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फेज स्क्रीनिंग सिस्टम और एंटीमाइक्रोबियल प्रतिरोध के लार इंडेक्स का अनुप्रयोग

Published: July 21, 2023 doi: 10.3791/64785
Automatic Translation
1, 1,2, 1,3, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 3, 1
1Shandong Key Laboratory of Animal Disease Control and Breeding, Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences, P.R. China, Key Laboratory of Livestock and Poultry Multi-omics of MARA, 2Department of Genetic and Genomes Biology, University of Leicester, 3College of Veterinary Medicine, Nanjing Agricultural University

Summary

यहां हम बुद्धिमान उच्च-थ्रूपुट रोगाणुरोधी संवेदनशीलता परीक्षण / फेज स्क्रीनिंग सिस्टम के सिद्धांत, संरचना और निर्देश का परिचय देते हैं। इसका आवेदन एक उदाहरण के रूप में शेडोंग, चीन में पोल्ट्री से अलग साल्मोनेला का उपयोग करके चित्रित किया गया है। लार इंडेक्स की गणना की जाती है, और रोगाणुरोधी प्रतिरोध का मूल्यांकन करने में इसके महत्व पर व्यापक रूप से चर्चा की जाती है।

Abstract

प्रतिरोधी बैक्टीरिया के लिए रोगाणुरोधी संवेदनशीलता परीक्षण (एएसटी) और फेज उच्च-थ्रूपुट स्क्रीनिंग की दक्षता में सुधार करने और पहचान लागत को कम करने के लिए, एक बुद्धिमान उच्च-थ्रूपुट एएसटी / फेज स्क्रीनिंग सिस्टम, जिसमें 96-डॉट मैट्रिक्स इनोक्यूलेटर, इमेज अधिग्रहण कनवर्टर और संबंधित सॉफ्टवेयर शामिल हैं, को एएसटी मानदंडों और नैदानिक और प्रयोगशाला मानक संस्थान (सीएलएसआई) द्वारा तैयार प्रतिरोध के ब्रेकपॉइंट (आर) के अनुसार विकसित किया गया था। चीन के शेडोंग में पोल्ट्री से अलग किए गए 1,500 साल्मोनेला उपभेदों के न्यूनतम निरोधात्मक एकाग्रता (एमआईसी) वितरण (आर / 8 से 8 आर तक) के एएसटी और आंकड़े 10 रोगाणुरोधी एजेंटों के खिलाफ बुद्धिमान उच्च-थ्रूपुट एएसटी / फेज स्क्रीनिंग सिस्टम द्वारा किए गए थे। लार इंडेक्स, जिसका अर्थ है "कम एंटीबिओसिस, कम प्रतिरोध और थोड़ा एंटीबिओसिस तक अवशिष्ट", प्रत्येक एमआईसी के भारित औसत की गणना करके और आर द्वारा विभाजित करके प्राप्त किया गया था। यह दृष्टिकोण अत्यधिक प्रतिरोधी उपभेदों के रोगाणुरोधी प्रतिरोध (एएमआर) डिग्री को चिह्नित करने के लिए प्रतिरोध की व्यापकता का उपयोग करने की तुलना में सटीकता में सुधार करता है। उच्च एएमआर के साथ साल्मोनेला के उपभेदों के लिए, लिटिक फेज को इस प्रणाली द्वारा फेज लाइब्रेरी से कुशलतापूर्वक जांच की गई थी, और लाइसिस स्पेक्ट्रम की गणना और विश्लेषण किया गया था। परिणाम बताते हैं कि बुद्धिमान उच्च-थ्रूपुट एएसटी / फेज स्क्रीनिंग सिस्टम संचालनयोग्य, सटीक, अत्यधिक कुशल, सस्ती और बनाए रखने में आसान था। शेडोंग पशु चिकित्सा रोगाणुरोधी प्रतिरोध निगरानी प्रणाली के साथ संयुक्त, प्रणाली एएमआर से संबंधित वैज्ञानिक अनुसंधान और नैदानिक पहचान के लिए उपयुक्त थी।

Introduction

चूंकि रोगाणुरोधी एजेंटों का व्यापक रूप से जीवाणु संक्रामक रोगों को रोकने के लिए उपयोग किया जाता है, रोगाणुरोधी प्रतिरोध (एएमआर) एक वैश्विक सार्वजनिक स्वास्थ्य समस्याबन गया है। एएमआर का मुकाबला महामारी विज्ञान रोगजनकों के एएमआर की निगरानी और संवेदनशील रोगाणुरोधी एजेंटों और लिटिक बैक्टीरियोफेज2 के सहक्रियात्मक चिकित्सा का वर्तमान मुख्य मिशन है।

इन विट्रो रोगाणुरोधी संवेदनशीलता परीक्षण (एएसटी) चिकित्सा की निगरानी और एएमआर के स्तर का पता लगाने के लिए मुख्य आधार है। यह रोगाणुरोधी फार्माकोलॉजी का एक महत्वपूर्ण हिस्सा है और नैदानिक दवा के लिए महत्वपूर्ण आधार है। संयुक्त राज्य अमेरिका के नैदानिक और प्रयोगशाला मानक संस्थान (सीएलएसआई) और रोगाणुरोधी संवेदनशीलता परीक्षण पर यूरोपीय समिति (ईयूसीएएसटी) ने एएसटी के अंतर्राष्ट्रीय मानदंडों को तैयार और संशोधित किया है और संवेदनशील (एस), प्रतिरोधी (आर) या मध्यवर्ती (आई) 3 के रूप में एक निश्चित "जीव-रोगाणुरोधी एजेंट" संयोजन के एमआईसी को निर्धारित करने के लिए लगातार संशोधित और पूरक एएसटी विधियों और ब्रेकपॉइंट्स को संशोधित और संशोधित किया है। 4.

1980 के दशक से 1990 के दशक तक, स्वचालित माइक्रो शोरबा कमजोर पड़ने वाले उपकरणों को तेजी से विकसित किया गया और नैदानिक अभ्यास के लिए लागू किया गया, जिसमें अल्फ्रेड 60एएसटी, वीआईटीईके सिस्टम, फीनिक्सटीएम और कोबासबैक्ट 5,6,7 शामिल हैं। हालांकि, ये उपकरण महंगे थे, उच्च लागत वाले उपभोग्य सामग्रियों की आवश्यकता थी, और उनकी पहचान रेंज नैदानिक रोगी दवा 5,6,7 के लिए डिज़ाइन की गई थी। इन कारणों से, वे पशु चिकित्सा नैदानिक परीक्षा और अत्यधिक प्रतिरोधी उपभेदों की बड़ी मात्रा का पता लगाने के लिए उपयुक्त नहीं हैं। इस अध्ययन में, एक बुद्धिमान उच्च-थ्रूपुट एएसटी / फेज स्क्रीनिंग सिस्टम, जिसमें 96-डॉट मैट्रिक्स इनोक्यूलेटर (चित्रा 1), छवि अधिग्रहण कनवर्टर (चित्रा 2), और संबंधित सॉफ्टवेयर8 शामिल हैं, को एगर कमजोर पड़ने की विधि द्वारा एक समय में कई रोगाणुरोधी एजेंटों के खिलाफ बैक्टीरिया उपभेदों के एक बैच के लिए एएसटी का संचालन करने के लिए विकसित किया गया था। इसके अलावा, सिस्टम का उपयोग रोगाणुरोधी-प्रतिरोधी बैक्टीरिया9 के खिलाफ फेज के लाइसिस पैटर्न का पता लगाने और विश्लेषण करने के लिए भी किया गया था, और लिटिक फेज को फेज लाइब्रेरी से कुशलता पूर्वक चुना गया था। यह प्रणाली कुशल, सस्ती और संचालित करने में आसान पाई गई थी।

Figure 1
चित्र 1: 96-डॉट मैट्रिक्स इनोक्यूलेटर का संरचनात्मक आरेख। 1: टीकाकरण पिन प्लेट; 2: मोबाइल वाहक; 3: बीज ब्लॉक; 4: इनक्यूबेटेड प्लेट; 5: आधार; 6: ऑपरेटिंग हैंडल; 7: पिन को सीमित करें। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 2
चित्र 2: छवि अधिग्रहण कनवर्टर का संरचनात्मक आरेख। 1: शेल; 2: प्रदर्शन स्क्रीन; 3: छवि अधिग्रहण कक्ष; 4: डिटेक्शन बोर्ड बेस; 5: गोदाम के अंदर और बाहर डिटेक्शन बोर्ड; 6: नियंत्रण बोर्ड; 7: छवि अधिग्रहण रूपांतरण डिवाइस; 8: प्रकाश स्रोत; 9: छवि स्कैनर. कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

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Protocol

इस अध्ययन में इस्तेमाल किए गए साल्मोनेला उपभेदों को पशु विज्ञान और पशु चिकित्सा संस्थान, शेडोंग एकेडमी ऑफ एग्रीकल्चरल साइंसेज, चीन की जैव सुरक्षा समिति से अनुमोदन प्राप्त करने के बाद चीन के शेडोंग में पोल्ट्री से एकत्र किया गया था।

1. बुद्धिमान उच्च-थ्रूपुट एएसटी सिस्टम का अनुप्रयोग8

  1. इनोकुलम की तैयारी
    1. गुणवत्ता नियंत्रण जीव एस्चेरिचिया कोलाई और 93 साल्मोनेला उपभेदों को 37 डिग्री सेल्सियस पर 16-18 घंटे के लिए मुलर-हिंटन एगर (एमएचए) प्लेटोंपर एएसटी के लिए परीक्षण किया जाना है।
    2. सीएलएसआई मानक3में निर्दिष्ट विधि के आधार पर 0.5 मैकफारलैंड टर्बिडिटी मानक से मेल खाने के लिए प्रत्येक स्ट्रेन के इनोकुलम को तैयार करें और फिर 10 बार पतला करें।
    3. नकारात्मक नियंत्रण के रूप में 96-वेल प्लेट के क्षैतिज 1 कुएं (ए 1) में बाँझ सामान्य लवण के 200 μL, क्षैतिज 2और 3कुएं (A2 और A3) में क्रमशः सकारात्मक नियंत्रण और गुणवत्ता नियंत्रण के रूप में गुणवत्ता नियंत्रण जीव के दो निलंबन रखें। 96-वेल बीज ब्लॉक में संबंधित 93 कुओं में प्रत्येक परीक्षण किए गए दाग के पतला इनोकुलम निलंबन के 200 μL जोड़ें।
  2. एंटीमाइक्रोबियल एगर प्लेट की तैयारी
    1. लार इंडेक्स (0.125 आर से 8 आर तक) की गणना सीमा के अनुसार परीक्षण किए गए विभिन्न जीवाणुरोधी एजेंटों की एकाग्रता सीमा निर्धारित करें। सांद्रता गुणवत्ता नियंत्रण सीमा या 0.0625 आर (निचली सीमा के अधीन) से 8 आर तक होती है।
      नोट: यदि लार इंडेक्स की गणना नहीं की जाती है, तो एंटीबायोटिक सांद्रता की सीमा एएसटी की जरूरतों के अनुसार निर्धारित की जा सकती है।
    2. सीएलएसआई मानक3 में निर्दिष्ट एगर कमजोर पड़ने की विधि के आधार पर उपयुक्त स्टॉक एकाग्रता के साथ शुरू होने वाले एंटीबायोटिक समाधान के लिए लॉग 2 डबलिंग डाइल्यूशन स्कीम निष्पादित करें।
    3. मुलर-हिंटन एगर मीडिया के 18 एमएल युक्त 50 एमएल ग्लास की बोतलों को स्टरलाइज़ करें। 45-50 डिग्री सेल्सियस तक ठंडा किए गए पिघले हुए मीडिया के 18 मिलीलीटर में रोगाणुरोधी समाधान के उपयुक्त तनुकरण के 2 मिलीलीटर जोड़ें, अच्छी तरह मिलाएं, और जैव सुरक्षा कैबिनेट में प्लेटों में डालें।
    4. कमरे के तापमान (आरटी) पर आगर को जमने दें, इनक्यूबेट प्लेटों के ढक्कन के नीचे एक अंतराल छोड़ दें और टीकाकरण से पहले आगर की सतह को सूखने के लिए झटका दें।
    5. इनक्यूबेटेड प्लेटों के रिवर्स साइड पर रोगाणुरोधी एजेंटों और सांद्रता के प्रकार ों को लेबल करें। लॉग 2-डबलिंग तनुकरण क्रम में एक ढेर में प्रत्येक रोगाणुरोधी एजेंट की कई इनक्यूबेटेड प्लेटों को व्यवस्थित करें।
    6. प्रत्येक रोगाणुरोधी एजेंट के लिए नियंत्रण के रूप में दो दवा-मुक्त आगर प्लेटें तैयार करें।
  3. 96-डॉट मैट्रिक्स इनोक्यूलेटर के लिए टीकाकरण चरण
    1. बायोसेफ्टी कैबिनेट में 96-डॉट मैट्रिक्स इनोक्यूलेटर के समर्थन पर आटोक्लेव इनोक्यूलेशन पिन प्लेट स्थापित करें।
    2. तैयार बीज ब्लॉक को परीक्षण किए गए उपभेदों और एक एगर इनक्यूबेटेड प्लेट के साथ मोबाइल वाहक पर रखें, जिसमें दो प्लेटों के लिए समान स्थिति कोण हो।
    3. मोबाइल वाहक को धक्का दें ताकि बीज ब्लॉक सीधे टीकाकरण पिन प्लेट के नीचे हो।
    4. ऑपरेटिंग हैंडल दबाएं, टीकाकरण पिन प्लेट को नीचे ले जाएं, और बीज ब्लॉक के 96 कुओं में 96 पिन को इनोकुला में निर्देशित करें।
    5. नियंत्रण के साथ ऑपरेटिंग हैंडल जारी करें, फिर वसंत की कार्रवाई के तहत टीकाकरण पिन प्लेट को रीसेट करें।
    6. प्रत्येक इनोकुलम को अच्छी तरह से हिलाने और डुबोने के लिए ऑपरेटिंग हैंडल को 2-3 बार दबाएं। वाहक प्लेट को धक्का दें और स्थानांतरित करें ताकि इनक्यूबेट प्लेट सीधे टीकाकरण पिन प्लेट के नीचे हो।
    7. ऑपरेटिंग हैंडल दबाएं, टीकाकरण पिन प्लेट को नीचे ले जाएं, और टीकाकरण पिन को इनक्यूबेटेड प्लेट की सतह से पूरी तरह से संपर्क करने के लिए 1-2 सेकंड के लिए रोकें।
    8. ऑपरेटिंग हैंडल को छोड़ें। यह एक टीकाकरण को पूरा करता है। एक और इनक्यूबेटेड प्लेट को बदलें और एंटीमाइक्रोबियल एगर प्लेटों के एक समूह के समाप्त होने तक चक्र जारी रखें।
    9. एक और टीकाकरण पिन प्लेट और बीज ब्लॉक को बदलें, और परीक्षण किए गए उपभेदों के एक और समूह को टीका लगाएं। सभी टीकाकरण पूरा होने तक साइकिल चलाएं।
      नोट: पहले एक नियंत्रण एगर प्लेट (कोई रोगाणुरोधी एजेंट नहीं) को टीका लगाएं, फिर प्लेट को कम से उच्च तक दवा एकाग्रता के क्रम में, और एक दूसरी नियंत्रण एगर प्लेट को यह सुनिश्चित करने के लिए कि कोई संदूषण या रोगाणुरोधी एजेंट कैरी-ओवर न हो। इनोक्यूलेटिंग वॉल्यूम लगभग 2 μL के प्रत्येक पिन के प्राकृतिक जमाव की मात्रा पर निर्भर करता है।
  4. एंटीमाइक्रोबियल एगर प्लेटों को इनक्यूबेट करना
    1. टीका लगाए गए एंटीमाइक्रोबियल एगर प्लेटों को आरटी पर तब तक इनक्यूबेट करें जब तक कि इनोकुलम स्पॉट में नमी एगर में अवशोषित न हो जाए।
    2. प्लेटों को उलटा करें और परीक्षण किए गए उपभेदों के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर 16-20 घंटे के लिए उन्हें इनक्यूबेट करें ताकि यह सुनिश्चित हो सके कि बेहिचक बैक्टीरिया कॉलोनियों का निर्माण करते हैं।
  5. छवि अधिग्रहण और डेटा आँकड़े
    1. प्रोग्राम खोलने के लिए 96-डॉट मैट्रिक्स एएसटी छवि अधिग्रहण प्रणाली पर डबल-क्लिक करें।
    2. टास्कबार में परीक्षण जानकारी पर क्लिक करें। एक नया परीक्षण कार्य बनाने के लिए नया पर क्लिक करें, और कोड, नाम, स्रोत, बैक्टीरिया, उपभेदों की संख्या, एंटीबायोटिक्स और ढाल सहित संकेतों के अनुसार जानकारी भरें।
    3. बनाए गए नए कार्य का चयन करने के लिए डेटा संग्रह > फोटोग्राफ > परीक्षण आइटम पर क्लिक करें। एंटीबायोटिक के नाम का चयन करने के लिए एंटीबायोटिक्स पर क्लिक करें, और इस एंटीबायोटिक की प्रारंभिक एकाग्रता का चयन करने के लिए ग्रेडिएंट पर क्लिक करें।
    4. छवि अधिग्रहण कनवर्टर से कनेक्ट करने के लिए कनेक्ट पर क्लिक करें।
    5. ओरिएंटेशन के लिए दाईं ओर गायब कोण के साथ डिटेक्शन प्लेट बेस पर संबंधित इनक्यूबेट प्लेटों को रखें और छवि अधिग्रहण कनवर्टर में धक्का दें।
    6. छवियों को प्राप्त करने के लिए संग्रह पर क्लिक करें। एंटीबायोटिक ढाल स्वचालित रूप से अगले ढाल में कूद जाएगा। अगली प्लेट को बारी-बारी से रखें और संग्रह पर क्लिक करना जारी रखें जब तक कि इस एंटीबायोटिक के लिए प्लेटें एकत्र नहीं हो जाती हैं।
    7. एंटीबायोटिकदवाओं पर क्लिक करें, और इनक्यूबेट प्लेटों के अगले सेट का चयन करें। प्रारंभिक ढाल का चयन करने के लिए ग्रेडिएंट पर क्लिक करें और छवि संग्रह के अगले दौर में आगे बढ़ें।
    8. सभी संग्रह ों को पूरा करने के बाद, सबमिट पर क्लिक करें। कार्यक्रम स्वचालित रूप से छवियों में प्रत्येक टीकाकरण बिंदु पर स्वरूपित सफेद पिक्सेल की संख्या को पहचान लेगा, यह निर्धारित करेगा कि क्या कॉलोनी गठन है और छवियों को एमआईसी मूल्यों में परिवर्तित करेगा।
    9. परीक्षण किए गए एंटीबायोटिक दवाओं के खिलाफ उपभेदों के सभी एमआईसी परिणाम प्राप्त करने के लिए क्वेरी पर क्लिक करें।
      नोट: बुद्धिमान उच्च थ्रूपुट एएसटी प्रणाली बैक्टीरिया उपभेदों के बड़े बैचों के एमआईसी को निर्धारित करने के लिए उपयुक्त है। तैयारी, टीकाकरण, इनक्यूबेशन और परिणाम पढ़ने सहित परीक्षण प्रक्रिया में 3 दिन लगते हैं। एंटीबायोटिक दवाओं और एमआईसी डिटेक्शन रेंज के प्रकार संबंधित आवश्यकताओं के अनुसार सेट किए जा सकते हैं, और मुख्य उपभोग्य सामग्रियों का पुन: उपयोग किया जा सकता है।
  6. लार सूचकांक की गणना
    1. सूत्र के साथ लार सूचकांक को सटीक रूप से निर्धारित करें: , कहां: Equation 1
      एमआईसीआई: न्यूनतम निरोधात्मक एकाग्रता।
      एमआईसी - 3 से एमआईसी3 तक एमआईसी वितरण की सीमा आर पर केंद्रित सीरियल डबल सांद्रता का प्रतिनिधित्व करती है: 0.125 आर, 0.25 आर, 0.5 आर, आर, 2 आर, 4 आर और 8 आर।
      Equation 2 2 i है, औरi की सीमा -3 से 3 है।
      आर: सीएलएसआई द्वारा मानकीकृत रोगाणुरोधी एजेंटों के खिलाफ बैक्टीरिया के प्रतिरोध के ब्रेकपॉइंट।
      च: एमआईसी आवृत्ति वितरण।
      नोट: सामान्य लार सूचकांक सभी लार सूचकांकों का अंकगणितीय माध्य है। लार इंडेक्स की गणना के बाद, अंतिम मान को दशमलव बिंदु के बाद दो महत्वपूर्ण अंकों में बदल दें।

2. बुद्धिमान उच्च-थ्रूपुट फेज स्क्रीनिंग सिस्टम9

  1. बैक्टीरिया युक्त फेज बीज ब्लॉक और डबल-लेयर इनक्यूबेटेड प्लेटें तैयार करना।
    1. विभिन्न फेज बनाने के लिए डबल-लेयर एगर विधि10 या तरल संस्कृति विधि11 का उपयोग करें। 1 x 104-5 पीएफयू / एमएल के टिटर के साथ एक उपयुक्त समानांतर एकाग्रता को पतला करें, और 96-वेल बीज ब्लॉक में फेज इनोकुलम के 200 μL जोड़ें।
    2. बैक्टीरिया के साथ डबल-स्तरित प्लेटें बनाएं (10 मिलीलीटर नीचे एगर मीडिया [अगर 12 ग्राम / एल] और ऊपरी अर्ध-आगर मीडिया [6 ग्राम / एल] के 6 मिलीलीटर 100 μL बैक्टीरिया [0.5 मैकफारलैंड] के साथ) परीक्षण किया जाना है।
    3. परीक्षण किए जाने वाले प्रत्येक स्ट्रेन के लिए एक डबल-लेयर इनक्यूबेटेड प्लेट बनाएं। डबल-लेयर्ड प्लेट के ढक्कन के नीचे एक अंतराल छोड़ दें और जैव सुरक्षा कैबिनेट में आगर की सतह को सूखने के लिए झटका दें।
  2. स्क्रीनिंग टेस्ट
    1. तैयार फेज बीज ब्लॉक और डबल-लेयर प्लेट को 96-डॉट मैट्रिक्स इनोक्यूलेटर के मोबाइल वाहक पर रखें, और सभी फेज इनोकुला को अर्ध-आगर सतह पर स्थानांतरित करें। सभी परीक्षण किए गए उपभेदों के पूरा होने तक चक्र जारी रखें।
    2. टीका लगाए गए डबल-लेयर प्लेटों को आरटी पर रहने दें जब तक कि इनोकुलम स्पॉट में नमी पूरी तरह से अर्ध-आगर में अवशोषित न हो जाए।
    3. प्लेटों को उलटा करें और 4-6 घंटे के लिए परीक्षण किए गए उपभेदों के लिए उपयुक्त परिस्थितियों में इनक्यूबेट करें ताकि यह सुनिश्चित हो सके कि स्पष्ट लिटिक स्पॉट बनते हैं।
  3. डेटा का विश्लेषण करना
    1. छवि अधिग्रहण कनवर्टर (चरण 1.5.4-1.5.6) द्वारा प्रत्येक डबल-लेयर प्लेट के प्रयोगात्मक परिणाम की छवि प्राप्त करें और सहेजें।
    2. प्राप्त छवियों के आधार पर एक स्प्रेडशीट में धब्बे के विभिन्न आकारों की संख्या और आकृति विज्ञान रिकॉर्ड करें, और विभिन्न प्रकार के फेज के संबंधित अनुपात की गणना करें।

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Representative Results

बुद्धिमान उच्च-थ्रूपुट एएसटी प्रणाली के प्रोटोकॉल का पालन करते हुए, इसके आवेदन को एक उदाहरण के रूप में चीन के शेडोंग में पोल्ट्री से साल्मोनेला द्वारा चित्रित किया गया था।

छवि अधिग्रहण कनवर्टर द्वारा निर्धारित 2 से 256 μg / mL की सांद्रता में एम्पीसिलिन (32 μg / mL का R) के साथ अगर प्लेटों पर साल्मोनेला उपभेदों की वृद्धि चित्र 3 में दिखाई गई है। क्षैतिज 1कुएं ए 1 नकारात्मक नियंत्रण था और कोई कॉलोनी विकास नहीं दिखाया; ए 2 और ए 3 सीएलएसआई (2-8 μg / mL) द्वारा मानकीकृत गुणवत्ता नियंत्रण सीमा के भीतर एमआईसी 4 μg / mL (2 μg / mL एम्पीसिलिन के साथ अगर प्लेट पर एक कॉलोनी बनाते हैं, लेकिन 4 μg / mL पर नहीं) के साथ गुणवत्ता नियंत्रण उपभेद थे। ए 4 में साल्मोनेला स्ट्रेन का एमआईसी 64 μg / mL था, जबकि A5 का 16 μg / mL था। एम्पीसिलिन के खिलाफ 93 साल्मोनेला उपभेदों के एमआईसी वितरण की गणना सॉफ्टवेयर द्वारा स्वचालित रूप से की गई थी।

Figure 3
चित्रा 3: एम्पीसिलिन के साथ संस्कृति प्लेटों की एक श्रृंखला पर साल्मोनेला की आकृति विज्ञान। 8 क्षैतिज: ए-एच, 12 ऊर्ध्वाधर: 1-12। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

शेडोंग प्रांत में जानवरों से साल्मोनेला उपभेदों के एएमआर को निर्धारित करने के लिए उच्च-थ्रूपुट एएसटी प्रणाली लागू की गई थी। एमआईसी डेटा को वार्म्स (http://www.varms.cn/) 12 के डेटाबेस में अपलोड किया गया था। सांख्यिकीय परिणाम तालिका 1 में दिखाए गए हैं। 300-1,500 साल्मोनेला उपभेदों के खिलाफ कुल 10 रोगाणुरोधी एजेंटों का परीक्षण किया गया, जो इस प्रणाली के उच्च-थ्रूपुट फायदे दिखाते हैं।

सीएलएसआई मानक के प्रतिरोधी ब्रेकपॉइंट्स के अनुसार, प्रतिरोध दर (आर%) की गणना परीक्षण किए गए उपभेदों के बीच एमआईसी ≥ आर के साथ उपभेदों के प्रतिशत के रूप में की गई थी (तालिका 1)। एम्पीसिलीन, सिप्रोफ्लोक्सासिन और एमोक्सिसिलिन-क्लैवुलैनिक एसिड के आर% मान 50% से अधिक थे, डॉक्सीसाइक्लिन, फ्लोरफेनिकोल, सेफोटैक्सिम और एनरोफ्लोक्सासिन के आर% मान 30% -50% थे, और जेंटामाइसिन, एमिकेसिन और मेरोपेनेम के आर% मान 30% से कम थे। औद्योगिक रूप से उठाए गए जानवरों में मेरोपेनेम का उपयोग नहीं किया गया था और 7% का आर% दिखाया गया था।

आर% ने आर से अधिक एमआईसी के साथ जीवाणु उपभेदों के अनुपात का संकेत दिया, जबकि एमआईसी वितरण ने साल्मोनेला के समग्र एएमआर का अधिक सटीक वर्णन करने के लिए प्रत्येक एमआईसी के साथ उपभेदों की संख्या दिखाई। उदाहरण के लिए, एम्पीसिलिन का आर% 73% था, और नमूनों की अधिकतम संख्या (916 उपभेदों) एमआईसी ≥ 256 μg / mL के साथ केंद्रित थी, यह दर्शाता है कि एम्पीसिलिन के लिए साल्मोनेला का प्रतिरोध काफी गंभीर था।

तालिका 1: शेडोंग प्रांत में जानवरों से साल्मोनेला के एमआईसी वितरण, आर%, और लार सूचकांक मान। बोल्ड फ़ॉन्ट के अनुरूप एमआईसी रोगाणुरोधी एजेंटों के आर मान हैं। कृपया इस तालिका को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें।

एकरूपता और तुलनात्मकता के लिए, प्रत्येक दवा के आर पर केंद्रित 3 ग्रेडिएंट को आगे और पीछे बढ़ाया गया था। सात ग्रेडिएंट ्स के एमआईसी वितरण के अनुसार, लार इंडेक्स की गणना सूत्र द्वारा की गई थी:

Equation 1.

एम्पीसिलीन के लिए एक उदाहरण के रूप में, आर-मान 32 μg / mL था, नमूनों की संख्या 1,414, और लार = (4/32) x (245/1414) + (8/32) × (16/1414) + (16/32) × (117/1414) + (32/32) × (27/1414) + (64/32) × (36/1414) + (128/32) (128/1414) + (128/32×) (128/1414) (128/1414) (128/32) /32) × (916/1414) = 2-3 × (245/1414) + 2-2 × (16/1414) + 2-1 × (117/1414) + 20 × (27/1414) + 21 × (36/1414) + 2 2 × (57/1414) + 2 3 × (916/1414) = 5.48 इस सूत्र द्वारा, अन्य रोगाणुरोधी एजेंटों के लार सूचकांक की गणना की गई थी और तालिका 1 में दिखाया गया है।

लार सूचकांक का महत्व एएमआर की गंभीरता की डिग्री को सटीक रूप से इंगित करना था। उदाहरण के रूप में सिप्रोफ्लोक्सासिन और एमोक्सिसिलिन-क्लैवुलैनिक एसिड लेते हुए, उनके आर% मान क्रमशः 68% और 65% पर समान थे, लेकिन उनके लार सूचकांक क्रमशः 4.57 और 1.76 पर काफी भिन्न थे। इसका कारण तालिका 1 में उच्च एमआईसी मूल्यों के वितरण से स्पष्ट रूप से चित्रित किया गया था, जिसमें 71.3% सिप्रोफ्लोक्सासिन-प्रतिरोधी उपभेदों को 8 आर (32 μg / mL) में वितरित किया गया था, जबकि एमोक्सिसिलिन-क्लैवुलैनिक एसिड-प्रतिरोधी उपभेदों के एमआईसी ज्यादातर आर और 2 आर पर केंद्रित थे, और 8R का अनुपात कम (8.69%) था। इसलिए, सिप्रोफ्लोक्सासिन का लार इंडेक्स एमोक्सिसिलिन-क्लैवुलैनिक एसिड की तुलना में अधिक था, यह दर्शाता है कि अत्यधिक सिप्रोफ्लोक्सासिन-प्रतिरोधी उपभेदों का अनुपात एमोक्सिसिलिन-क्लैवुलैनिक एसिड-प्रतिरोधी उपभेदों की तुलना में अधिक था। लार सूचकांक प्रतिरोध दर की तुलना में एएमआर की डिग्री का अधिक सटीक संकेतक था।

लार इंडेक्स के सूत्र के अनुसार, यदि एक निश्चित दवा के संबंध में सभी उपभेदों के एमआईसी आर थे, तो लार इंडेक्स 1 होगा; यदि सभी उपभेदों के एमआईसी 2 आर थे, तो लार इंडेक्स 2 होगा। इसलिए, लार इंडेक्स ने एज सांद्रता को छोड़कर, व्यापक एमआईसी और संबंधित आर मान के बीच कई संबंध दिखाए। लार इंडेक्स का उपयोग एएमआर की डिग्री का आकलन करने के लिए किया गया था, और एएमआर अधिक होने पर लाभ अधिक स्पष्ट था। एकरूपता और तुलनात्मकता के लिए, लार इंडेक्स की गणना सीमा आर मान पर केंद्रित फ्रंट और रियर 3 ग्रेडिएंट के साथ सात एमआईसी थी, और भारित औसत विभिन्न रोगाणुरोधी एजेंटों, उपभेदों की संख्या और एमआईसी वितरण को एकीकृत करके प्राप्त किया गया था। इसलिए, लार इंडेक्स की मूल्य सीमा 0.125-8 थी। लार 0.125 के जितना करीब था, एएमआर उतना ही कम था, और यह 8 के करीब था, एएमआर उतना ही अधिक था। हालांकि, किनारे की एकाग्रता पर लार और आर के बीच कोई आनुपातिक संबंध नहीं था। जब रोगाणुरोधी एजेंट और लार इंडेक्स की गणना सीमा निश्चित थी, तो सामान्य लार को एक सहज ज्ञान युक्त व्यापक मूल्य के लिए सामान्यीकृत किया गया था, जिसका उपयोग विभिन्न बैक्टीरिया, उपयोगकर्ताओं, वर्षों, क्षेत्रों आदि की विभिन्न स्थितियों के तहत एएमआर की डिग्री और परिवर्तन प्रवृत्ति की सीधे तुलना और मूल्यांकन करने के लिए किया जाता था।

बुद्धिमान फेज स्क्रीनिंग सिस्टम के प्रोटोकॉल का पालन करते हुए, एक उदाहरण के रूप में एएमआर साल्मोनेला उपभेदों को लाइसे करने के लिए साल्मोनेला के 96 फेज लेकर आवेदन का प्रदर्शन किया गया था, और फेज लिटिक पैटर्न का विश्लेषण किया गया था।

96-डॉट मैट्रिक्स इनोक्यूलेटर द्वारा 96 फेज को साल्मोनेला युक्त डबल-लेयर्ड प्लेटों में स्थानांतरित किया गया था। गठित धब्बों की आकृति विज्ञान चित्र 4 में दिखाया गया है। चार मुख्य प्रकार थे (हालांकि चार तक सीमित नहीं हैं): स्पष्ट गोल स्थान (●), सजीले टुकड़े का संग्रह (), टर्बिड लिटिक स्पॉट (), और कोई लिटिक स्पॉट (Equation 4Equation 33)।

Figure 4
चित्रा 4: डबल-लेयर एगर प्लेटों पर साल्मोनेला स्पॉट की आकृति विज्ञान। 1 और 2: विभिन्न साल्मोनेला उपभेदों पर 96 फेज द्वारा उत्पादित पैटर्न। "●" गोल स्पष्ट स्थान, "" सजीले टुकड़े का संग्रह, "" टर्बिड लिटिक स्पॉट, ""Equation 4Equation 3 कोई लिटिक स्पॉट नहीं) कृपया इस आंकड़े के बड़े संस्करण को देखने के लिए यहां क्लिक करें।

डबल-लेयर प्लेटों पर, विभिन्न मेजबान बैक्टीरिया पर विभिन्न फेज के लिटिक स्पॉट आकृति विज्ञान10 में विविध थे। "गोल स्पष्ट लिटिक स्पॉट" एक फेज से उत्पन्न हुआ जो प्लेट पर मेजबान को मज़बूती से मार सकता है लेकिन जो उस मेजबान के खर्च पर सफलतापूर्वक दोहराया जा सकता है या नहीं। इस मामले में, प्रकार को निर्णायक रूप से निर्धारित करने के लिए और कमजोर पड़ना आवश्यक था। "सजीले टुकड़े का संग्रह" सच्चे सजीले टुकड़े द्वारा बनाया गया था। लाइसिस के प्रत्येक व्यक्तिगत क्षेत्र को स्पष्ट रूप से एक एकल संक्रामक केंद्र से उत्पादित किया गया था, जिसने प्रदर्शित किया कि फेज ने प्लेट पर बैक्टीरिया की कीमत पर प्रतिकृति बनाई थी। "टर्बिड लिटिक स्पॉट" एक फेज से उत्पन्न हुआ जो प्लेट पर मेजबान को मज़बूती से नहीं मारता था और जो उस मेजबान के खर्च पर सफलतापूर्वक दोहराया जा सकता है या नहीं। इस मामले में, एक से अधिक संभावनाएं थीं, इस प्रकार आगे के शोध हितों के आधार पर पुष्टि की आवश्यकता थी। "नो लिटिक स्पॉट" ने नॉनलाइटिक प्रकृति का संकेत दिया।

इसके अलावा, प्रारंभिक परीक्षण के लिए इस प्रणाली का उपयोग करना अनिवार्य रूप से यह निर्धारित कर सकता है कि उपभेदों और बैक्टीरियोफेज की नकल की गई थी या नहीं। यदि विभिन्न साल्मोनेला प्रजातियों का चयन किया गया था और दो बैक्टीरियोफेज के पैटर्न समान थे, तो यह संकेत देता है कि बैक्टीरियोफेज को डुप्लिकेट किया जा सकता है। यदि नैदानिक स्रोतों से अज्ञात साल्मोनेला प्रजातियों को संक्रमित करने के लिए गैर-दोहराए जाने वाले बैक्टीरियोफेज का चयन किया गया था और फेज पैटर्न समान था, तो यह संकेत देता है कि साल्मोनेला उपभेद एक ही तनाव हो सकता है। इसके अलावा, डुप्लिकेट की संख्या और अनुपात में महामारी विज्ञान की जांच के लिए संदर्भ मूल्य थे।

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Discussion

अगर कमजोर पड़ने की विधि अच्छी तरह से स्थापित की गई है और व्यापक रूप से उपयोग की जाती है। उच्च-थ्रूपुट एएसटी प्रणाली का सिद्धांत आगर कमजोर पड़ने की विधि का था। प्रोटोकॉल के भीतर महत्वपूर्ण कदमों में से एक एक समय में 96 इनोकुला का सटीक उच्च थ्रूपुट हस्तांतरण था, जिसे लगातार कई बार किया गया था। इस महत्वपूर्ण चरण को पूरा करने के लिए, 96-डॉट मैट्रिक्स इनोक्यूलेटर के पिन एक समान और बहुत चिकनी थे। प्रत्येक पिन का प्राकृतिक जमाव लगभग 2 μL की मात्रा थी, जो आगर मीडिया की सतह पर छोटी बूंदों में एकत्रित होती है ताकि जल्दी से आगर में अवशोषित किया जा सके, न कि क्रॉस-संदूषण का कारण बनने के लिए बहने या छींटे पड़ने लगे। दूसरा महत्वपूर्ण कदम बड़े एएसटी डेटा का सांख्यिकीय प्रसंस्करण था। उच्च-थ्रूपुट टीकाकरण के साथ, परीक्षण डेटा निर्धारित करने की आवश्यकता थी, और कार्यभार बहुत बड़ा था। बुद्धिमान छवि अधिग्रहण कनवर्टर और सहायक सॉफ्टवेयर द्वारा उत्पादित बुद्धिमान विश्लेषण और सांख्यिकीय परिणाम इस समस्या का एक आदर्श समाधान थे। एएसटी परिणाम स्वचालित रूप से सीधे वर्म्स डेटाबेस पर अपलोड किए गए थे। परिणाम व्याख्या की दक्षता और सटीकता में सुधार हुआ, और मानव कारकों के कारण होने वाली त्रुटियोंको कम कर दिया गया।

तीसरा महत्वपूर्ण कदम एएमआर के लार सूचकांक का प्रस्ताव करना था। वर्तमान में, दुनिया में एएमआर के कुछ व्यापक मूल्यांकन सूचकांक हैं। साहित्य के अनुसार, एंटीबायोटिक प्रभावशीलता14,15 में परिवर्तन को मापने के लिए लक्ष्मीनारायण और क्लगमैन द्वारा एक दवा प्रतिरोध सूचकांक (डीआरआई) का वर्णन किया गया था। इसने प्रतिरोध की व्यापकता और पर्चे की सापेक्ष आवृत्तियों को जोड़ा, लेकिन एएमआर की डिग्री को चिह्नित नहीं कर सका और उच्च दवा प्रतिरोध स्तरों में परिवर्तन का मूल्यांकन नहीं कर सका। डीआरआई से प्राप्त एक अन्य सूचकांक ड्रग इफेक्टिवनेस इंडेक्स (डीईआई) 16 का भी डीआरआई के समान ही नुकसान है। इस प्रकार, लार इंडेक्स प्रस्तावित किया गया था, जिसमें तीन चरण शामिल थे: (1) बैक्टीरियल उपभेदों के एमआईसी को संबंधित आर-वैल्यू के आधार पर सामान्यीकृत किया गया था, जो एएसटी मानक के विभिन्न आर मूल्यों के कारण रोगाणुरोधी एजेंटों में अंतर को समाप्त करता है; (2) एमआईसी वितरण के अनुसार, भारित औसत मूल्यों की गणना एएमआर की डिग्री को प्रतिरोध दर से अधिक सटीक रूप से प्रतिबिंबित करने के लिए की गई थी; (3) कई रोगाणुरोधी एजेंटों के लार सूचकांकों का अंकगणितीय माध्य, अर्थात्, सामान्य लार, एएमआर की व्यापक स्थिति को प्रतिबिंबित कर सकता है, जो विभिन्न स्तरों पर एएमआर के मूल्यांकन और तुलना के लिए सुविधा प्रदान करता है।

इन उपकरणों का हार्डवेयर डिजाइन संचालित करने के लिए उचित और सरल था, और सभी भाग सुचारू रूप से चलते थे। जाम लगाने की कोई समस्या या गलती नहीं थी। सहायक सॉफ्टवेयर का डिज़ाइन एएसटी और फेज स्क्रीनिंग की व्यक्तिगत आवश्यकताओं से मेल खाता था और संचालित करना और उपयोग करना आसान था। बैच बैक्टीरियल ट्रांसफर के कई लागू परिदृश्यों के लिए एक उपकरण टीकाकरण पिन के 4-5 बक्से से लैस था। इस उपकरण के मुख्य घटक स्टेनलेस स्टील से बने टीकाकरण पिन प्लेट और पिन थे, जो विभिन्न प्रकार के वातावरण के अनुकूल थे और आटोक्लेव, विघटित और प्रतिस्थापित करने में सक्षम थे। टीकाकरण पिन को किसी भी तरह से संयुक्त करने के लिए डिज़ाइन किया गया था।

एंटीबायोटिक दवाओं के दुरुपयोग के कारण प्रतिरोधी रोगजनकों की व्यापकता के कारण एएमआर निगरानी प्रणाली स्थापित करना अनिवार्य था। 2008 के बाद से, पशु विज्ञान और पशु चिकित्सा संस्थान, शेडोंग एकेडमी ऑफ एग्रीकल्चरल साइंसेज की सार्वजनिक स्वास्थ्य टीम ने शेडोंग प्रांत1 2,13,17 में क्रमिक रूप से जानवरों की एएमआर निगरानी की है। उच्च स्तर के पशु चिकित्सा प्रतिरोध और बड़ी निगरानी मात्रा के कारण रोगाणुरोधी एजेंटों के उपयोग को विनियमित करने के लिए रोगजनकों के एमआईसी का कुशलतापूर्वक पता लगाना आवश्यक था। हालांकि, एएसटी के लिए प्रासंगिक उपकरण महंगे हैं, और ऑपरेशन और उपभोग्य सामग्रियों की लागत अधिक है और बड़े पैमाने पर खेतों की एक विस्तृत श्रृंखला के लिए उपयुक्त नहीं है। इस कारण से, बुद्धिमान उच्च-थ्रूपुट एएसटी प्रणाली का विकास और इसके आवेदन का मानकीकरण एएमआर निगरानी प्रौद्योगिकी के लिए एक ध्वनि प्रणाली की स्थापना को बढ़ावा देने के लिए अनुकूल था। पिछले शोध12,13 के अनुसार, बुद्धिमान उच्च-थ्रूपुट एएसटी प्रणाली ने सीएलएसआई के मानक से मेल खाने के लिए अच्छी पुनरावृत्ति और स्थिरता हासिल की और एएसटी और जानवरों में नैदानिक रोगजनक बैक्टीरिया के विश्लेषण पर लागू किया गया। आज तक, 20,000 से अधिक महामारी उपभेदों के लिए व्यापक एएमआरडेटा जमा किया गया है। निगरानी प्रक्रिया में पाए जाने वाले प्रतिरोधी बैक्टीरिया के लिए, इस प्रणाली का उपयोग एएमआर को कम करने के लिए रोगाणुरोधी एजेंटों के साथ सहयोग करने के लिए लिटिक फेज की तेजी से उच्च-थ्रूपुट स्क्रीनिंग के लिए भी किया जा सकता है। फेज लाइसिस स्क्रीनिंग के लिए 96-डॉट मैट्रिक्स इनोक्यूलेटर और छवि अधिग्रहण कनवर्टर का आवेदन एक विस्तारित कार्य था, और इस क्षेत्र में पहले कोई अन्य उपकरण लागू नहीं किया गया था।

बुद्धिमान उच्च-थ्रूपुट एएसटी / फेज स्क्रीनिंग सिस्टम ने एएमआर निगरानी, नियंत्रण और कमी प्राप्त करने के लिए एएसटी को लिटिक बैक्टीरियोफेज के साथ जोड़ा। इसी समय, लार इंडेक्स का उपयोग एएमआर की कमी के लिए विभिन्न कारकों और नई जीवाणुरोधी प्रौद्योगिकियों के योगदान का मूल्यांकन करने के लिए अधिक सहज और संक्षिप्त रूप से किया गया था।

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Disclosures

युकिंग लियू एट अल ने 96-डॉट मैट्रिक्स इनोक्यूलेटर और छवि अधिग्रहण कनवर्टर और उनके अनुप्रयोगों (पेटेंट नंबर जेडएल 201610942866.3 और पेटेंट नंबर जेडएल 201910968255.एक्स) के लिए चीनी पेटेंट दायर किए हैं।

Acknowledgments

यह काम राष्ट्रीय कुंजी अनुसंधान और विकास परियोजना (2019YFA0904003) द्वारा समर्थित था; शेडोंग प्रांत में आधुनिक कृषि औद्योगिक प्रणाली (एसडीएआईटी-011-09); अंतर्राष्ट्रीय सहयोग मंच अनुकूलन परियोजना (CXGC2023G15); कृषि विज्ञान अकादमी शेडोंग, चीन (CXGC2023G03) की कृषि विज्ञान और प्रौद्योगिकी नवाचार परियोजना के प्रमुख नवाचार कार्य।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
96 well  culture plate Beijing lanjieke Technology Co., Ltd 11510
96-dot matrix AST image acquisition system Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences In-house software copyright
96-dot matrix inoculator  Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences N/A Patented product
Agar Qingdao hi tech Industrial Park Haibo Biotechnology Co., Ltd HB8274-1
Amikacin  Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd A857053
Amoxicillin Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd A822839
Ampicillin Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd A830931
Analytical balance Sartorius BSA224S
Automated calculation software for Lar index of AMR Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences In-house software copyright
Bacteria Salmonella strains Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences N/A Animal origin
Bacterial resistance Lar index certification management system V1.0 Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences In-house software copyright
Ceftiofur Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd C873619
Ciprofloxacin Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd C824343
Clavulanic acid Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd C824181
Clean worktable Suzhou purification equipment Co., Ltd SW-CJ-2D
Colistin sulfate Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd C805491
Culture plate Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences N/A Patented product
Doxycycline Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd D832390
Enrofloxacin Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd E809130
Filter 0.22 μm Millipore SLGP033RB
Florfenicol Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd F809685
Gentamicin Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd G810322
Glass bottle 50 mL Xuzhou Qianxing Glass Technology Co., Ltd QX-7
High-throughput resistance detection system V1.0 Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences In-house software copyright
Image acquisition converter Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences N/A Patented product
Meropenem Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd M861173
Mueller-Hinton agar Qingdao hi tech Industrial Park Haibo Biotechnology Co., Ltd HB6232
Petri dish 60 mm x 15 mm Qingdao Jindian biochemical equipment Co., Ltd 16021-1
Petri dish 90 mm x 15 mm Qingdao Jindian biochemical equipment Co., Ltd 16001-1
Salmonella phages Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences N/A
Shaker incubator Shanghai Minquan Instrument Co., Ltd MQD-S2R
Turbidimeter Shanghai XingBai Biotechnology Co., Ltd F-TC2015
Varms base type library system V1.0 Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences In-house software copyright
Vertical high-pressure steam sterilizer Shanghai Shen'an medical instrument factory LDZX-75L
Veterinary pathogen resistance testing management system Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences In-house software copyright
Veterinary resistance cloud monitoring and phage control platform V1.0 Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences In-house software copyright

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References

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बुद्धिमान उच्च-थ्रूपुट रोगाणुरोधी संवेदनशीलता परीक्षण फेज स्क्रीनिंग सिस्टम लार इंडेक्स रोगाणुरोधी प्रतिरोध एएसटी मानदंड नैदानिक और प्रयोगशाला मानक संस्थान (सीएलएसआई) न्यूनतम निरोधात्मक एकाग्रता (एमआईसी) साल्मोनेला उपभेदों पोल्ट्री शेडोंग चीन रोगाणुरोधी एजेंटों प्रतिरोध की व्यापकता रोगाणुरोधी प्रतिरोध (एएमआर) लिटिक फेज फेज लाइब्रेरी लाइसिस स्पेक्ट्रम
फेज स्क्रीनिंग सिस्टम और एंटीमाइक्रोबियल प्रतिरोध के लार इंडेक्स का अनुप्रयोग
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Hu, M., Liu, Z., Song, Z., Li, L., Zhao, X., Luo, Y., Zhang, Q., Chen, Y., Xu, X., Dong, Y., Hrabchenko, N., Zhang, W., Liu, Y. Application of the Intelligent High-Throughput Antimicrobial Sensitivity Testing/Phage Screening System and Lar Index of Antimicrobial Resistance. J. Vis. Exp. (197), e64785, doi:10.3791/64785 (2023).

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