необходимо.

За последнее десятилетие университеты и исследователи посвятили себя тому, чтобы быть более инклюзивными, приглашая общество стать частью лабораторий и их исследований69. С большой решимостью охватывая образовательную цель, муравьиные лаборатории стали инструментами для привлечения любопытства людей и соединения академического мира с общими знаниями. Типы гнезд, представленные в этой работе, могут быть использованы в различных видах деятельности в зависимости от цели, таких как образование и экспозиции. Например, открытые гнезда (рисунок 5) должны демонстрироваться посетителям в университете, в то время как закрытые гнезда (рисунок 4) полезны для научных ярмарок и передвижных выставок из-за удобства транспортировки. Во всех случаях широкая публика может наблюдать за колониями муравьев, узнавать об основах биологии и забавных фактах, а также быть подстрекаемой к допросу. На более выразительном уровне, благодаря проектам расширения, таким как «Primeiros Passos na Ciência» (Первые шаги в науке)69, студенты могут фактически стать частью исследовательских групп. Следовательно, исследования муравьев с образовательными целями приносят пользу развитию студентов, поскольку они улучшают исследования и опыт, поощряя при этом больший интерес к научным исследованиям.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

У авторов нет конфликта интересов для раскрытия.

Acknowledgments

Посвящается Марио Аутуори (памяти) и Вальтеру Уго де Андраде Кунья, которые внесли большой вклад в исследования муравьев-листоносцев. Мы признаем поддержку Государственного университета Сан-Паулу и Института биологических наук. Это исследование было частично профинансировано Координационным советом по вопросам образования и развития (CNPq), Фондом ампаро в песке Сан-Паулу (FAPESP) и Фондом по развитию образования и развития ООН (Fundunesp).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Entomologic forceps N/A N/A N/A
Glass tank N/A N/A Tempered glass, custom made
Hose N/A N/A Transparent, PVC 1/2 Inch x 2,0 mm
Latex gloves Descarpack 550301 N/A
Nitrile gloves Descarpack 433301 N/A
Open arena N/A N/A Polypropylene crate
Plaster pouder N/A N/A Plaster pouder used in construction, must be absorbant
Plastic Containers for collection Prafesta Natural Cód.: 8231/Natural Cód.: 8262 Lidded, transparent , polypropylene
Plastic containers for nests Prafesta Discontinued Polystyrene, hermetic
Teflon Dupont N/A Polytetrafluoroethylene liquid (PTFE Dispertion 30)

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Wilson, E. O. The Insect Societies. , Harvard University Press. Cambridge, Massachusetts, USA. (1971).
  2. Ortiz, D. P., Elizalde, L., Pirk, G. I. Role of ants as dispersers of native and exotic seeds in an understudied dryland. Ecological Entomology. 46 (3), 626-636 (2021).
  3. Christianini, A. V., Oliveira, P. S. Birds and ants provide complementary seed dispersal in a neotropical savanna. Journal of Ecology. 98 (3), 573-582 (2010).
  4. Camargo, P. H. S. A., Martins, M. M., Feitosa, R. M., Christianini, A. V. Bird and ant synergy increases the seed dispersal effectiveness of an ornithochoric shrub. Oecologia. 181 (2), 507-518 (2016).
  5. Sanders, D., van Veen, F. J. F. Ecosystem engineering and predation: the multi-trophic impact of two ant species. Journal of Animal Ecology. 80 (3), 569-576 (2011).
  6. Swanson, A. C., et al. Welcome to the Atta world: A framework for understanding the effects of leaf-cutter ants on ecosystem functions. Functional Ecology. 33 (8), 1386-1399 (2019).
  7. Meyer, S. T., et al. Leaf-cutting ants as ecosystem engineers: topsoil and perturbations around Atta cephalotes nests reduce nutrient availability. Ecological Entomology. 38 (5), 497-504 (2013).
  8. Sosa, B., Brazeiro, A. Positive ecosystem engineering effects of the ant Atta vollenweideri on the shrub Grabowskia duplicata. Journal of Vegetation Science. 21 (3), 597-605 (2010).
  9. De Almeida, T., et al. Above- and below-ground effects of an ecosystem engineer ant in Mediterranean dry grasslands. Proceedings of the Royal Society B: Biological Sciences. 287 (1935), 20201840 (2020).
  10. Folgarait, P. J. Ant biodiversity and its relationship to ecosystem functioning: a review. Biodiversity & Conservation. 7 (9), 1221-1244 (1998).
  11. Hölldobler, B., Wilson, E. O. The Ants. , Harvard University Press. (1990).
  12. Barrera, C. A., Sosa-Calvo, J., Schultz, T. R., Rabeling, C., Bacci, M. Phylogenomic reconstruction reveals new insights into the evolution and biogeography of Atta leaf-cutting ants (Hymenoptera: Formicidae). Systematic Entomology. 47 (1), 13-35 (2021).
  13. Hölldobler, B., Wilson, E. O. The Leafcutter Ants: Civilization By Instinct. , WW Norton & Company. (2011).
  14. Branstetter, M. G., et al. Dry habitats were crucibles of domestication in the evolution of agriculture in ants. Proceedings of the Royal Society B: Biological Sciences. 284 (1852), 20170095 (2017).
  15. Solomon, S. E., et al. The molecular phylogenetics of Trachymyrmex Forel ants and their fungal cultivars provide insights into the origin and coevolutionary history of ‘higher-attine’ ant agriculture. Systematic Entomology. 44 (4), 939-956 (2019).
  16. Cristiano, M. P., Cardoso, D. C., Sandoval-Gómez, V. E., Simões-Gomes, F. C. Amoimyrmex Cristiano, Cardoso & Sandoval, gen. nov. (Hymenoptera: Formicidae): a new genus of leaf-cutting ants revealed by multilocus molecular phylogenetic and morphological analyses. Austral Entomology. 59 (4), 643-676 (2020).
  17. Schultz, T. R., Brady, S. G. Major evolutionary transitions in ant agriculture. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (14), 5435-5440 (2008).
  18. Mueller, U. G., et al. Phylogenetic patterns of ant–fungus associations indicate that farming strategies, not only a superior fungal cultivar, explain the ecological success of leafcutter ants. Molecular Ecology. 27 (10), 2414-2434 (2018).
  19. Mueller, U. G., et al. Biogeography of mutualistic fungi cultivated by leafcutter ants. Molecular Ecology. 26 (24), 6921-6937 (2017).
  20. Weber, N. A. The fungus-culturing behavior of ants. American Zoologist. 12 (3), 577-587 (1972).
  21. Wilson, E. O. Caste and division of labor in leaf-cutter ants (Hymenoptera: Formicidae: Atta). Behavioral Ecology and Sociobiology. 7 (2), 157-165 (1980).
  22. Della Lucia, T. M. C. Formigas cortadeiras: da bioecologia ao manejo. Viçosa Editora UFV. 421, University of Viçosa Press. Viçosa, Minas Gerais, Brazil. (2011).
  23. Autuori, M. Contribuição para o conhecimento da saúva (Atta spp). I. Evolução do sauveiro (Atta sex dens rubolpilosa Forel, 1908). Arquivos do Instituto Biologico Saul Paulo. 12, 197-228 (1941).
  24. Bueno, O. C., Hebling, M. J. A., Schneider, M. O., Pagnocca, F. C. Ocorrência de formas aladas de Atta sexdens rubropilosa Forel (Hymenoptera: Formicidae) em colônias de laboratório. Neotropical Entomology. 31 (3), 469-473 (2002).
  25. Mariconi, F. A. M. Biologo. As Saúvas. , Ceres Press. Piracicaba, São Paulo, Agronômica. (2021).
  26. Bento, J. M. S. Condições climáticas para o vôo nupcial e reconhecimento dos indivíduos em Atta sexdens rubropilosa (Hymenoptera: Formicidae). , Viçosa. Minas Gerais, Brazil. Master's dissertation (1993).
  27. Little, A. E. F., Murakami, T., Mueller, U. G., Currie, C. R. The infrabuccal pellet piles of fungus-growing ants. Naturwissenschaften. 90 (12), 558-562 (2003).
  28. Kerr, W. E. Acasalamento de rainhas com vários machos em duas espécies da tribo Attini. Revista Brasileira de Biologia. 21, 45-48 (1961).
  29. Kerr, W. E. Tendências evolutivas na reprodução dos himenópteros sociais. Arquivos do Museu Nacional. 52, (1962).
  30. Cremer, S., Armitage, S. A. O., Schmid-Hempel, P. Social immunity. Current Biology. 17 (16), 693-702 (2007).
  31. Hernández, J. V., Jaffé, K. Dano econômico causado por populações de formigas Atta laevigata (F. Smith) em plantações de Pinus caribaea (Mor.) e elementos para o manejo da praga. Anais da Sociedade Entomológica do Brasil. 24 (2), 287-298 (1995).
  32. Kempf, W. W. Catálogo abreviado das formigas da Região Neotropical Studia Entomologica. antbase.org. 15, 3 (1972).
  33. Della Lucia, T. M. C., Gandra, L. C., Guedes, R. N. C. Managing leaf-cutting ants: peculiarities, trends and challenges. Pest Management Science. 70 (1), 14-23 (2013).
  34. Boaretto, M. A. C., Forti, L. C. Perspectivas no controle de formigas-cortadeiras. Série Técnica IPEF. 11 (30), 31-46 (1997).
  35. Folgarait, P. J., Goffré, D. Conidiobolus lunulus, a newly discovered entomophthoralean species, pathogenic and specific to leaf-cutter ants. Journal of Invertebrate Pathology. 186, 107685 (2021).
  36. Cardoso, S. R. S., Rodrigues, A., Forti, L. C., Nagamoto, N. S. Pathogenicity of filamentous fungi towards Atta sexdens rubropilosa (Hymenoptera: Formicidae). International Journal of Tropical Insect Science. 42 (2), 1215-1223 (2022).
  37. Ichinose, K., Rinaldi, I., Forti, L. C. Winged leaf-cutting ants on nuptial flights used as transport by Attacobius spiders for dispersal. Ecological Entomology. 29 (5), 628-631 (2004).
  38. Pagnocca, F. C., Rodrigues, A., Nagamoto, N. S., Bacci, M. Yeasts and filamentous fungi carried by the gynes of leaf-cutting ants. Antonie Van Leeuwenhoek. 94 (4), 517-526 (2008).
  39. Attili-Angelis, D., et al. Novel Phialophora species from leaf-cutting ants (tribe Attini). Fungal Diversity. 65 (1), 65-75 (2014).
  40. Delabie, J. H. C., do Nascimento, I. C., Mariano, C. S. F. Estratégias de reprodução e dispersão em formigas attines, com exemplos do sul da Bahia. XIX Congresso Brasileiro de Entomologia. , 16-21 (2002).
  41. Fjerdingstad, E. J., Boomsma, J. J. Variation in size and sperm content of sexuals in the leafcutter ant Atta colombica. Insectes Sociaux. 44 (3), 209-218 (1997).
  42. Currie, C. R., Mueller, U. G., Malloch, D. The agricultural pathology of ant fungus gardens. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 96 (14), 7998-8002 (1999).
  43. Moser, J. C., et al. Eye size and behaviour of day-and night-flying leafcutting ant alates. Journal of Zoology. 264 (1), 69-75 (2004).
  44. Moreira, S. M., Rodrigues, A., Forti, L. C., Nagamoto, N. S. Absence of the parasite Escovopsis in fungus garden pellets carried by gynes of Atta sexdens. Sociobiology. 62 (1), 34-38 (2015).
  45. Arcuri, S. L., et al. Yeasts found on an ephemeral reproductive caste of the leaf-cutting ant Atta sexdens rubropilosa. Antonie Van Leeuwenhoek. 106 (3), 475-487 (2014).
  46. Staab, M., Kleineidam, C. J. Initiation of swarming behavior and synchronization of mating flights in the leaf-cutting ant Atta vollenweideri FOREL, 1893 (Hymenoptera: Formicidae). Myrmecol. News. 19, 93-102 (2014).
  47. Gálvez, D., Chapuisat, M. Immune priming and pathogen resistance in ant queens. Ecology and Evolution. 4 (10), 1761-1767 (2014).
  48. Baer, B., Armitage, S. A. O., Boomsma, J. J. Sperm storage induces an immunity cost in ants. Nature. 441 (7095), 872-875 (2006).
  49. Carlos, A. A. Semioquímicos e comunicação sonora em formigas cortadeiras (Hymenoptera: Formicidae). , Rio Claro, São Paulo, Brazil. Doctoral's thesis (2013).
  50. do Mundo, M. Veja um FORMIGUEIRO por DENTRO. Boravê. , Available from: https://youtu.be/sN99x_Rjf90 (2021).
  51. Ortiz, G., Vieira, A. S., Bueno, O. C. Toxicological and morphological comparative studies of insecticides action in leaf-cutting ants. International Journal of Agriculture Innovations and Research. 6 (3), 516-522 (2017).
  52. Decio, P., Silva-Zacarin, E. C. M., Bueno, F. C., Bueno, O. C. Toxicological and histopathological effects of hydramethylnon on Atta sexdens rubropilosa (Hymenoptera: Formicidae) workers. Micron. 45, 22-31 (2013).
  53. Vieira, A. S., Morgan, E. D., Drijfhout, F. P., Camargo-Mathias, M. I. Chemical composition of metapleural gland secretions of fungus-growing and non-fungus-growing ants. Journal of Chemical Ecology. 38 (10), 1289-1297 (2012).
  54. Vieira, A. S., Ramalho, M. O., Martins, C., Martins, V. G., Bueno, O. C. Microbial communities in different tissues of Atta sexdens rubropilosa leaf-cutting ants. Current Microbiology. 74 (10), 1216-1225 (2017).
  55. Ramalho, M. deO., Martins, C., Morini, M. S. C., Bueno, O. C. What can the bacterial community of Atta sexdens (Linnaeus, 1758) tell us about the habitats in which this ant species evolves. Insects. 11 (6), 332 (2020).
  56. Machado, L. M., et al. Attractivity or repellence: relation between the endophytic fungi of Acalypha, Colocasia and the leaf-cutting ants—Atta sexdens. Advances in Entomology. 9 (2), 85-99 (2021).
  57. Moreira, A., Forti, L. C., Andrade, A. P., Boaretto, M. A., Lopes, J. Nest architecture of Atta laevigata (F. Smith, 1858) (Hymenoptera: Formicidae). Studies on Neotropical Fauna and Environment. 39 (2), 109-116 (2004).
  58. Della Lucia, T. M. C., Moreira, D. D. O., Oliveira, M. A., Araújo, M. S. Perda de peso de rainhas de Atta durante a fundação e o estabelecimento das colônias. Revista Brasileira de Biologia. 55 (4), 533-536 (1995).
  59. Fujihara, R. T., Camargo, R. daS., Forti, L. C. Lipid and energy contents in the bodies of queens of Atta sexdens rubropilosa Forel (Hymenoptera, Formicidae): pre-and post-nuptial flight. Revista Brasileira de Entomologia. 56 (1), 73-75 (2012).
  60. da Silva Camargo, R., Forti, L. C. Queen lipid content and nest growth in the leaf cutting ant (Atta sexdens rubropilosa) (Hymenoptera: Formicidae). Journal of Natural History. 47, 65-73 (2013).
  61. Camargo, R. S., Forti, L. C., Fujihara, R. T., Roces, F. Digging effort in leaf-cutting ant queens (Atta sexdens rubropilosa) and its effects on survival and colony growth during the claustral phase. Insectes Sociaux. 58 (1), 17-22 (2011).
  62. Mota Filho, T. M. M., Garcia, R. D. M., Camargo, R. S., Stefanelli, L. E. P., Forti, L. C. Observations about founding queens (Atta sexdens) and their unusual behavior. International Journal of Agriculture Innovations and Research. 9, 352-357 (2021).
  63. Barcoto, M. O., Pedrosa, F., Bueno, O. C., Rodrigues, A. Pathogenic nature of Syncephalastrum in Atta sexdens rubropilosa fungus gardens. Pest Management Science. 73 (5), 999-1009 (2017).
  64. Silva, A., Bacci, M., Pagnocca, F. C., Bueno, O. C., Hebling, M. J. A. Production of polysaccharidases in different carbon sources by Leucoagaricus gongylophorus Möller (Singer), the symbiotic fungus of the leaf-cutting ant Atta sexdens Linnaeus. Curr. Microbiology. 53 (1), 68-71 (2006).
  65. Majoe, M., Libbrecht, R., Foitzik, S., Nehring, V. Queen loss increases worker survival in leaf-cutting ants under paraquat-induced oxidative stress. Philosophical Transactions of the Royal Society B. 376 (1823), 20190735 (2021).
  66. Della Lucia, T. M. C., Peternelli, E. F. O., Lacerda, F. G., Peternelli, L. A., Moreira, D. D. O. Colony behavior of Atta sexdens rubropilosa (Hymenoptera: Formicidae) in the absence of the queen under laboratory conditions. Behavioural Processes. 64 (1), 49-55 (2003).
  67. Sales, T. A., Toledo, A. M. O., Zimerer, A., Lopes, J. F. S. Foraging for the fungus: why do Acromyrmex subterraneus (Formicidae) queens need to forage during the nest foundation phase. Ecological Entomology. 46 (6), 1364-1372 (2021).
  68. Forti, L. C., et al. Do workers from subspecies Acromyrmex subterraneus prepare leaves and toxic baits in similar ways for their fungus garden. Neotropical Entomology. 49 (1), 12-23 (2020).
  69. Dorigo, A. S., et al. Projeto Primeiros Passos na Ciência: rompendo barreiras sociais e estreitando laços entre a comunidade acadêmica e o ensino médio público. Revista Brasileira de Extensão Universitária. 11 (1), 47-59 (2020).

Tags

Биология выпуск 186
Сбор и длительное содержание муравьев-листорезов (<em>Atta</em>) в лабораторных условиях
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Nogueira, B. R., de Oliveira, A. A., … More

Nogueira, B. R., de Oliveira, A. A., da Silva, J. P., Bueno, O. C. Collection and Long-Term Maintenance of Leaf-Cutting Ants (Atta) in Laboratory Conditions. J. Vis. Exp. (186), e64154, doi:10.3791/64154 (2022).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter