Summary
Målet med dette manuskriptet er å undersøke bruken av rabies indirekte fluorescerende antistofftest for påvisning av rabiesspesifikke IgG- og IgM-antistoffer.
Abstract
Rabies indirekte fluorescerende antistoff (IFA) -testen ble utviklet for å oppdage forskjellige rabiesspesifikke antistoffisotyper i sera eller cerebral spinalvæske. Denne testen gir raske resultater og kan brukes til å oppdage rabiesantistoffer i flere forskjellige scenarier. Rabies IFA-testen er spesielt nyttig for rask og tidlig påvisning av antistoffer for å evaluere immunresponsen hos en pasient som har utviklet rabies. Selv om andre metoder for antemortem rabiesdiagnose har forrang, kan denne testen brukes til å demonstrere nylig rabiesviruseksponering gjennom antistoffdeteksjon. IFA-testen gir ikke et virusnøytraliserende antistoff (VNA) titer, men preeksponeringsprofylakse (PrEP) respons kan evalueres gjennom positiv eller negativ antistofftilstedeværelse. Denne testen kan brukes i ulike situasjoner og kan gi resultater for en rekke ulike siktemål. I denne studien brukte vi flere parrede serumprøver fra personer som fikk PrEP og demonstrerte deres rabiesantistofftilstedeværelse over tid ved bruk av IFA-testen.
Introduction
Rabies indirekte fluorescerende antistoff (IFA) test brukes til å oppdage ulike rabiesspesifikke antistoffisotyper i sera eller cerebral spinalvæske. Det er en av et arsenal av tester tilgjengelig for overvåking av en antemortem rabies pasient. Det er spesielt nyttig for tidlig påvisning av antistoffer for å evaluere pasientens immunrespons mot rabiesinfeksjon. Når den brukes sammen med andre tester, sakshistorie og pasientens vaksinasjonsstatus, kan IFA-testen hjelpe til med å bestemme eksponering for rabiesvirus eller en vaksine1. Som IFA-testen måler IgM og / eller IgG, kan verdiene av det spesifikke antistoffet indikere en omtrentlig tidsramme fra eksponering for antigenet1. Denne testen kan være nyttig i de listede applikasjonene eller andre som ennå ikke er utforsket.
Det finnes flere rabieserologiske analyser. Den raske fluorescerende fokusinhiberingstesten (RFFIT), fluorescerende antistoffvirusnøytraliseringstest (FAVN) eller modifikasjoner av disse er de primære metodene for å måle rabiesvirusnøytraliserende antistoffer (RVNA)1. Imidlertid skiller disse testene ikke IgM- og IgG-antistoffer. Når differensiering av antistoffisotype er viktig for å overvåke rabiesimmunresponsen, brukes rabies IFA og rabies enzymbundet immunosorbentanalyse (ELISA) tester, men de måler ikke RVNA. Selv om IFA- og ELISA-testene kan brukes til å bestemme tilstedeværelsen av rabiesspesifikke antistoffer i en prøve, er det noen forskjeller i hvordan de utføres. IFA-testen benytter et cellekulturert levende virus som antigensubstrat, mens en typisk ELISA for rabiesdeteksjon bruker ett eller flere av virusproteinene. I en laboratorieinnstilling hvor rabiesviruset kan dyrkes, kan IFA-testen lettere utføres i stedet for å kjøpe eller dyrke individuelle virale proteiner for ELISA. Formålet med testingen og informasjonen som er oppnådd fra resultatene av en hvilken som helst rabieserologisk analyse, bør vurderes når man bestemmer hvilken som skal velges2.
IgM er den første som reagerer, og øker til klassebytte observeres rundt dag 28, da IgG blir det dominerende sirkulerende antistoffet3. Derfor vil IgM bare forventes i en begrenset periode etter eksponering for rabiesvirus eller vaksinasjon. Testing av både serum og cerebrospinalvæske (CSF) kan indikere om eksponeringen var gjennom vaksinasjon, der antistoffer bare ville bli sett i sera, eller fra en virusinfeksjon, som potensielt ville vise antistoffer i CSF1.
Det er fastslått at rabiesantistoffer vedvarer i flere år etter preeksponeringsprofylakse (PrEP)4. IFA-testen kan være et nyttig verktøy for å demonstrere dette på forskjellige tidspunkter etter vaksinasjon eller eksponering.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Følgende protokoll er godkjent for etisk bruk av menneskelige prøver av New York State Department of Health Wadsworth Center for analyseutvikling, protokollgodkjenningsnummer #03-019.
1. Sikkerhet
- Ta på deg personlig verneutstyr (PPE), minimum øyevern (briller eller ansiktsskjerm), en kirurgisk maske og ikke-latekshansker.
- Sørg for at personell er vaksinert for rabies og at en titer på ≥0,5 IE / ml er påvist i løpet av de siste 6 månedene.
2. Antigen lysbilde forberedelse
MERK: Utfør alle virus-, CSF- og serummanipulasjoner i et biosikkerhetskabinett (BSC) ved hjelp av universelle forholdsregler.
- Forbered 20 ml museneuroblastom eller BHK-21-celler til en konsentrasjon på 3,0 x 105 celler / ml i Eagle's minste essensielle medier supplert med 10% føtal bovint serum (EGM) og hold kaldt til bruk.
- Forbered CVS-11-viruset ved å fortynne i EGM til en arbeidsfortynning på 1,0 x 106,5 50% smittsom dose vevskultur (TCID50) per milliliter og hold deg kald til den er klar til bruk.
MERK: TCID50 bestemmes av Reed og Muench-metoden publisert tidligere5. - Rengjør et glidekammer med fuktighet og polytetrafluoretylen (PTFE)-belagte brønnmikroskopglass med 70 % etanol og la det lufttørke i BSC.
- Tilsett destillert vann (dH2O) til strimler av absorberende papir i glidekammeret for å sikre at fuktigheten forblir konstant gjennom hele prosedyren.
- Bruk en blyant til å merke hvert lysbilde som skal brukes med partinummer, dato, celletype og annen identifiserende informasjon som kreves for lagring, og plasser i lysbildekammeret.
MERK: De fleste markører, penner eller etiketter tåler ikke det fremtidige acetonfikseringstrinnet (trinn 2.9). - Påfør 50 μL virusfortynning til hver brønn på mikroskoplysbildene med en gjentatt pipette. Påfør deretter 50 μL cellefortynning på hver brønn, og vær forsiktig så du ikke forurenser pipettespissen med viruset som allerede er på brønnen.
- Lukk glidekammeret og legg det i den fuktige inkubatoren ved 34-36 °C. Vurder cellens smittsomhet etter 24 timer.
MERK: Utfør trinn 2.8-2.12 på bare ett lysbilde. - Fjern lysbildet fra fuktighetskammeret og aspirer supernatanten forsiktig. Vask lysbildet i en fosfatbufret saltvann (PBS)-fylt Coplin krukke i 2 minutter, og la lysbildet lufttørke.
- Plasser lysbildet i Coplin krukke og fest lysbildet i kaldt aceton i minst 1 time i en -20 ° C fryser godkjent for brennbare materialer. Utfør alle prosedyrer for støping og lufttørking av aceton i en avtrekkshette.
- La acetonen blinke av og skyv for å tørke. Påfør rabies direkte fluorescerende antistoff (DFA) konjugat fremstilt i henhold til produsentens instruksjoner til brønnene i lysbildet og inkuber i 30 minutter i en 34-36 ° C fuktig inkubator.
- Vask lysbildet i Coplin krukker med PBS to ganger i 2 min hver. Lufttørk lysbildet.
- Monter en dekselslip med 0,05 M Tris, 0,15 M NaCl (pH 9,0) og 20% glyserolmonteringsmiddel, og les lysbildet ved hjelp av et fluorescerende mikroskop ved 200x forstørrelse for å vurdere smittsomheten. Hvis cellene ikke er ca. 50 % infiserte, gjenta trinn 2.7-2.12 påfølgende dag til ønsket smittsomhet er nådd.
MERK: Cellesmittsomhet er tilnærmet basert på visuell vurdering av forholdet mellom negative celler og rabies-positive celler på lysbildebrønnen. Negative celler vises rødt i fargen, mens positive celler viser grønn fluorescerende farging. - Fjern de resterende lysbildene fra inkubatoren og fuktighetskammeret. Aspirer supernatanten forsiktig fra hver brønn, og legg deretter lysbildene i en Coplin krukke(r) med PBS i 1-2 min. Lufttørk skliene i ca. 30 min. Oppbevar lysbildene ved -80 °C til de er klare til bruk.
3. Forberedelse av prøver
- Forbered fortynning av pasientens serum eller CSF-prøve for testing. Forbered det nødvendige konjugatet for en riktig arbeidskonsentrasjon fortynnet i PBS med 0,05% Evansblå.
MERK: Hold konjugatet i mørket for å opprettholde fluoroforens integritet før påføring
4. IFA-prosedyre
- Fjern det nødvendige antall forberedte antigen-lysbilder som trengs for hver analyse, og la lysbildene tine og tørke helt.
- Legg lysbildene i en Coplin krukke (er) og fest lysbildene i kald aceton i mellom 2 timer til over natten i en -20 ° C fryser godkjent for brennbare materialer. Fjern lysbildene fra aceton og la lufttørke.
- Plasser lysbildene i en fuktighetskammerboks inne i BSC med dH2O-gjennomvåte absorberende strimler for å opprettholde fuktighet. Påfør 50 μL av hver prøvefortynning, kontrollprøve eller PBS på den forhåndsbestemte brønnen.
MERK: Hvert lysbilde må inneholde et passende antall pasientprøvebrønner, positiv kontroll, negativ kontroll og PBS-cellekontrollbrønn. - Plasser glidekammeret med lukket fuktighet i en 37 ° C, 5% CO2 fuktig inkubator. Inkuber lysbildene i 30 minutter, fjern deretter fuktighetsglidekammeret fra inkubatoren og legg det inn i en BSC.
- Bruk en aspiratorspiss for å aspirere supernatanten forsiktig fra hver brønn, og pass på at du ikke forstyrrer cellemonolaget. Bruk en steril dråpepipette til å påføre en dråpe PBS på hver brønn.
- Gjenta forsiktig aspirasjon, legg deretter hvert lysbilde i en PBS-fylt Coplin krukke og vask to ganger i totalt 15 minutter.
- Plasser lysbildene tilbake i fuktighetskammerboksen og påfør 50 μL passende anti-humane antistoffkonjugat til hver brønn. Gjenta trinn 4.4 til 4.6.
- La lysbildene lufttørke, monter en dekkseddel med monteringsmedier og les lysbildene under fluorescerende mikroskop.
5. Lysbildeanalyse
- Gradeprøver basert på fargemønster og fluorescensintensitet sammenlignet med positive kontrollprøver med bekreftet høy anti-rabies antistofftiter.
- Grader prøvene på en skala med negativ, 1+, 2+, 3+ og 4+, med et negativt resultat som viser ingen fluorescerende farging og 4+ som representerer en lysegrønn eplefargefluorescens med et fargemønster som ligner på positive kontrollprøver1.
MERK: Den grønne eplefargen gjelder bare for FITC-merkede antistoffer; Fargen varierer avhengig av fluoroforvalg. - Tilordne prøvene en sluttpunktverdi representert ved fortynningsfaktoren der prøven viser en 1-2+ karakter. Test prøvene ved en høyere fortynningsfaktor hvis sluttpunktet ikke nås i den første analysen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Alle serumprøver ble samlet inn fra pasientene på omtrent samme tidsramme etter PrEP. Prøvene ble testet fra fem forskjellige pasienter på følgende tidspunkter: 2 uker etter den endelige rabiesvaksineinokulasjonen, 6 måneder etter rabiesvaccineserien og 18 måneder etter rabiesvaccineserien. Hver serumprøve ble fortynnet i serier og gradert for både IgM- og IgG-tilstedeværelse, som beskrevet i protokolltrinn 5.2 og 5.3. Den tildelte antistoffverdien representerer fortynningsfaktoren der prøven nådde et sluttpunkt på 1-2+.
Resultatene fra testing hvert tidspunkt etter PrEP viser analysens evne til å oppdage varierende nivåer av antistofftilstedeværelse. Kort tid etter første vaksinasjon var det høye nivåer av både IgM og IgG i pasientprøvene, som vist i figur 1. Områder med lysegrønn fluorescerende cellefarging indikerer positiv antistofftilstedeværelse; Røde blodlegemer er rabies-negative celler hvor ingen antistoffer kunne binde seg. Ca. 6 måneder etter vaksinasjon var signifikant lavere nivåer av både IgM og IgG tilstede i pasientprøvene, men IgM hadde falt ut nesten helt. Ved siste tidspunkt, 18 måneder etter vaksinasjon, ble det ikke påvist IgM-antistoffer i noen pasientprøver, som vist i figur 2 der ingen grønn fluorescerende cellefarging er observert. Imidlertid vedvarte IgG-nivåene og holdt seg lik nivåene som ble oppdaget ved 6-månederstidspunktet etter den første nedgangen fra 2-ukerstidspunktet. Resultatene for IgG- og IgM-påvisning i prøver fra 2 uker etter vaksinasjon, 6 måneder etter vaksinasjon og 18 måneder etter vaksinasjon er listet opp i henholdsvis tabell 1, tabell 2 og tabell 3. Figur 3 viser flytskjemaet for utførelsesstadiene.
Figur 1: Rabies IgM IFA positiv farging. Pasientserum ved en 1:8-fortynning viste et positivt fargemønster kort tid etter fullføring av PrEP-vaksineserien. Skalalinjen på bildet representerer 100 μm. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 2: Rabies IgM IFA negativ farging. Pasientens serum ved en 1:2-fortynning viste ingen positiv farging ca. 18 måneder etter fullføring av PrEP-vaksineserien. Skalalinjen på bildet representerer 100 μm. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 3: Rabies IFA-flytskjema. Flytskjema som viser utførelsesstadier av de viktigste trinnene i IFA-prosedyren for å hjelpe til med prosessvisualisering. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
| Pasientutvalg | Igm | IgG |
| PS1-1 | 1:32 | 1:512 |
| PS2-1 | 1:8 | 1:128 |
| PS3-1 | 1:16 | 1:256 |
| PS4-1 | 1:64 | 1:512 |
| PS5-1 | 1:16 | 1:128 |
Tabell 1: Resultater 2 uker etter vaksinasjon. Pasientprøveresultater fra serumprøver samlet ca. 2 uker etter fullført PrEP-vaksineserie.
| Pasientutvalg | Igm | IgG |
| PS1-2 | 1:2 | 1:128 |
| PS2-2 | 1:1 | 1:128 |
| PS3-2 | 1:1 | 1:64 |
| PS4-2 | 1:1 | 1:256 |
| PS5-2 | 1:1 | 1:32 |
Tabell 2: Resultater 6 måneder etter vaksinasjon. Pasientprøveresultater fra serumprøver samlet ca. 6 måneder etter fullført PrEP-vaksineserie.
| Pasientutvalg | Igm | IgG |
| PS1-3 | Ikke oppdaget | 1:128 |
| PS2-3 | Ikke oppdaget | 1:128 |
| PS3-3 | Ikke oppdaget | 1:64 |
| PS4-3 | Ikke oppdaget | 1:64 |
| PS5-3 | Ikke oppdaget | 1:32 |
Tabell 3: Resultater 18 måneder etter vaksinasjon. Pasientprøveresultater fra serumprøver samlet ca. 18 måneder etter fullført PrEP-vaksineserie.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
IFA-testen utnytter et antigen-antistoffkompleks, noe som gjør det mulig for et merkingssted å visualisere rabiesspesifikke antistoffer. Neuroblastom- eller BHK-celler blir sådd på flerbrønns PTFE-belagte mikroskopglass og inokulert med rabiesviruslaboratoriestamme CVS-11. Når monolaget er konfluent og cellene når ønsket smittsomhet på ca. 50%, lagres lysbildene til de er klare til bruk6.
Pasientserum eller CSF påføres det infiserte cellemonolaget og inkuberes for å tillate eventuelle rabiesspesifikke antistoffer å feste seg til virusantigenet7. Etter en vaskeprosedyre påføres et fluorescerende merket anti-humant IgG- eller IgM-antistoff og binder seg til ethvert virusbundet antistoff fra prøveapplikasjonen. Merkede antistoffer kan deretter visualiseres under et fluorescerende mikroskop.
Når du forbereder deg på å utføre denne analysen, er det viktig å bestemme den beste forberedelsen av pasientprøver, kontroller og konjugater. De første pasientprøvene ble screenet med lav fortynningsfaktor eller ufortynnet for å teste antistofftilstedeværelse. Parvise prøver eller tidligere screenede prøver som viste et høyt nivå av antistoff ble deretter ytterligere fortynnet til endepunktet. Fortynning av innledende pasientprøver for IgG-testing ble fremstilt i kommersielt tilgjengelig IFA-fortynningsmiddel. IgM-testprøver ble opprinnelig fremstilt i et kommersielt tilgjengelig IgG-blokkerende reagens. Påfølgende seriefortynninger for begge testene ble deretter fremstilt i PBS.
Kontrollene som ble brukt til testing ble hentet fra kjente mottakere av rabies PrEP eller fra personer uten historie med rabiesvaccinering. Alle kontrollprøvene ble testet for antistofftilstedeværelse før bruk. IgG-kontrollen ble oppnådd fra en rabiesvaksinemottaker med en etablert rabiesnøytraliserende antistofftiter bekreftet av FAVN. IgM-positiv kontrollprøve ble tatt fra mottaker av rabiesvaksine ca. 2 uker etter avsluttet vaksinasjon.
Bruken av passende konjugat er et annet viktig aspekt ved å utføre IFA-testen. Konjugatet som brukes for hver test, avhenger av antistoffisotypemålet for den analysen. I dette tilfellet ble kommersielt tilgjengelige FITC-merkede anti-humane IgG- og anti-humane IgM-antistoffer benyttet. Fungerende antistoffkonjugatfortynninger ble bestemt før testing basert på produsentens anbefaling.
Det er flere viktige trinn i prosedyren som vil sikre vellykket gjennomføring av IFA-testen, kanskje det viktigste er antigen lysbildepreparering. Å nå omtrent 50% smittsomhet gir rikelig bindingssted for tilgjengelige antistoffer, samtidig som det skaper klarhet når du leser og graderer prøver. De rabies-negative cellene skaper en kontrasterende bakgrunn for å visualisere merkede antistoffer bedre. Ikke-spesifikk farging kan også utgjøre et problem når du utfører fluorescerende farging ved hjelp av komplekse prøvematriser, for eksempel serum. Bruk av IgG-inaktiveringsreagenser (f.eks. Gullsorb) bidrar til å kutte ned på uspesifikk farging på grunn av forstyrrende IgG-antistoffer ved vurdering av tilstedeværelsen av IgM8. Riktig forberedelse av materialer og inkorporering av spesielle reagenser i prosedyren bidrar til å redusere problematisk farging samtidig som resultatene av høy kvalitet opprettholdes.
En rekke testmetoder er utviklet som fokuserer på rabiesantistoffdeteksjon, kvantifisering og identifikasjon. Hver av disse testene gir resultater som kan brukes på ulike måter, avhengig av informasjonen som søkes. Rabies IFA-testing er et kraftig verktøy for å identifisere virusspesifikke antistoffisotyper, og resultatene kan være klare på relativt kort tid sammenlignet med andre testmetoder, for eksempel RFFIT- og FAVN-testene.
Selv om IFA-testen kan oppdage rabiesantistoffer i en prøve, gir den ikke en standardisert kvantifisering av antistoffene. IFA-testen gir en serumfortynningsfaktor der antistoffdeteksjon ender. Til sammenligning kvantifiserer RFFIT- og FAVN-testene nøytraliseringsegenskapene til antistoffer i en prøve, noe som resulterer i en titer av internasjonale enheter (IE), noe som gir et mer detaljert og standardisert resultat. Resultater fra en FAVN- eller RFFIT-test viser tilstedeværelsen av nøytraliserende antistoffer, som har blitt bestemt til å være IgG-antistoffer9. IgMs rolle i nøytraliserende aktivitet forstås å være begrenset på grunn av dens struktur10. Derfor oppdager disse testene ikke spesifikt tilstedeværelsen av IgM.
Typen av test og dens resultat kan være noe problematisk når du bruker dem på et bestemt problem. Konseptet med et beskyttende nivå av antistoffbeskyttelse mot rabiesvirusinfeksjon brukes ikke lenger til å evaluere immunresponsen mot rabiesvaccinasjon. Tidligere ble en beskyttende respons definert som ≥0,5 IE. Imidlertid refererer nåværende publikasjoner vanligvis til antistoffresponsen etter immunisering som akseptabel (≥0,5 IE) eller uakseptabel (<0,5 IE). Som nevnt gir IFA-testen ikke en antistofftiter i IE og bør ikke brukes til å utlede et beskyttelsesnivå mot rabies. Bruk av IFA-testen mens du evaluerer en pasient som har utviklet rabies, kan ikke alltid resultere i en positiv antistofftilstedeværelse på grunn av variasjoner i immunrespons gjennom hele sykdommen. På grunn av den nær 100% dødeligheten av en rabiesinfeksjon, er det viktig å vurdere testen og hvor mye informasjon som trygt kan utledes av disse resultatene.11. Av disse grunner er det alltid best å evaluere alle rabies antistoff testmetoder og bestemme hvilke som fungerer best i et gitt scenario.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ingenting å avsløre.
Acknowledgments
Vi er takknemlige for New York State Department of Health Wadsworth Center for å støtte dette prosjektet.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 25x55mm glass cover slips | Any | ||
| Acetone | Any | ||
| Anti-Human IgG Labeled Conjugate | Sigma-Aldrich | F9512 | |
| Anti-Human IgM Labeled Conjugate | SeraCare | 5230-0286 | |
| Aspirating pipette tip | Any | ||
| BHK-21 Cells | ATCC | CCL-10 | |
| BION IFA Diluent | MBL BION | DIL-9993 | |
| Cell Culture water | Sigma-Aldrich | W3500 | EGM |
| Coplin Jars | Any | ||
| Fetal Bovine Serum | Sigma-Aldrich | F2442 | EGM |
| Fluorescent microscope with FITC filter | Any | ||
| Glycerol | Sigma-Aldrich | G7893 | Mountant |
| Gullsorb IgM inactivation reagent | Fisher Scientific | 23-043-158 | IgG Inactivation Reagent |
| L-Glutamine | Sigma-Aldrich | G-7513 | EGM |
| Minimum Essential Media Eagle – w/Earle’s salts, L-glutamine, and non-essential amino acids, w/o sodium bicarbonate | Sigma-Aldrich | M0643 | EGM |
| Mouse Neuroblastoma Cells | ATCC | CCL-131 | |
| Multi-well PTFE coating glass slides | Any | ||
| PBS | Any | pH 7.6 | |
| Penicillin | Sigma | P-3032 | EGM |
| Rabies Direct Fluorescent Antibody Conjugate | Millipore Sigma | 5100, 5500, 6500, RU5100, or RU5500 | |
| Sodium bicarbonate | Sigma-Aldrich | S-5761 | EGM |
| Sodium Chloride crystals | Sigma-Aldrich | S5886 | Mountant |
| Sterile dropper | Any | ||
| Streptomycin sulfate salt | Sigma | S9137 | EGM |
| Trizma pre-set crystals pH 9.0 | Sigma-Aldrich | S9693 | Mountant |
| Tryptose Phosphate Broth | BD | 260300 | EGM |
| Vitamin mix | Sigma-Aldrich | M6895 | EGM |
References
- Rupprecht, C. E., Fooks, A. R., Abela-Ridder, B. Laboratory Techniques in Rabies. Volume 1. World Health Organization. , Geneva. 232-245 (2018).
- Moore, S. M. Challenges of rabies serology: defining context of interpretation. Viruses. 13 (8), 1516 (2021).
- Zajac, M. D. Development and evaluation of a rabies enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) targeting IgM and IgG in human sera. Viruses. , 40-49 (2019).
- Mills, D. J., Lau, C. L., Mills, C., Furuya-Kanamori, L. Long-term persistence of antibodies and boostability after rabies intradermal pre-exposure prophylaxis. Journal of Travel Medicine. 29 (2), (2022).
- Ramakrishnan, M. A. Determination of 50% endpoint titer using a simple formula. World Journal of Virology. 5 (2), 85-86 (2016).
- Rudd, R. J., Appler, K. A., Wong, S. J. Presence of cross-reactions with other viral encephalitides in the indirect fluorescent-antibody test for diagnosis of rabies. Journal of Clinical Microbiology. 51 (12), 4079-4082 (2013).
- Fooks, A. R., Jackson, A. C. Rabies: scientific basis of the disease and its management. , Academic Press. (2020).
- Paldanius, M., Bloigu, A., Leinonen, M., Saikku, P. Measurement of Chlamydia pneumoniae-specific immunoglobulin A (IgA) antibodies by the microimmunofluorescence (MIF) method: comparison of seven fluorescein-labeled anti-human IgA conjugates in an in-house MIF test using one commercial MIF and one enzyme immunoassay kit. Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. 10 (1), 8-12 (2003).
- Rodriguez, M. C., Fontana, D., Garay, E., Prieto, C. Detection and quantification of anti-rabies glycoprotein antibodies: current state and perspectives. Applied Microbiology and Biotechnology. 105 (18), 6547-6557 (2021).
- Katz, I. S. S., Guedes, F., Fernandes, E. R., Dos Ramos Silva, S. Immunological aspects of rabies: a literature review. Archives of Virology. 162 (1), 3251-3268 (2017).
- Moore, S. M., Hanlon, C. A. Rabies-specific antibodies: measuring surrogates of protection against a fatal disease. PLoS Neglected Tropical Diseases. 4 (3), 595 (2010).
