Summary
여기서는 자궁내막 탈락 연구 분야의 대표적인 자궁내막 탈락 실험인 난소 절제된 마우스를 이용하여 인공 탈락 모델을 생성하는 방법을 설명합니다.
Abstract
자궁 내막 탈락은 월경 및 임신과 밀접한 관련이있는 자궁 내막의 독특한 분화 과정입니다. 탈락 장애는 불임, 재발성 유산 및 조산과 같은 다양한 자궁내막 장애를 유발합니다. 생식 연구에서 자궁내막 탈락 모델의 개발 및 사용은 오랫동안 생식 연구자들에게 하이라이트였습니다. 마우스는 번식 및 탈락을 연구하는 데 광범위하게 사용되었습니다. 탈락화와 관련하여 잘 정립된 세 가지 마우스 모델, 즉 자연 임신 탈락(NPD), 인공 탈락화(AD) 및 시험관 내 탈락화(IVD)가 있습니다. 그 중 AD는 구현하기 쉽고 NPD에 가까운 마우스 탈락화에 대한 신뢰할 수 있는 모델로 간주됩니다. 이 논문은 난소 효과를 피하기 위해 난소 절제술을 통한 마우스 인공 탈락 모델의 생성 및 적용 과정의 수정된 방법에 초점을 맞추고 있으며, 이는 그룹 내 작은 분산으로 재현성이 높은 결과를 얻을 수 있습니다. 이 방법은 자궁내막 탈락 연구를 위한 훌륭하고 신뢰할 수 있는 동물 모델을 제공합니다.
Introduction
인간 보조 생식 기술의 발달로 현재 체외 수정-배아 이식(IVF-ET)의 임상 임신율은 자연 임신에 도달하거나 심지어 초과했습니다. 그럼에도 불구하고 보조 생식 임상 실습에 있는 많은 환자들은 여전히 여러 번의 배아 이식을 받지만 원하는 대로 임신을 달성하지 못합니다. 그러나 그 구체적인 분자 메커니즘은 여전히 불분명하므로 임상 개입은 효과가 없으며 이는 생식 의학이 직면한 중요한 과제 중 하나입니다 1,2.
자궁내막 인자는 IVF 실패 원인의 약 2/3를 차지한다3. 인간 배아 착상은 위치 지정, 접착 및 침습의 세 단계로 나뉩니다 4,5,6. 산모 자궁 내막은 배아의 도착을 충족시키기 위해 일련의 변화를 겪습니다. 착상 "창 기간"을 형성하는 것은 배아 이식에 유리한 조건을 제공한다 7,8.
대부분의 포유류에서 배반포가 자궁의 내강 상피에 부착 된 후 배반포를 둘러싼 간질 세포가 빠르게 증식하고 분화하기 시작하고 중간엽의 빠른 리모델링으로 모양과 기능이 바뀌어 배아 이식이 이루어진다 5,9,10. 부위의 부피와 무게가 급격히 증가하면 배반포가 자궁 기질에 박히게 되는데, 이 과정을 탈락화(decidualization)라고 한다 11. 자궁내막 기질은 임신을 준비하기 위해 분화하고 개조하는 반면, 기질 세포의 전이는 탈락 세포가 기능을 수행할 수 있는 공간과 새로운 신호 연결을 제공합니다12,13. 기질 세포는 탈락 세포로 변형되어 프로락틴(PRL), 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질 1(Igfbp1) 등과 같은 많은 상징적 인자를 분비합니다. 연구에 따르면 비정상적인 탈락이 배아 이식 실패의 주요 원인 중 하나이지만 비정상적인 탈락의 원인은 여전히 불분명하며 더 많은 설명이 필요합니다 1,14.
마우스 인공 탈락 모델은 탈락의 기초가 되는 생리학적 과정과 분자 메커니즘을 연구하는 데 필수적입니다. 인공 탈락 (AD)은 주로 임신 또는 생리주기를 시뮬레이션하기 위해 인공적인 방법으로 확립 된 자궁 내막 탈락 과정을 말합니다. 형태학적인 측면에서, 임신 탈락과 인공 탈락 사이에는 전반적인 차이가 거의 없다15,16. 자궁 땀샘은 탈락 형성 전에 자궁 내막에 존재하며 탈락 후 사라집니다. 유전자 발현과 관련하여 자연 임신 탈락(NPD)과 AD15 사이에는 약간의 차이만 확인됩니다. 결과적으로, 생쥐의 인공 탈락 모델은 인간 생식 질환의 알려지지 않은 병인과 새로운 치료법을 탐구하기 위해 임신 탈락을 시뮬레이션할 수 있습니다.
NPD, AD 및 시험관 내 탈락화(IVD)는 마우스 탈락을 달성하기 위한 세 가지 방법입니다. NPD 모델은 자연 임신에 의존하며 배아의 영향을 포함하여 산모의 생리적 상태에 가장 가깝습니다. 착상 부위와 비 착상 부위의 차이점을 비교하는 것은 탈락을 연구하는 데 더 생리학적이고 편리한 접근 방식입니다. AD 모델은 배아의 영향을 피하기 위해 정관 수술을 받은 수컷과 교미한 가임신한 암컷 마우스에서 탈락을 유도하기 위해 각성제로 참기름을 자궁 내 주사하여 개발되었습니다. NPD와 AD 모델은 서로 다른 연구 목적에서 필수적인 역할을 하지만 모체 호르몬 대사의 다양한 활동으로 인한 짝짓기 실패와 그룹 내 차이를 피할 수는 없습니다. IVD는 세포 수준에서 에스트로겐과 프로게스테론을 병용하여 치료하는 방법으로보다 엄격한 실험 조건과 작동 능력이 필요합니다. 그러나, 시험관내 모델은 생리학적 조건15 하에서 탈락 반응을 완전히 시뮬레이션할 수 없다. 따라서 우리는 탈락에 대한 내인성 호르몬의 영향을 줄이기 위해 전통적인 AD에서 변형된 간단하고 개선된 유도 방법을 제안합니다. 탈락 유도의 성공을 보장함으로써 생리적 상태에 더 가깝고 배아 인자를 배제해야 하는 실험에 더 적합합니다.
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Protocol
설명된 모든 동물 실험은 난징 대학 의과대학 부속 드럼 타워 병원 동물 사용 및 관리 위원회(제20171202호)의 승인을 받았습니다. 모든 작업은 적절한 동물 관리 및 사용 기관 및 국가 지침을 따릅니다.
참고: 마우스는 온도 22°C ± 1°C, 상대 습도 50% ± 1%, 명암 주기 12시간/12시간, 음식과 물에 대한 자유로운 접근이 가능한 특정 병원체가 없는(SPF) 환경에서 자랐습니다.
1. 마우스 난소 절제술
- 수술 1일 전에 고온 고압 살균기로 수술 기구를 소독하십시오.
- 8주령 C57BL/6 마우스의 체중을 측정하고 그에 따라 1% 펜토바르비탈 나트륨을 복강내(i.p) 주사하여 마우스를 마취합니다. 사용된 용량은 40mg/kg이다17. 이 용량은 난소 절제술의 요구 사항을 충족하는 40-60 분의 진정 작용을 제공합니다. 수술 전 진통의 경우 마우스에 5mg/kg 멜록시캄(s.c)을 주사합니다.
참고 : 생쥐의 성공적인 마취는 심부 근육 반사의 소실과 꾸준한 호흡으로 나타낼 수 있습니다. 성공적인 마취의 징후로는 안안을 만질 때 눈을 깜빡이지 않고, 혀를 당길 때 삼키지 않고, 발가락 사이의 피부를 꼬집었을 때 다리를 구부리지 않고, 꼬리를 바늘로 꿰맬 때 튀지 않는 것이 있습니다. - 마취 중 건조를 방지하기 위해 안구에 보호용 눈 연고를 바르십시오.
- 마우스가 완전히 마취되면 수술을 시작하십시오. 마우스를 수술면의 엎드린 자세에 놓고 고정하고 비눗물로 적신 후 뒤쪽의 머리카락을 면도하십시오. 면도 후 70 % 에탄올로 피부를 소독하십시오.
- 척추와 평행한 양쪽 뒷다리의 허벅지 뿌리 위쪽 가장자리에서 0.5cm(또는 갈비뼈 아래 1.0cm)에서 수술 절개 부위를 찾습니다(그림 1A).
참고: 정확한 절개 위치는 난소의 위치를 빠르게 파악하는 데 필수적입니다. - 절개 부위를 중심으로 iodophor 3x로 절개 부위를 소독 한 다음 절개 부위 주위에 수술 용 드레이프를 놓습니다.
- 가위를 사용하여 약 0.5-1.0cm의 세로 절개를하십시오. 근막을 자르고 핀셋으로 근육을 수동적으로 분리하십시오.
- 얇은 근육층을 통해 신장의 아래쪽 극에 가까운 절개 부위에서 흰색 지방 패드 조각을 찾습니다(그림 1B).
참고: 백색 지방 패드는 난소의 위치를 나타내는 가장 확실한 지표입니다. - 지혈 클립으로 지방 덩어리를 고정하고 지방 패드로 감싼 난소를 절개 부위에서 빼냅니다.
- 구부러진 핀셋으로 난소와 나팔관의 접합부를 고정하고 가위로 난소 척추를 따라 난소를 제거하십시오. 전기 응고 펜이나 알코올 램프에서 가열 된 1mL 주사기 바늘을 사용하여 출혈을 멈 춥니 다.
참고 : 자궁 뿔에 참기름을 주입하기위한 해부학 적 랜드 마크 인 나팔관을 보존하십시오. - 조직 유착을 방지하기 위해 수술 절개 부위를 생리식염수로 헹구고, 4-0 봉합사를 사용하여 근육과 피부를 각각 꿰매고, 수술 절개 부위를 다시 요오드포어로 소독합니다.
- 마우스를 케이지의 엎드린 자세에 놓고 광원과 환기 시스템이 장착 된 25 °C 인큐베이터에서 약 2 시간 동안 소생시킵니다.
- 수술 후 생쥐에주의를 기울이고 완전히 회복 될 때까지 원래의 먹이 장소에 다시 넣고 충분한 물과 음식을주십시오.
2. 수술 후 휴식과 에스트로겐 및 프로게스테론 제제
- 난소 절제술 후 2 주 동안 마우스를 쉬게하십시오.
- 매우 깨끗한 캐비닛에서 에스트로겐(2ng/μL)과 프로게스테론(0.2ng/μL)을 RNA 무효소 원심분리기 튜브의 참기름에 넣습니다.
- 원심분리기 튜브를 37°C의 자동 온도 조절 수조에 넣고 튜브를 계속 흔들어 용해를 가속화합니다.
- 완전히 용해 된 후, 참기름 용액을 100 μL aliqouts로 나누어 편리하게 사용할 수 있습니다. 제조된 에스트로겐 및 프로게스테론 용액을 4°C의 냉장고에 보관한다.
3. 유도 인공 탈락 모델
- 참기름 50μL에 에스트로겐 100ng을 각 마우스에 3일 동안 피하(s.c) 주사한 후 2일 동안 휴식을 취한다(15).
알림: 에스트로겐과 프로게스테론이 공식화되어 다른 장소에 배치되었는지 확인하십시오. 프로게스테론에 의한 에스트로겐의 오염은 실패로 이어질 수 있습니다. - 참기름 50 μL에 프로게스테론 1 mg과 에스트로겐 10 ng을 각 마우스에 3일 동안 추가로 주입한다15.
- 마우스를 조작하여 인공 탈락 모델을15 6시간 후에 3차 에스트로겐-프로게스테론 복합 주사를 유도한다.
- 나팔관 하단에 있는 자궁 뿔을 찾아 자궁 뿔과 함께 참기름 20μL를 천천히 주입하고 조직을 뒤로 밀고 절개 부위를 봉합하고 마우스가 회복되도록 합니다. 수술에 대한 접근법은 마우스 난소 절제술과 동일하다15.
참고: 난소 절제술이 성공한 경우에만 두 번째 수술을 진행합니다(피부 절개가 잘 치유되고 난소가 완전히 절제되며 나팔관의 잔여 말단이 주변 조직에 부착되지 않음).
참고: AD 모델을 유도하려면 참기름 20μL가 적합합니다. 20μL 이상의 참기름은 다른 면에 쉽게 침투합니다. - 프로게스테론 1mg과 에스트로겐 10ng(H.)이 함유된 참기름 50μL를 4일 더 주입합니다. 그림 215,18의 세부 사항을 참조하십시오.
4. 시료 채취
- 생쥐(n=6)를 이산화탄소 질식으로 안락사시키고 자궁을 채취한다. 양측 자궁의 모양을 관찰하고, 사진을 찍고, 자궁 뿔의 무게를 잰다(그림 3A, B).
- 자궁 조직의 3-5mm를 10 % 포르말린으로 고정하고 파라핀에 넣고 절개하십시오. 헤마톡실린과 에오신으로 절편을 염색하여 형태학적 변화를 관찰한다19 (도 4A).
- 자궁 조직의 또 다른 3-5mm를 최적 절단 온도 화합물(OCT)에 넣고 액체 질소에서 동결한 다음 -80°C 냉장고에 보관합니다. 조직을 10 μm로 절편하고, 아조 커플링법20 에 의해 자궁 조직에서 알칼리성 포스파타제 활성을 검출하였다(도 4B).
참고: 파라핀 절편이 아닌 ALP 함량을 검출하기 위해 냉동 절편을 사용하여 만족스러운 결과를 얻을 수 있습니다. - Trizol 시약으로 자궁의 총 RNA를 추출하고 qPCR 마스터 믹스(Table of Materials)를 사용하여 Real-Time PCR 시스템(Table of Materials)에서 정량적 실시간 PCR(qPCR)을 수행하여 prolactin family 8 subfamily member 2(Prl8a2), 알칼리성 포스파타제 간/뼈/신장(Alpl) 및 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질 1(Igfbp1)15의 상대적 mRNA 발현을 18S mRNA 수준으로 정규화하여 검출합니다(그림 4C-E ). PCR 조건을 따른다: 단계 1, 30초 동안 95°C; 2단계, 95°C에서 10초 동안 및 60°C에서 30초; 주기를 40 회 반복하십시오. 프라이머 서열의 전체 목록은 표 1에 제공된다.
- 적절한 소프트웨어에서 통계 분석을 위해 2-ΔΔCT 방법과 t-test 방법을 사용하여 qPCR 데이터를 분석합니다. 본 연구에서는 p < 0.05가 통계적으로 유의한 것으로 간주되었다.
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Representative Results
마우스 탈락 모델 지수에는 자궁의 일반적인 형태, 탈락 및 비탈락 자궁의 질량 비율, 자궁내막의 조직학적 형태 및 탈락 마커 분자의 발현 수준이 포함됩니다. 기름에 의해 유도 된 생쥐의 인공 탈락 자궁의 일반적인 형태는 임신 중 자궁의 형태에 더 가깝습니다. 자궁체가 두꺼워지고 자궁강이 비 유도 측보다 작아집니다. 유도된 자궁 뿔의 부피와 무게는 유도되지 않은 쪽의 부피와 무게보다 훨씬 높습니다(그림 3A, B). 자궁 조직의 HE 염색은 땀샘이 사라지고 유도된 뿔의 자궁내막 기질 세포가 세포 경계가 불분명한 크고 둥근 세포질 및 다핵 탈락 세포로 분화되었음을 보여주었습니다. 유도되지 않은 측면 절편은 정상적인 생리학적 상태 하에서 자궁내막 조직 형태를 보여줍니다(그림 4A). 아조 커플링법의 결과는 오일 유도 측의 알칼리성 포스파타제 함량이 비유도 측보다 현저히 높은 것으로 나타났다(도 4B). qPCR 결과는 유도된 뿔에서 Prl8a2, Alpl 및 Igfbp1의 mRNA 발현이 유도되지 않은 뿔에서보다 유의하게 더 높았으며, 이는 오일이 마우스에서 인공 탈락을 유도할 수 있음을 시사합니다(그림 4C-E).
그림 1: 마우스 난소 절제술의 수술 절개. (A) 마우스 난소 절제술 위치. (B) 난소 절제술 중 마우스 난소의 위치. (C) 난소 절제술 중 난소 부위. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 2: 작업 절차. 전체 절차에는 난소 절제술, 수술 후 휴식, 인공 탈락 모델의 유도 및 표현형 검증이 포함됩니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 3: 마우스 인공 탈락 모델의 생성 . (A) 오일에 의해 유도된 인공 탈락의 대표적인 사진. 오른쪽 자궁에는 기름 (-)이라는 기름이 주입되지 않았습니다. 왼쪽 자궁에 오일(+)이라는 이름의 오일을 주입했습니다. (B) 기름을 넣거나 넣지 않고 주사한 자궁의 무게. p < 0.001. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 4: 마우스 인공 탈락 모델의 검증 . (A) 오일에 의해 유도된 인공 탈락의 대표적인 HE 사진. 스케일 바 = 1mm 및 100μm. (B) 아조 커플링법은 인공 탈락의 알칼리성 포스파타제 활성을 검출하였다. 스케일 바 = 200 μm 및 50 μm. (C) Prl8a2 mRNA의 발현 수준을 qPCR에 의해 검출하였다. * p < 0.05. (d) Alpl mRNA의 발현 수준. ** p < 0.01. (E) Igfbp1 mRNA의 발현 수준. ** p < 0.01. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
| Igfbp1 마우스 qPCR-F | GCCCAACAGAAAGCAGGAGATG |
| Igfbp2 마우스 qPCR-R | GTAGACACACCAGCAGAGTCCA |
| Prl8a2 마우스 qPCR-F | ACCACAACCCATTCTCAGCTGG |
| Prl8a2 마우스 qPCR-R | TGTTCAGGTCCATGAGCTGGTG |
| Alpl 마우스 qPCR-F | CCAGAAAGACACCTTGACTGTGG |
| Alpl 마우스 qPCR-R | TCTTGTCCGTGTCGCTCACCAT |
| 18s 마우스 qPCR-F | ATGGCCGTTCTTAGTTGGTG |
| 18s 마우스 qPCR-R | CGGACATCTAAGGGCATCAC |
표 1: 프라이머 서열 목록.
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Discussion
생쥐의 탈락은 배아의 존재에 따라 자발적인 과정이며, 이는 인간과 다릅니다. 그러나 유리 구슬의 자궁 주입 및 자궁 열상과 같은 인공 자극은 배아 대신 자궁 내막의 탈락을 유도 할 수 있음이 밝혀졌습니다. 또한 연구자들은 스테로이드 호르몬, 프로스타글란딘 및 성장 억제 인자를 자궁강에 주입하는 것과 같은 많은 요인이 탈락을 유도하거나 탈락에 참여할 수 있음을 발견했습니다21. 위의 모델링 방법과 비교할 때, 참기름을 각성제로 사용하여 난소 절제술로 여기에 자세히 설명 된 마우스 모델은 내인성으로 생성 된 에스트로겐과 프로게스테론의 영향을 배제 할 수 있습니다. 따라서 경제적이고 조작이 간편합니다.
난소는 잔류 난소 조직을 방지하기 위해 깨끗하게 제거되어야하며, 이는 이후의 탈락 유도에 영향을 미칩니다. 이 단계는 난소에서 생성되는 내인성 에스트로겐과 프로게스테론의 영향을 줄이는 것을 목표로 합니다. 나팔관의 손상은 참기름을 자궁강에 주사 할 때 자궁을 찾는 신호로 사용될 수 있으므로 피해야합니다. 복부 유착 또는 나팔관 제거가 발생하면 시술자는 자궁과 장을 구별하는 데 주의를 기울여야 합니다.
오일 누출은 피하 주사 과정에서 쉽게 발생합니다. 복부 피부를 피하 주사 부위로 선택하고 젖꼭지를 피해야합니다. 오일을 주입하고 바늘을 천천히 빼낼 필요가 있습니다. 마우스가 작동 중일 때 바늘을 빼지 못하면 누출이 발생하기 쉽습니다. 누출을 방지하기 위해 면봉으로 바늘 부위를 잠시 눌러야합니다. 이 수술에서는 외인성 에스트로겐 및 프로게스테론 주사를 사용하여 유도 탈락 수술 전에 마우스의 호르몬 수치를 안정적으로 유지했습니다. 이 주사 방법은 마우스의 착상 전후 기간의 호르몬 변화를 시뮬레이션했습니다. 여기서, 우리는 두 번째 에스트로겐 피크 후에 탈락을 유도하였다.
이 작업의 성공 열쇠는 주입 된 참기름의 양입니다. 참기름이 너무 많으면 자궁의 다른 뿔의 구멍에 침투합니다. 참기름이 부족하면 탈락 반응이 감소하거나 자궁을 따라 고르지 않은 탈락이 발생하여 예상치 못한 실험 차이가 발생합니다. 수술 중 참기름을 주사할 때 주사기 바늘을 자궁강에 삽입하고 바늘이 자궁강 안에 있는지 확인하기 위해 부드럽게 앞뒤로 당겨야 합니다. 성공적으로 주사되면 자궁강의 일부가 투명하게 보일 수 있습니다. 핀셋으로 바늘을 약 10초 동안 부드럽게 고정하여 바늘을 빼낸 후 참기름이 새는 것을 방지할 수 있습니다. 동시에 바늘로 자궁을 부드럽게 아래로 밀어 참기름이 자궁강에 고르게 퍼지도록 합니다.
수술 후 치료와 소생술은 이 모델의 성공의 또 다른 열쇠입니다. 첫째, 수술 중 절개를 위한 무균 환경을 유지하는 것이 필수적입니다. 생쥐가 소생하기 전에 수술 절개 부위를 iodophor로 소독하고 의료용 거즈로 덮어 감염 발생률을 줄입니다. 수술 후, 마우스는 회복하기 위해 2-3 시간 동안 마취제를 대사해야합니다. 이 기간 동안 마우스는 25 ° C 인큐베이터에 넣어 더 빨리 회복하고 70 % 알코올과 요오드 포어로 소독하여 발생하는 저체온증을 피해야합니다. 수술 후 며칠 이내에 치유에주의를 기울여야하며 절개 균열, 부기, 궤양 등과 같은 수술 합병증을 제 시간에 처리해야합니다.
Prl8a2 및 Alpl은 가장 고전적인 탈락 마커입니다. Igfbp1은 또한 생쥐의 탈락 세포의 주요 단백질이며 생쥐의 탈락의 특정 마커로 간주됩니다. 오일 유도 자궁 뿔에서 Prl8a2, Alpl 및 Igfbp1 mRNA의 발현 수준은 오일 주입이 없는 대조군에 비해 유의하게 증가했습니다. 더욱이, 오일 유도 측의 알칼리성 포스파타제 활성은 대조군 측보다 현저히 높다. 이러한 결과는 모두 인공 탈락 모델(15)의 성공을 나타낸다.
마우스 인공 탈락 모델은 병원성 불임 분자를 검증하고 비정상적인 자궁내막 탈락과 관련된 불임을 진단하고 치료하기 위한 우수한 검증 모델을 제공하는 데 사용할 수 있습니다. 이 모델은 반복적인 낙태 및 반복적인 착상 실패와 같은 생식 질환을 연구하는 데 유용합니다. 배아 이식 및 침입에서 모성 요인의 역할을 연구하는 데 사용됩니다. 이 AD 모델은 안전성이 좋고 성공률이 높으며 내인성 호르몬의 영향을 해결합니다. 그러나 시간이 많이 걸리고 매우 까다로운 프로세스입니다. 우리는 연구를 용이하게하기 위해 실험 방법을 더욱 최적화 할 것입니다.
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Disclosures
저자는 공개 할 것이 없습니다.
Acknowledgments
저자는 중국 국립 자연 과학 재단(82001629, XQS), 장쑤성 자연 과학 재단 청소년 프로그램(BK20200116, XQS) 및 장쑤성 박사후 연구 기금(2021K277B, XQS)의 지원에 감사드립니다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Estrogen | Sigma | E2758 | Hormone supplement |
| Progesterone | Sigma | P0130 | Hormone supplement |
| Sesame oil | Sigma | S3547 | Hormone supplement |
| Sodium pentobarbital | Dainippon Sumitomo Pharma Co.,Ltd. | Anaesthesia | |
| Meloxicam injection | Qilu Animal Health Products Co., Ltd | Analgesia | |
| Alkaline phophatase stain kit(kaplow's/azo coupling method) | Solarbio | G1480 | Alkaline phophatase stain |
| Eosin | Servicebio | G1005-2 | HE stain |
| Hematoxylin | Servicebio | G1005-1 | HE stain |
| ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix | Vazyme | Q711-02 | qPCR |
| 70% ethanol | Lircon | ZH1120090 | Disinfect |
| Iodophor | Runzekang | RZK-DF | Disinfect |
| Erythromycin Eye Ointment | Guangzhou Baiyunshan | Mice eyeball protect | |
| 4-0 suture | Ethicon | W329 | Incision suture |
| 10% formalin | Yulu | L25010118 | Tissue fix |
| Optimal cutting temperature compound | Sakura | 4583 | Ssection |
| Trizol reagent | Ambion | 15596018 | qPCR |
References
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