Summary
ここでは、インテリジェントなハイスループット抗菌感受性試験/ファージスクリーニングシステムの原理、構造、および指示を紹介します。その応用例は、中国山東省の家禽から分離された サルモネラ菌 を例にとります。Lar指数を算出し、薬剤耐性の評価におけるその意義を総合的に論じる。
Abstract
耐性菌に対する抗菌剤感受性試験(AST)およびファージハイスループットスクリーニングの効率を向上させ、検出コストを削減するために、AST基準および臨床検査基準協会(CLSI)によって策定された耐性ブレークポイント(R)に従って、96ドットマトリックス接種器、画像取得コンバーター、および対応するソフトウェアを含むインテリジェントなハイスループットAST/ファージスクリーニングシステムが開発されました。中国山東省の家禽から分離された1,500株の サルモネラ 菌株のASTおよび最小発育阻害濃度(MIC)分布(R / 8から8R)の統計を、10の抗菌剤に対してインテリジェントなハイスループットAST/ファージスクリーニングシステムによって実施しました。Lar指数は、「抗生物質が少なく、耐性が少なく、抗生物質がほとんどなくなるまで残存する」という意味で、各MICの加重平均を計算し、Rで割ることによって得られました。このアプローチは、耐性菌株の抗菌薬耐性(AMR)の程度を特徴付けるために耐性の有病率を使用する場合と比較して、精度が向上します。AMRの高い サルモネラ 菌株については、このシステムによりファージライブラリーから溶解性ファージを効率的にスクリーニングし、溶解スペクトルを計算および分析しました。その結果、インテリジェントなハイスループットAST/ファージスクリーニングシステムは、操作性、精度、高効率、安価、メンテナンス性が高いことが示されました。山東省の獣医用抗菌薬耐性モニタリングシステムと組み合わせることで、AMRに関連する科学研究や臨床検出に適していました。
Introduction
細菌性感染症の予防に抗菌薬が広く用いられる中、薬剤耐性(AMR)は世界的な公衆衛生上の問題となっています1。AMRとの闘いは、疫学的病原体のAMRのモニタリングと、感受性抗菌剤と溶解性バクテリオファージの相乗療法の現在の主要な使命です2。
in vitro 抗菌薬感受性試験(AST)は、治療のモニタリングとAMRレベルの検出の主力です。抗菌薬理学の重要な部分であり、臨床薬学の重要な基盤です。米国の臨床検査基準協会(CLSI)と欧州抗菌剤感受性試験委員会(EUCAST)は、ASTの国際基準を策定および改訂し、ASTメソッドとブレークポイントを継続的に修正および補足して、特定の「生物-抗菌剤」の組み合わせのMICを感受性(S)、耐性(R)、または中間体(I)として決定しました3。4.
1980年代から1990年代にかけて、Alfred 60AST、VITEK System、PHOENIXTM、Cobasbact 5,6,7などの例で、自動マイクロブロス希釈装置が急速に開発され、臨床診療に適用されました。しかし、これらの機器は高価で、高コストの消耗品が必要であり、その検出範囲は臨床患者の投薬用に設計されていました5,6,7。これらの理由から、獣医の臨床検査や大量の高耐性株の検出には適していません。本研究では、96ドットマトリックス接種装置(図1)、画像取得コンバーター(図2)、および対応するソフトウェア8を含むインテリジェントなハイスループットAST/ファージスクリーニングシステムを開発し、寒天希釈法により複数の抗菌剤に対して一度に細菌株のバッチのASTを実施しました。さらに、このシステムは、薬剤耐性菌に対するファージの溶解パターンの検出と分析にも使用され9、ファージライブラリーから溶解性ファージを効率的に選択しました。このシステムは、効率的で、手頃な価格で、操作が簡単であることがわかりました。
図1:96ドットマトリックス接種器の構造図。 1:接種ピンプレート。2:携帯電話会社;3:シードブロック;4:インキュベートプレート;5:ベース;6:操作ハンドル;7:リミットピン。この図の拡大版をご覧になるには、ここをクリックしてください。
図2:画像取得コンバータの構造図。 1:シェル;2:表示画面;3:画像取得室。4:検出板基盤;5:倉庫の内外の検出板;6:コントロールボード;7:画像取得変換装置と、8:光源;9:イメージスキャナー。この図の拡大版をご覧になるには、ここをクリックしてください。
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Protocol
本研究で使用した サルモネラ菌 株は、中国山東省農業科学院畜産獣医学研究所バイオセーフティ委員会の承認を得て、中国山東省の家禽から採取されたものです。
1. インテリジェントハイスループットASTシステムの応用8
- 接種剤の調製
- 品質管理生物である大腸菌と93のサルモネラ菌株をインキュベートし、ミューラーヒントン寒天(MHA)プレート上でASTを試験します。
- CLSI標準で指定されている方法に基づいて、0.5マクファーランド濁度標準に一致するように各菌株の接種体を調製し、3とした後、10倍に希釈します。
- 200 μL の滅菌生理食塩水をネガティブコントロールとして 96 ウェルプレートの水平 1 番目のウェル (A1) に入れ、品質管理生物の 2 つの懸濁液をポジティブコントロールとして水平の 2番目と 3番目のウェル (A2 と A3) に入れ、品質管理を行います。試験した各染色の希釈した接種懸濁液200 μLを、96ウェルシードブロックの対応する93ウェルに加えます。
- 抗菌寒天プレートの調製
- Lar指数の計算範囲(0.125Rから8R)に従って、テストされたさまざまな抗菌剤の濃度範囲を設定します。濃度は、品質管理範囲または 0.0625R (より低い範囲の対象) から 8R の範囲です。
注:Lar指数が計算されない場合は、ASTのニーズに応じて抗生物質濃度の範囲を設定できます。 - CLSI標準3で指定されている寒天希釈法に基づいて、適切なストック濃度から始まる抗生物質溶液のlog2倍増希釈スキームを実行します。
- 18 mLのMueller-Hinton寒天培地を含む50 mLのガラス瓶を滅菌します。45〜50°Cに冷却した18 mLの溶融培地に適切な希釈液2 mLを加え、完全に混合し、バイオセーフティキャビネット内のプレートに注ぎます。
- 寒天を室温(RT)で固化させ、インキュベートプレートの蓋の下に隙間を残し、吹き飛ばして寒天表面を乾燥させてから接種します。
- インキュベートプレートの裏側に抗菌剤の種類と濃度をラベル付けします。各抗菌剤の複数のインキュベートプレートを、log2倍の希釈順でスタックに配置します。
- 各抗菌剤のコントロールとして、2枚の薬剤を含まない寒天プレートを調製します。
- Lar指数の計算範囲(0.125Rから8R)に従って、テストされたさまざまな抗菌剤の濃度範囲を設定します。濃度は、品質管理範囲または 0.0625R (より低い範囲の対象) から 8R の範囲です。
- 96ドットマトリックス接種器の接種手順
- オートクレーブ処理した接種ピンプレートを、バイオセーフティキャビネット内の96ドットマトリックス接種器の支持体に取り付けます。
- 準備したシードブロックを、試験した菌株と寒天インキュベートプレートとともに、2つのプレートの位置決め角度を同じにしてモバイルキャリアに置きます。
- シードブロックが接種ピンプレートの真下に来るように携帯電話キャリアを押します。
- 操作ハンドルを押し、接種ピンプレートを下に動かし、96本のピンをシードブロックの96ウェルの接種器に向けます。
- 操作ハンドルをコントロールで放し、スプリングの作用で接種ピンプレートをリセットします。
- 操作ハンドルを2〜3回押して、各接種物をよくかき混ぜ、浸します。インキュベートプレートが接種ピンプレートの真下になるように、キャリアプレートを押して動かします。
- 操作ハンドルを押し、接種ピンプレートを下に動かし、1〜2秒間停止して、接種ピンがインキュベートプレートの表面に完全に接触するようにします。
- 操作ハンドルを放します。これで1回の接種は完了です。別のインキュベートプレートを交換し、抗菌寒天プレートの1つのグループが終了するまでサイクルを続けます。
- 別の接種ピンプレートとシードブロックを交換し、テストされた株の別のグループに接種します。すべての接種が完了するまでサイクルします。
注:最初にコントロール寒天プレート(抗菌剤なし)を接種し、次に薬物濃度の低いものから高いものの順にプレートを接種し、最後に2番目のコントロール寒天プレートを接種して、汚染や抗菌剤のキャリーオーバーがないことを確認します。接種量は、約2μLの各ピンの自然沈着量に依存します。
- 抗菌寒天プレートのインキュベーション
- 接種した抗菌寒天プレートを室温で、接種斑の水分が寒天に吸収されるまでインキュベートします。
- プレートを反転させ、試験した菌株について37°Cで16〜20時間インキュベートして、抑制されていない細菌がコロニーを形成することを確認します。
- 画像取得とデータ統計
- 96ドットマトリクスAST画像取得システムをダブルクリックしてプログラムを開きます。
- タスクバーの[ テスト情報 ]をクリックします。 [新規 ]をクリックして新しいテストタスクを作成し、プロンプトに従って、コード、名前、ソース、細菌、菌株数、抗生物質、グラジエントなどの情報を入力します。
- [データ収集] > [ 写真] > [テスト項目] をクリックして、作成した新しいタスクを選択します。抗生物質の名前を選択するには抗生物質をクリックし、この 抗生物質 の初期濃度を選択するには グラジエント をクリックします。
- [接続]をクリックして、画像取得コンバーターに接続します。
- 対応するインキュベートプレートを検出プレートベースに置き、角度が欠けている方向を右前方に向け、画像取得コンバーターに押し込みます。
- [コレクション]をクリックして画像を取得します。抗生物質のグラジエントは、自動的に次のグラジエントにジャンプします。次のプレートを順番に置き、この抗生物質のプレートが収集されるまで[収集]をクリックし続けます。
- 抗生物質をクリックし、次のインキュベートプレートのセットを選択します。[グラデーション]をクリックして開始グラデーションを選択し、画像コレクションの次のラウンドに進みます。
- すべてのコレクションが完了したら、[ 送信]をクリックします。このプログラムは、画像の各接種点でフォーマットされた白いピクセルの数を自動的に認識し、コロニー形成があるかどうかを判断し、画像をMIC値に変換します。
- [ クエリ ] をクリックして、テストされた抗生物質に対する菌株のすべての MIC 結果を取得します。
注:インテリジェントなハイスループットASTシステムは、細菌株の大規模なバッチのMICを測定するのに適しています。準備、接種、インキュベーション、結果の読み取りを含むテストプロセスには3日かかります。抗生物質の種類とMIC検出範囲は、それぞれのニーズに応じて設定でき、主要な消耗品は再利用できます。
- Lar指数の計算
- 次の式でLarインデックスを正確に決定します。
MICi:最小発育阻害濃度。
MIC-3 から MIC3 までの MIC 分布の範囲は、R を中心とする直列 2 倍濃度 (0.125R、0.25R、0.5R、R、2R、4R、8R) を表します。
は 2 i で、i の範囲は -3 から 3 です。
R:CLSIによって標準化された抗菌剤に対する細菌の耐性のブレークポイント。
f: MIC 度数分布。
注:一般的なLarインデックスは、すべてのLarインデックスの算術平均です。Lar インデックスが計算されたら、最終値を小数点以下の 2 桁の有効数字に四捨五入します。
- 次の式でLarインデックスを正確に決定します。
は 2 i で、i の範囲は -3 から 3 です。2. 理性的なハイスループットのバクテリオファージのスクリーニング システム9
- バクテリオファージシードブロックおよびバクテリアを含有する2層インキュベートプレートを調製する。
- 異なるファージを作製するには、二層寒天法10 または液体培養法11 を使用します。1 x 104-5 pfu/mLの力価で適切な平行濃度に希釈し、200 μLのファージ接種体を96ウェルシードブロックに加えます。
- バクテリア(10 mLの底寒天培地[寒天12 g/L]と6 mLの上部半寒天培地[6 g/L]、100 μLのバクテリア[0.5 McFarland])を入れた2層プレートを試験します。
- 試験する菌株ごとに2層のインキュベートプレートを作成します。二層プレートの蓋の下に隙間を残し、バイオセーフティキャビネット内の寒天表面を吹き飛ばして乾燥させます。
- スクリーニング検査
- 調製したファージシードブロックと2層プレートを96ドットマトリックス接種器のモバイルキャリアに置き、すべてのファージ接種を半寒天表面に移します。テストされたすべての株が完了するまでサイクルを続けます。
- 接種した二層プレートは、接種スポットの水分が半寒天に完全に吸収されるまで室温に留まります。
- プレートを反転させ、試験した菌株に適した条件下で4〜6時間インキュベートして、透明な溶解性スポットが形成されるようにします。
- データの分析
- 画像取得コンバータにより、各二層板の実験結果の画像を取得し、保存する(ステップ1.5.4-1.5.6)。
- 得られた画像に基づいて、さまざまな形状の斑点の数と形態をスプレッドシートに記録し、さまざまな種類のファージのそれぞれの比率を計算します。
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Representative Results
インテリジェントなハイスループットASTシステムのプロトコルに従って、そのアプリケーションは、例として中国山東省の家禽由来の サルモネラ 菌によって説明されました。
画像取得コンバーターで測定したアンピシリン(R 32 μg/mL)を2〜256 μg/mLの濃度で寒天プレート上でサル モネラ菌 株が増殖したことを 図3に示します。水平の第1ウェル A1はネガティブコントロールであり、コロニーの成長は示さなかった。A2およびA3は、CLSIによって標準化された品質管理範囲(2-8μg/mL)内のMIC 4 μg/mL(2 μg/mLのアンピシリンで寒天プレート上にコロニーを形成するが、4 μg/mLのコロニーを形成しない)の品質管理株であった。A4の サルモネラ 菌株のMICは64μg/mLであったのに対し、A5のMICは16μg/mLであった。アンピシリンに対する93の サルモネラ菌 株のMIC分布は、ソフトウェアによって自動的に計算されました。
図3:アンピシリンを含む一連の培養プレート上の サルモネラ菌 の形態。 8水平:A-H、12垂直:1-12。 この図の拡大版をご覧になるには、ここをクリックしてください。
山東省の動物由来の サルモネラ菌 株のAMRを測定するために、ハイスループットASTシステムを適用しました。MICデータは、Varms(http://www.varms.cn/)12のデータベースにアップロードされました。統計結果を表1に示す。合計10種類の抗菌剤を300〜1,500株の サルモネラ菌 株に対して試験し、このシステムのハイスループットの利点を示しました。
CLSI規格の耐性ブレークポイントに従って、耐性率(R%)は、試験された株のうちMIC≥Rを持つ株の割合として計算されました(表1)。アンピシリン、シプロフロキサシン、およびアモキシシリン-クラブラン酸のR%値は50%以上、ドキシサイクリン、フロルフェニコール、セフォタキシム、およびエンロフロキサシンのR%値は30%〜50%であり、ゲンタマイシン、アミカシン、およびメロペネムのR%値は30%未満でした。.メロペネムは工業的に飼育された動物には使用されておらず、7%のR%を示しました。
R%は、MICがRよりも高い細菌株の割合を示し、MIC分布は、 サルモネラ 菌の全体的なAMRをより正確に記述するために、各MICを持つ菌株の数を示しました。例えば、アンピシリンのR%は73%であり、MIC≥256μg/mLで濃縮したサンプル数(916株)は最大であり、アンピシリンに対する サルモネラ菌 の耐性がかなり深刻であることが分かりました。
表1:山東省の動物由来サル モネラ菌 のMIC分布、R%、およびLar指数値。 太字のMICは抗菌剤のR値です。 この表をダウンロードするには、ここをクリックしてください。
均一性と比較可能性のために、各薬物のRを中心として、3つのグラジエントを前後に拡張しました。7つの勾配のMIC分布に従って、Lar指数は次の式で計算されました。
.
アンピシリンの例として、R値は32μg/mL、サンプル数は1、 414、およびラール=(4/32)x(245/1414)+(8/32)×(16/1414)+(16/32)×(117/1414)+(32/32)×(27/1414)+(64/32)×(36/1414)+(128/32)×(57/1414)+(256) /32) × (916/1414) = 2-3 × (245/1414) + 2-2 × (16/1414) + 2-1 × (117/1414) + 20 × (27/1414) + 21 × (36/1414) + 2 2× (57/1414) + 2 3× (916/1414) = 5.48 です。この式により、他の抗菌剤のLar指数を算出し、表1に示す。
Lar指数の意義は、AMRの重症度を正確に示すことであった。シプロフロキサシンとアモキシシリン-クラブラン酸を例にとると、R%値はそれぞれ68%と65%とほぼ同じでしたが、Lar指数はそれぞれ4.57と1.76と大きく異なっていました。この理由は、 表1の高MIC値の分布にはっきりと表れており、シプロフロキサシン耐性株の71.3%が8R(32μg/mL)に分布しているのに対し、アモキシシリンクラブラン酸耐性株のMICはRと2Rに集中しており、8Rの割合は低く(8.69%)でした。したがって、シプロフロキサシンのLar指数はアモキシシリン-クラブラン酸よりも高く、高シプロフロキサシン耐性株の割合がアモキシシリン-クラブラン酸耐性株の割合よりも高いことを示しています。Lar指数は、耐性率よりもAMRの程度をより正確に示す指標でした。
Lar指数の式によると、特定の薬物に関するすべての菌株のMICがRの場合、Lar指数は1になります。すべての菌株のMICが2Rの場合、Lar指数は2になります。したがって、Lar指数は、エッジ濃度を除いて、包括的なMICと対応するR値との間に複数の関係を示しました。Lar指数はAMRの程度を評価するために使用され、AMRが高いほど優位性が顕著でした。均一性および比較可能性のため、Lar指数の算出範囲は、R値を中心とする前後3勾配で7MICとし、加重平均は、異なる抗菌剤、菌株数、MIC分布を統合して求めた。したがって、Lar指数の値の範囲は0.125-8でした。Larが0.125に近づくほどAMRは低くなり、8に近づくほどAMRは高くなります。しかし、周辺濃度ではLarとRの間に比例関係はありませんでした。抗菌剤とLar指数の計算範囲が確定した場合、一般的なLarを直感的な総合値に正規化し、細菌、使用者、年、地域などのさまざまな条件下でのAMRの程度と変化傾向を直接比較および評価しました。
インテリジェントファージスクリーニングシステムのプロトコルに従い、96種類のサルモネラ菌を例にAMRサルモネラ菌株を溶解するアプリケーションを実証し、ファージ溶解パターンを分析しました。
96個のファージを、96ドットマトリックス接種器によって サルモネラ菌 を含む2層プレートに移した。形成された斑点の形態を 図4に示す。大きく分けて、透明な丸斑(●)、プラーク
の集合()、濁った溶解斑()、溶解斑なし(
○)の4種類であった。
図4:二層寒天プレート上のサルモネラ斑点の形態。 1および2:異なるサルモネラ菌株上の96のファージによって産生されるパターン。「●」丸いクリアスポット、「プラークの集まり」「濁った溶解斑」「○」溶解斑なし) この図の拡大版をご覧になるには、ここをクリックしてください。
二層プレートでは、異なる宿主細菌上の異なるファージの溶解性スポットは、形態において多様であった10。「丸くて透明な溶解斑」は、プレート上の宿主を確実に殺すことができるが、その宿主を犠牲にしてうまく複製できる場合とできない場合があるファージに起因します。この場合、タイプを最終的に決定するために、さらに希釈する必要がありました。「プラークのコレクション」は、真のプラークによって形成されました。溶解の各ゾーンは、単一の感染中心から明らかに生成され、ファージがプレート上の細菌を犠牲にして複製されたことを実証しました。「濁った溶解斑」は、プレート上の宿主を確実に殺さず、その宿主を犠牲にして複製に成功する場合とそうでない場合があるファージに起因します。このケースでは、複数の可能性があり、さらなる研究関心に基づく確認が必要でした。「溶解性スポットなし」は非溶解性を示しました。
さらに、このシステムを予備試験に使用することで、菌株とバクテリオファージが重複しているかどうかを本質的に判断できます。異なるサルモネラ菌種が選択され、2つのバクテリオファージのパターンが同一である場合、バクテリオファージが重複している可能性があることを示しました。臨床発生源から未知のサルモネラ菌種に感染するために非反復性バクテリオファージが選択され、ファージパターンが同じである場合、サルモネラ菌株が同じ株である可能性があることが示されました。 さらに、重複の数と割合は疫学調査の基準値でした。
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Discussion
寒天希釈法は確立されており、広く使用されています。ハイスループットASTシステムの原理は寒天希釈法の原理であった。プロトコル内の重要なステップの1つは、一度に96個の接種者を正確かつハイスループットで移送することで、これを複数回連続して実行しました。この重要なステップを完了するために、96ドットマトリックス接種器のピンは均一で非常に滑らかでした。各ピンの自然堆積量は約 2 μL で、寒天培地の表面に凝集して小さな液滴となり、寒天にすばやく吸収され、流れたり飛散してクロスコンタミネーションを引き起こしたりしませんでした。2つ目の重要なステップは、大規模なASTデータの統計処理でした。ハイスループット接種では、検査データを決定する必要があり、作業負荷も膨大でした。インテリジェントな画像取得コンバータとサポートソフトウェアによって生成されたインテリジェントな分析と統計結果は、この問題に対する完璧なソリューションでした。ASTの結果は、Varmsデータベースに直接自動的にアップロードされました。結果解釈の効率と精度が向上し、人的要因によって引き起こされるエラーが減少しました13。
第3の重要なステップは、AMRのLar指数を提案することでした。現在、AMRの総合評価指標は世界的にほとんどありません。文献によると、薬剤耐性指数(DRI)は、抗生物質の有効性の変化を測定するためにLaxminarayanとKlugmanによって記述されました14,15。耐性の有病率と処方の相対頻度を組み合わせたが、AMRの程度を特徴づけ、高い薬剤耐性レベルの変化を評価することはできなかった。DRIから派生した別の指標である医薬品有効性指数(DEI)16には、DRIと同じ欠点があります。したがって、3つのステップからなるLar指数が提案されました:(1)細菌株のMICは、それぞれのR値に基づいて正規化され、AST標準の異なるR値によって引き起こされる抗菌剤の違いを排除しました。(2)MIC分布によると、加重平均値は、耐性率よりもAMRの程度をより正確に反映するように計算されました。(3)複数の抗菌剤のLar指数、すなわち一般的なLarの算術平均は、AMRの包括的な状況を反映している可能性があり、異なるレベルでのAMRの評価と比較に便宜を提供します。
これらの装置のハードウェア設計は合理的で操作が簡単で、すべての部品がスムーズに動作しました。詰まりの問題や障害はありませんでした。サポートソフトウェアの設計は、ASTおよびファージスクリーニングの個別の要件に適合し、操作と使用が簡単でした。1つの装置には、細菌のバッチ移送の複数の適用可能なシナリオに対応するために、4〜5箱の接種ピンが装備されていました。この装置の中核をなすのは、接種用ピンプレートとステンレス製のピンで、さまざまな環境に適応し、オートクレーブ滅菌、分解、交換が可能でした。接種ピンは、どのような方法でも組み合わせることができるように設計されています。
抗生物質の誤用による耐性病原体の蔓延により、AMRモニタリングシステムの構築が急務となっていました。2008年以来、山東省農業科学院畜産獣医学研究所の公衆衛生チームは、山東省で動物のAMRモニタリングを順次実施してきました1 2,13,17。抗菌剤の使用を調節するためには、病原体のMICを効率的に検出することが、獣医の抵抗性が高く、モニタリング量が多いため、必要でした。しかし、ASTの関連機器は高価であり、運用や消耗品のコストが高く、広範囲の大規模農場には適していません。このため、インテリジェントハイスループットASTシステムの開発とそのアプリケーションの標準化は、AMRモニタリング技術の健全なシステムの構築を促進するのに役立ちました。以前の研究12,13によると、インテリジェントなハイスループットASTシステムは、CLSIの基準に一致する優れた再現性と安定性を達成し、ASTおよび動物の臨床病原菌の分析に適用されました。現在までに、20,000を超える流行株の包括的なAMRデータが蓄積されています12。モニタリングプロセスで見つかった耐性菌に対しては、このシステムを溶解性ファージの迅速ハイスループットスクリーニングにも使用し、抗菌剤と協力してAMRを低減することができます。ファージ溶解スクリーニングのための96ドットマトリックス接種器と画像取得コンバーターの適用は拡張機能であり、この分野ではこれまで他の機器は適用されていませんでした。
インテリジェントなハイスループットAST/ファージスクリーニングシステムは、ASTと溶解性バクテリオファージを組み合わせて、AMRのモニタリング、制御、および低減を実現しました。同時に、Lar指数は、AMRの減少に対するさまざまな要因と新しい抗菌技術の寄与を評価するために、より直感的かつ簡潔に使用されました。
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Disclosures
Yuqing Liuらは、96ドットマトリックス接種器および画像取得コンバーターとその用途に関する中国特許を申請しています(特許番号ZL 201610942866.3および特許番号ZL 201910968255.X)。
Acknowledgments
この研究は、国家重点研究開発プロジェクト(2019YFA0904003)の支援を受けました。山東省の現代農業産業システム(SDAIT-011-09);国際協力プラットフォーム最適化プロジェクト(CXGC2023G15)中国山東省農業科学院農業科学技術イノベーションプロジェクトの主なイノベーション課題(CXGC2023G03)。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 96 well culture plate | Beijing lanjieke Technology Co., Ltd | 11510 | |
| 96-dot matrix AST image acquisition system | Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences | In-house software copyright | |
| 96-dot matrix inoculator | Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences | N/A | Patented product |
| Agar | Qingdao hi tech Industrial Park Haibo Biotechnology Co., Ltd | HB8274-1 | |
| Amikacin | Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd | A857053 | |
| Amoxicillin | Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd | A822839 | |
| Ampicillin | Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd | A830931 | |
| Analytical balance | Sartorius | BSA224S | |
| Automated calculation software for Lar index of AMR | Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences | In-house software copyright | |
| Bacteria Salmonella strains | Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences | N/A | Animal origin |
| Bacterial resistance Lar index certification management system V1.0 | Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences | In-house software copyright | |
| Ceftiofur | Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd | C873619 | |
| Ciprofloxacin | Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd | C824343 | |
| Clavulanic acid | Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd | C824181 | |
| Clean worktable | Suzhou purification equipment Co., Ltd | SW-CJ-2D | |
| Colistin sulfate | Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd | C805491 | |
| Culture plate | Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences | N/A | Patented product |
| Doxycycline | Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd | D832390 | |
| Enrofloxacin | Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd | E809130 | |
| Filter 0.22 μm | Millipore | SLGP033RB | |
| Florfenicol | Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd | F809685 | |
| Gentamicin | Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd | G810322 | |
| Glass bottle 50 mL | Xuzhou Qianxing Glass Technology Co., Ltd | QX-7 | |
| High-throughput resistance detection system V1.0 | Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences | In-house software copyright | |
| Image acquisition converter | Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences | N/A | Patented product |
| Meropenem | Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd | M861173 | |
| Mueller-Hinton agar | Qingdao hi tech Industrial Park Haibo Biotechnology Co., Ltd | HB6232 | |
| Petri dish 60 mm x 15 mm | Qingdao Jindian biochemical equipment Co., Ltd | 16021-1 | |
| Petri dish 90 mm x 15 mm | Qingdao Jindian biochemical equipment Co., Ltd | 16001-1 | |
| Salmonella phages | Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences | N/A | |
| Shaker incubator | Shanghai Minquan Instrument Co., Ltd | MQD-S2R | |
| Turbidimeter | Shanghai XingBai Biotechnology Co., Ltd | F-TC2015 | |
| Varms base type library system V1.0 | Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences | In-house software copyright | |
| Vertical high-pressure steam sterilizer | Shanghai Shen'an medical instrument factory | LDZX-75L | |
| Veterinary pathogen resistance testing management system | Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences | In-house software copyright | |
| Veterinary resistance cloud monitoring and phage control platform V1.0 | Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences | In-house software copyright |
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