Summary
इंट्राडर्मल माइक्रोडायलिसिस एक न्यूनतम इनवेसिव तकनीक है जिसका उपयोग स्वास्थ्य और बीमारी में माइक्रोवास्कुलर फ़ंक्शन की जांच के लिए किया जाता है। त्वचीय परिसंचरण में वासोडिलेशन और वाहिकासंकीर्णन के तंत्र का पता लगाने के लिए इस तकनीक के लिए खुराक-प्रतिक्रिया और स्थानीय हीटिंग प्रोटोकॉल दोनों का उपयोग किया जा सकता है।
Abstract
त्वचीय वास्कुलचर एक सुलभ ऊतक है जिसका उपयोग मनुष्यों में माइक्रोवैस्कुलर फ़ंक्शन का आकलन करने के लिए किया जा सकता है। इंट्राडर्मल माइक्रोडायलिसिस एक न्यूनतम इनवेसिव तकनीक है जिसका उपयोग त्वचीय परिसंचरण में संवहनी चिकनी मांसपेशियों और एंडोथेलियल फ़ंक्शन के तंत्र की जांच के लिए किया जाता है। यह तकनीक माइक्रोवैस्कुलर एंडोथेलियल डिसफंक्शन के पैथोफिज़ियोलॉजी के औषधीय विच्छेदन के लिए अनुमति देती है, जैसा कि नाइट्रिक ऑक्साइड-मध्यस्थता वासोडिलेशन में कमी से अनुक्रमित होता है, जो हृदय रोग के विकास के जोखिम का एक संकेतक है। इस तकनीक में, त्वचा की त्वचीय परत में एक माइक्रोडायलिसिस जांच की जाती है, और लाल रक्त कोशिका प्रवाह को मापने के लिए लेजर डॉपलर फ्लोमेट्री जांच के साथ एक स्थानीय हीटिंग यूनिट को जांच के ऊपर रखा जाता है। स्थानीय त्वचा के तापमान को सीधे गर्मी आवेदन के साथ क्लैंप या उत्तेजित किया जाता है, और औषधीय एजेंटों को वासोडिलेशन या वाहिकासंकीर्णन को प्रेरित करने या ब्याज के तंत्र (सह-कारकों, एंटीऑक्सिडेंट, आदि) से पूछताछ करने के लिए इंट्रासेल्युलर सिग्नलिंग मार्गों को उत्तेजित या बाधित करने के लिए जांच के माध्यम से छिद्रित किया जाता है। त्वचीय संवहनी चालकता की मात्रा निर्धारित की जाती है, और रोग राज्यों में एंडोथेलियल डिसफंक्शन के तंत्र को चित्रित किया जा सकता है।
Introduction
हृदय रोग (सीवीडी) संयुक्त राज्य अमेरिका में मौत का प्रमुख कारण है1. उच्च रक्तचाप (एचटीएन) स्ट्रोक, कोरोनरी हृदय रोग और दिल की विफलता के लिए एक स्वतंत्र जोखिम कारक है और संयुक्त राज्य अमेरिका की आबादीके ~ 50% से ऊपर को प्रभावित करने का अनुमान है। एचटीएन एक स्वतंत्र सीवीडी (प्राथमिक एचटीएन) के रूप में या किसी अन्य स्थिति के परिणामस्वरूप विकसित हो सकता है, जैसे पॉलीसिस्टिक किडनी रोग और / या अंतःस्रावी विकार (माध्यमिक एचटीएन)। एचटीएन के एटियलजि की चौड़ाई एचटीएन के साथ देखी गई अंतर्निहित तंत्र और अंत-अंग क्षति की जांच को जटिल बनाती है। एचटीएन से जुड़े अंत-अंग क्षति के पैथोफिज़ियोलॉजी में विविध और उपन्यास अनुसंधान दृष्टिकोण की आवश्यकता है।
सीवीडी के शुरुआती रोग संबंधी संकेतों में से एक एंडोथेलियल डिसफंक्शन है, जैसा कि बिगड़ा हुआ नाइट्रिक ऑक्साइड (एनओ) -मध्यस्थता वासोडिलेशन 3,4,5 द्वारा विशेषता है। प्रवाह-मध्यस्थता फैलाव एक आम दृष्टिकोण है जिसका उपयोग सीवीडी से जुड़े एंडोथेलियल डिसफंक्शन को निर्धारित करने के लिए किया जाता है, लेकिन माइक्रोवैस्कुलर बेड में एंडोथेलियल डिसफंक्शन बड़े नाली धमनियों 6,7,8 से स्वतंत्र और पूर्ववर्ती दोनों हो सकता है। इसके अलावा, प्रतिरोध धमनी नाली धमनियों की तुलना में स्थानीय ऊतक द्वारा अधिक सीधे कार्य करती है और ऑक्सीजन युक्त रक्त के वितरण पर अधिक तत्काल नियंत्रण होता है। माइक्रोवास्कुलर फ़ंक्शन प्रतिकूल हृदय घटना मुक्त अस्तित्व 9,10,11 का अनुमान है। त्वचीय माइक्रोवैस्कुलचर एक सुलभ संवहनी बिस्तर है जिसका उपयोग शारीरिक और औषधीय वाहिकासंकीर्णक या वासोडायलेटरी उत्तेजनाओं की प्रतिक्रियाओं की जांच करने के लिए किया जा सकता है। इंट्राडर्मल माइक्रोडायलिसिस एक न्यूनतम इनवेसिव तकनीक है, जिसका लक्ष्य लक्षित औषधीय विच्छेदन के साथ त्वचीय माइक्रोवैस्कुलचर में संवहनी चिकनी मांसपेशियों और एंडोथेलियल फ़ंक्शन दोनों के तंत्र की जांच करना है। यह विधि अन्य तकनीकों के विपरीत है, जैसे कि पोस्ट-ओक्लूसिव प्रतिक्रियाशील हाइपरमिया, जो औषधीय विच्छेदन और योणोगिनेसिस के लिए अनुमति नहीं देता है, जो औषधीय वितरण के लिए अनुमति देता है, लेकिन इसकी कार्रवाई के तंत्र में कम सटीक है (12 जगहों पर अच्छी तरह से समीक्षा की गई)।
विकास और इस तकनीक के उपयोग के पीछे तर्क बड़े पैमाने पर13 कहीं और समीक्षा की है. यह दृष्टिकोण मूल रूप से कृन्तकों में न्यूरोलॉजिकल अनुसंधान में उपयोग के लिए विकसित किया गया था और फिर पहली बार थर्मोरेगुलेटरी दृष्टिकोण से सक्रिय वासोडिलेशन अंतर्निहित तंत्र की जांच करने के लिए मनुष्यों पर लागू किया गया था। 1990 के दशक के उत्तरार्ध में, इस पद्धति का उपयोग त्वचा के स्थानीय हीटिंग के संबंध में तंत्रिका और एंडोथेलियल तंत्र दोनों की जांच करने के लिए किया गया था। उस समय से, तकनीक का उपयोग त्वचा में कई न्यूरोवास्कुलर सिग्नलिंग तंत्र की जांच के लिए किया गया है।
इस तकनीक का उपयोग करते हुए, हमारे समूह और अन्य लोगों ने कई नैदानिक आबादी के माइक्रोवैस्कुलचर में एंडोथेलियल डिसफंक्शन के तंत्र से पूछताछ की है, जिसमें डिस्लिपिडेमिया, प्राथमिक उम्र बढ़ने, मधुमेह, क्रोनिक किडनी रोग, पॉलीसिस्टिक अंडाशय सिंड्रोम, प्रीक्लेम्पसिया, प्रमुख अवसादग्रस्तता विकार 14,15,16,17,18,19, और उच्च रक्तचाप 20,21 शामिल हैं ,22,23,24. उदाहरण के लिए, पिछले एक अध्ययन में पाया गया कि प्रीक्लेम्पसिया के इतिहास वाली नॉर्मोटेंसिव महिलाएं, जो सीवीडी के लिए बढ़ते जोखिम में हैं, ने नॉर्मोटेंसिव गर्भावस्था20 के इतिहास वाली महिलाओं की तुलना में त्वचीय परिसंचरण में नो-मध्यस्थता वासोडिलेशन को कम कर दिया था। एक अन्य अध्ययन में, प्राथमिक एचटीएन के साथ का निदान वयस्कों स्वस्थ नियंत्रण21 के साथ तुलना में microvasculature में वृद्धि हुई एंजियोटेंसिन द्वितीय संवेदनशीलता का प्रदर्शन किया, और क्रोनिक सल्फहाइड्रील-दान एंटीहाइपरटेंसिव फार्माकोथेरेपी प्राथमिक एचटीएन रोगियों में रक्तचाप को कम करने और हाइड्रोजन सल्फाइड दोनों में सुधार करने के लिए दिखाया गया है- और नहीं मध्यस्थता वासोडिलेशन22. वोंग एट अल.23 ने प्रीहाइपरटेंसिव वयस्कों में बिगड़ा हुआ संवेदी-मध्यस्थता और नहीं-मध्यस्थता वासोडिलेशन पाया, जो एचटीएन चरणों को बढ़ाने के साथ एंडोथेलियल डिसफंक्शन की प्रगति की हमारी खोज के साथ मेल खाता है, जैसा कि 2017 अमेरिकन हार्ट एसोसिएशन और अमेरिकन कॉलेज ऑफ कार्डियोलॉजी दिशानिर्देशों24 द्वारा वर्गीकृत किया गया है।
इंट्राडर्मल माइक्रोडायलिसिस तकनीक स्वास्थ्य और रोग राज्यों में माइक्रोवास्कुलर फ़ंक्शन में कसकर नियंत्रित यंत्रवत जांच की अनुमति देती है। इसलिए, इस पत्र का उद्देश्य हमारे समूह और अन्य लोगों द्वारा लागू इंट्राडर्मल माइक्रोडायलिसिस तकनीक का वर्णन करना है। हम एसिटाइलकोलाइन (एसीएच) के साथ एंडोथेलियम के औषधीय उत्तेजना दोनों के लिए प्रक्रियाओं का विस्तार करते हैं ताकि खुराक-प्रतिक्रिया संबंध और 39 डिग्री सेल्सियस या 42 डिग्री सेल्सियस स्थानीय हीटिंग उत्तेजना प्रोटोकॉल के साथ अंतर्जात कोई उत्पादन की शारीरिक उत्तेजना की जांच की जा सके। हम प्रत्येक दृष्टिकोण के लिए प्रतिनिधि परिणाम प्रस्तुत करते हैं और इस तकनीक से उत्पन्न होने वाले निष्कर्षों के नैदानिक निहितार्थों पर चर्चा करते हैं।
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Protocol
प्रतिभागी भर्ती से पहले पेंसिल्वेनिया स्टेट यूनिवर्सिटी के संस्थागत समीक्षा बोर्ड द्वारा सभी प्रक्रियाओं को मंजूरी दी जाती है।
1. उपकरण सेटअप
- स्थानीय हीटिंग यूनिट और लेजर डॉपलर फ्लोमीटर चालू करें।
नोट: निर्माता के निर्देशों के अनुसार डेटा संग्रह से पहले दोनों को कैलिब्रेट किया जाना चाहिए। लेजर डॉपलर फ्लोमीटर को डेटा अधिग्रहण हार्डवेयर से जोड़ा जाना चाहिए, जिसमें 100 हर्ट्ज (100 नमूने/मिनट) पर नमूनाकरण और डेटा अधिग्रहण सॉफ्टवेयर में निरंतर रिकॉर्डिंग हो। जबकि अन्य डेटा अधिग्रहण हार्डवेयर और सॉफ़्टवेयर का उपयोग सरलता के लिए किया जा सकता है, शेष निर्देश PowerLab हार्डवेयर और LabChart सॉफ़्टवेयर क्षमताओं को दर्शाते हैं। - एक लैबचार्ट सॉफ्टवेयर फ़ाइल खोलें।
नोट: वांछित डेटा इनपुट और निरंतर डेटा संग्रह क्षमताओं के साथ एक संदर्भ फ़ाइल अग्रिम में बनाई जानी चाहिए। प्रत्येक लेजर डॉपलर और स्थानीय हीटर के लिए एक पैनल होना चाहिए जो प्रत्येक माइक्रोडायलिसिस साइट से मेल खाता है, और पैनलों को डेटा अधिग्रहण हार्डवेयर इकाई में उपयुक्त चैनल इनपुट के अनुरूप होना चाहिए।
2. माइक्रोडायलिसिस फाइबर प्लेसमेंट
- प्रकोष्ठ के उदर पहलू में त्वचा की बड़ी, दृश्यमान रक्त वाहिकाओं को पहचानें, और उन्हें एक स्थायी मार्कर के साथ इंगित करें (यदि आवश्यक हो तो जहाजों की कल्पना करने के लिए एक टूर्निकेट का उपयोग करें; गहरे रंग की त्वचा में जहाजों की पहचान करने के लिए पैल्पेशन पर अधिक निर्भरता की आवश्यकता हो सकती है)।
- बीटाडाइन स्वैब का उपयोग करके निशान और आसपास के क्षेत्र के एक उदार हिस्से को शामिल करने वाले क्षेत्र को स्वाब करें। अल्कोहल स्वैब के साथ बीटाडाइन को मिटा दें। एक बाँझ कपड़ा के साथ त्वचा के निष्फल क्षेत्र को कवर, और ~ 5 मिनट के लिए बर्फ लागू करने के लिए क्षेत्र सुन्न.
- बर्फ निकालें, और एक परिचयकर्ता सुई (23 ग्राम, 25 मिमी लंबाई), ऊपर की ओर सामना करना पड़ बेवल, 2-3 मिमी की गहराई पर त्वचा की त्वचीय परत में (व्यक्तिगत त्वचा मोटाई के आधार पर) डालें. सुई अग्रिम, त्वचीय परत में रहने के लिए सावधान किया जा रहा है, और त्वचा ~ सम्मिलन के बिंदु से 20 मिमी से बाहर निकलें.
नोट: त्वचा में प्लेसमेंट की उचित गहराई की पुष्टि करने के लिए, सुई का आकार दिखाई देना चाहिए और आसानी से स्पष्ट होना चाहिए, लेकिन सुई का रंग छुपाया जाना चाहिए। यदि प्रयोग के लिए एक से अधिक माइक्रोडायलिसिस जांच की आवश्यकता होती है, तो किसी भी दो परिचयकर्ता सुइयों को ≥2.5 सेमी अलग रखा जाना चाहिए और माइक्रोडायलिसिस जांच सम्मिलन से पहले तैनात किया जाना चाहिए। जांच को एक ही प्रमुख पोत के साथ नहीं रखा जाना चाहिए। - सुई को जगह में छोड़कर, जांच (ल्यूर लॉक के माध्यम से ) को लैक्टेटेड रिंगर के समाधान वाले सिरिंज से कनेक्ट करें। परिचयकर्ता सुई के माध्यम से जांच के विपरीत छोर को तब तक खिलाएं जब तक कि जांच की अर्धवृत्ताकार झिल्ली निकट न हो लेकिन फिर भी परिचयकर्ता सुई के उद्घाटन के बाहर हो। धीरे-धीरे फाइबर के माध्यम से रिंगर के समाधान की एक छोटी राशि को छिड़कें जब तक कि झिल्ली की अखंडता की पुष्टि करने के लिए झिल्ली के छिद्रों के माध्यम से समाधान स्पष्ट रूप से सुगंधित न हो जाए।
- यदि हार्वर्ड बायोसाइंस माइक्रोडायलिसिस जांच और परिचयकर्ता सुई का उपयोग कर रहे हैं, तो चरणों का पालन करें 2.5.1-2.5.2.
- जांच समारोह की पुष्टि पर, आगे परिचयकर्ता सुई के माध्यम से जांच फ़ीड जब तक झिल्ली पूरी तरह से परिचयकर्ता सुई के भीतर त्वचा की त्वचीय परत में निहित है.
- एक उंगली का उपयोग करके, सुई के समीपस्थ जगह में जांच को सुरक्षित करें, और सम्मिलन से विपरीत दिशा में सुई को वापस ले लें। प्रयोग के दौरान semipermeable झिल्ली के विस्थापन को रोकने के लिए त्वचा पर जगह में फाइबर के बाहरी भाग टेप.
- यदि बायोएनालिटिकल सिस्टम माइक्रोडायलिसिस जांच और परिचयकर्ता सुई का उपयोग कर रहे हैं, तो चरणों का पालन करें 2.6.1-2.6.2.
- जांच समारोह की पुष्टि पर, एक हाथ में परिचयकर्ता सुई और माइक्रोडायलिसिस जांच के बाहर का हिस्सा के हब को पकड़ो, और साथ ही सम्मिलन की दिशा के विपरीत सुई को वापस ले लो, जगह में माइक्रोडायलिसिस जांच चलती है।
- यह सुनिश्चित करने के लिए आवश्यकतानुसार जांच को समायोजित करें कि अर्धवृत्ताकार झिल्ली पूरी तरह से त्वचा में दफन है। प्रयोग के दौरान semipermeable झिल्ली के विस्थापन को रोकने के लिए त्वचा पर जगह में बाहरी फाइबर टेप.
3. हाइपरमिया
- कम करने के लिए सुई प्रविष्टि के लिए hyperemic प्रतिक्रिया के लिए इंतजार कर रहे हैं (~ 60-90 मिनट), microinfusion पंप पर सिरिंज धारक ट्रे में एकल उपयोग सिरिंज जगह. हाइपरमिया चरण के दौरान परफ्यूज लैक्टेटेड रिंगर का समाधान, खारा, या वाहन समाधान (वह समाधान जिसमें प्रयोगात्मक औषधीय एजेंट भंग हो जाता है; 2 μL/min)।
नोट: जबकि माइक्रोडायलिसिस जांच को इस ~ 60-90 मिनट के चरण के दौरान हटाया नहीं जा सकता है, प्रतिभागी अपने शरीर की स्थिति को समायोजित कर सकते हैं या अपना हाथ स्थानांतरित कर सकते हैं, या जांच के लुएर लॉक को सिरिंज से हटाया जा सकता है और प्रतिभागी की बांह को टेप के साथ सुरक्षित किया जा सकता है ताकि उन्हें संक्षेप में खड़े होने के लिए गति की मुक्त सीमा की अनुमति मिल सके। एक बार स्थानीय हीटर और लेजर डॉपलर फ्लोमेट्री (एलडीएफ) जांच के साथ साधन और एक बार डेटा संग्रह शुरू हो जाने के बाद, एलडीएफ जांच को स्थानांतरित नहीं किया जा सकता है। - जब त्वचा की लालिमा, जो सुई आघात के लिए हाइपरमिक प्रतिक्रिया का एक संकेतक है, कम हो गया है, तो जांच चिपकने वाली डिस्क के माध्यम से अर्धवृत्ताकार झिल्ली को कवर करने वाली त्वचा के लिए स्थानीय हीटिंग यूनिट संलग्न करें, यह सुनिश्चित करते हुए कि हीटर का केंद्र माइक्रोडायलिसिस जांच के मार्ग के साथ संरेखित होता है।
- एलडीएफ जांच को स्थानीय हीटर के केंद्र में उद्घाटन में रखें ताकि लेजर सीधे त्वचा की सतह के लंबवत हो। एक बार एलडीएफ जांच रखी और सुरक्षित कर रहे हैं, लगातार रिकॉर्ड और लाल रक्त कोशिका प्रवाह मूल्यों (आरबीसी प्रवाह; छिड़काव इकाइयों, पीयू) प्रदर्शित करने के लिए डेटा अधिग्रहण सॉफ्टवेयर पर शुरू पर क्लिक करें. यदि हाइपरमिया पूरी तरह से कम हो गया है, तो आरबीसी प्रवाह ~ 5-20 पु पर स्थिर होगा (एलडीएफ जांच के नीचे जहाजों की स्पंदनशीलता पु में मामूली ऊंचाई से परिलक्षित हो सकती है जो दिल की धड़कन के साथ मेल खाती है)।
- किसी ऐसे विषय की बांह पर एक स्वचालित रक्तचाप कफ रखें जिसे साधन नहीं बनाया गया है।
- थर्मोन्यूट्रल रेंज25 के भीतर त्वचा के तापमान को क्लैंप करने के लिए स्थानीय हीटर को 33 डिग्री सेल्सियस पर सेट करें, इस प्रकार थर्मल उत्तेजनाओं के प्रभाव में किसी भी बदलाव को हटा दें। प्रयोग में घटनाओं को दर्शाने के लिए डेटा अधिग्रहण सॉफ़्टवेयर में निरंतर रिकॉर्डिंग में एक टिप्पणी जोड़ने के लिए, स्क्रीन के ऊपरी-दाएँ कोने में टेक्स्ट बॉक्स पर क्लिक करें, एक टिप्पणी टाइप करें, चुनें कि किन चैनलों को टिप्पणी प्राप्त करनी चाहिए, और ऐड पर क्लिक करें।
4. Acetylcholine खुराक-प्रतिक्रिया प्रोटोकॉल
- एक बार आरबीसी प्रवाह 33 डिग्री सेल्सियस स्थानीय गर्मी के जवाब में स्थिर हो गया है, आधारभूत डेटा संग्रह शुरू, एक टिप्पणी शुरू आधार रेखा द्वारा डेटा अधिग्रहण सॉफ्टवेयर फ़ाइल में प्रतिष्ठित. डेटा विश्लेषण के लिए कम से कम 5-10 मिनट की स्थिर आधार रेखा की आवश्यकता होती है; यदि आवश्यक हो तो डेटा संग्रह में इस बिंदु के दौरान किसी भी समय आधार रेखा को पुनरारंभ करें, और इसे लैबचार्ट फ़ाइल में चिह्नित करें। आधार रेखा के अंतिम मिनट में, एक रक्तचाप माप इकट्ठा, और LabChart फ़ाइल में एक टिप्पणी में मान दर्ज करें.
- आधारभूत डेटा संग्रह के 5-10 मिनट के अंत में, मापें और आधारभूत रक्तचाप रिकॉर्ड करें, और डेटा अधिग्रहण सॉफ्टवेयर में टिप्पणी अंत आधार रेखा दर्ज करें।
- माइक्रोइन्फ्यूजन पंप बंद करें, और एसीएच (10−10 एम) की सबसे कम एकाग्रता से भरे सिरिंज के लिए लैक्टेटेड रिंगर के समाधान से भरे सीरिंज का आदान-प्रदान करें।
- जगह में नई सीरिंज सुरक्षित, और फिर से microinfusion पंप मोड़ से पहले जांच के अंत के माध्यम से तरल पदार्थ के छिड़काव की पुष्टि. डेटा अधिग्रहण सॉफ्टवेयर रिकॉर्डिंग में टिप्पणी शुरू -10 दर्ज करें।
- ACh की प्रत्येक एकाग्रता 2 μL/मिनट पर 5-10 मिनट के लिए perfused किया जाएगा. छिड़काव के अंतिम मिनट में, हर एकाग्रता के लिए, रक्तचाप को मापें और रिकॉर्ड करें। एक बार किसी दिए गए एकाग्रता के लिए छिड़काव समय समाप्त हो गया है, अगले उच्चतम एकाग्रता (जैसे, 10−10 एम ACh समाधान 10−9 एम ACh समाधान के लिए आदान-प्रदान किया जाता है) के साथ सिरिंज की जगह, के रूप में 4.2-4.4 चरणों में वर्णित है.
- ACh (10−1 M) की अंतिम सांद्रता को छिद्रित करने के तुरंत बाद, ACh सिरिंज को रिंगर के घोल वाले एक से बदलें, और स्थानीय हीटर तापमान को 43 °C तक बढ़ाएं। एक बार आरबीसी प्रवाह स्थिर हो जाने के बाद, रिंगर के समाधान को सोडियम नाइट्रोप्रुसाइड (28 मिमी) के साथ बदलें ताकि गर्मी से प्रेरित और औषधीय रूप से प्रेरित अधिकतम स्थानीय वासोडिलेशन दोनों का उत्पादन किया जा सके। उपाय और इस अधिकतम वासोडिलेशन चरण के दौरान हर ~ 3 मिनट रक्तचाप रिकॉर्ड.
- एक बार एक अधिकतम आरबीसी प्रवाह पठार (~ 5 मिनट स्थिर पु) हुआ है, प्रयोग समाप्त. निरंतर डेटा संग्रह को समाप्त करने के लिए डेटा अधिग्रहण सॉफ़्टवेयर के निचले-दाएं कोने में स्टॉप का चयन करें।
5. स्थानीय हीटिंग प्रोटोकॉल
- एक बार आरबीसी प्रवाह हाइपरमिया के बाद स्थिर हो गया है, आधारभूत डेटा संग्रह शुरू करें, और एक टिप्पणी के साथ डेटा अधिग्रहण सॉफ्टवेयर फ़ाइल में यह इंगित करें। आधार रेखा के अंतिम मिनट में, एक रक्तचाप माप इकट्ठा, और डेटा अधिग्रहण सॉफ्टवेयर फ़ाइल में एक टिप्पणी में मूल्यों दर्ज करें.
- प्रोटोकॉल की जरूरतों के आधार पर स्थानीय हीटर को 39 डिग्री सेल्सियस या 42 डिग्री सेल्सियस तक बढ़ाएं (चर्चा अनुभाग में समझाया गया है)।
- एक बार आरबीसी प्रवाह स्थानीय गर्मी आवेदन (~ 40-60 मिनट हीटिंग) के जवाब में पठार गया है, माइक्रोडायलिसिस जांच (ओं) के माध्यम से एन जी-नाइट्रो-एल-आर्जिनिन मिथाइल एस्टर (एल-नाम; रिंगर के समाधान में भंग 15 मिमी; 2 माइक्रोन / मिनट; एक कोई सिंथेज़ अवरोधक)।
- एक बार आरबीसी प्रवाह एल नाम (छिड़काव के ~ 15-25 मिनट) के जवाब में पठार है, 43 डिग्री सेल्सियस के लिए स्थानीय हीटर में वृद्धि.
- एक बार आरबीसी प्रवाह 43 डिग्री सेल्सियस (एक ~ 2-5 मिनट पठार ~ 20-45 मिनट हीटिंग के बाद होता है) के जवाब में पठार है, माइक्रोडायलिसिस जांच (ओं) के माध्यम से सोडियम नाइट्रोप्रासाइड (रिंगर के समाधान में भंग) छिड़कते हैं।
- एक बार एक अधिकतम आरबीसी प्रवाह पठार (~ 5 मिनट स्थिर पु) हुआ है, प्रयोग समाप्त. डेटा संग्रह को समाप्त करने के लिए डेटा अधिग्रहण सॉफ़्टवेयर के निचले-दाएं कोने में स्टॉप का चयन करें।
6. माइक्रोडायलिसिस जांच को हटाना
- प्रयोग की समाप्ति के बाद, microdialysis जांच में कटौती करने के लिए सर्जिकल कैंची की एक जोड़ी का उपयोग करें. हीटर से एलडीएफ जांच को सावधानी से हटा दें, और त्वचा से हीटर हटा दें। धीरे से त्वचा पर जगह में जांच पकड़े टेप को हटा दें।
- नेत्रहीन पहचानें कि जांच के दोनों ओर किस पंचर साइट ने सबसे छोटा रक्त का थक्का बनाया है। छोटे थक्के के साथ साइट के पास जांच के हिस्से को काटें, त्वचा के बाहर जांच के ~ 1 को बिना काटे छोड़ दें।
- अल्कोहल स्वैब के साथ जांच के प्रवेश और निकास स्थलों के आसपास की त्वचा के हिस्से को साफ करें, साथ ही कम थक्के वाली साइट पर छोड़ी गई जांच की लंबाई में ~ 1।
- शराब को त्वचा पर सूखने दें। फिर, जांच के हिस्से को पंचर साइट से अधिक थक्के के साथ फैलाएं, कम थक्के वाले छोर पर ~ 1 के विपरीत भाग में। धीरे-धीरे जांच को बड़े रक्त के थक्के की ओर खींचें।
- किसी भी रक्तस्राव पर बाँझ धुंध रखें जो जांच हटाने के परिणामस्वरूप होता है, और दबाव लागू करता है।
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Representative Results
Acetylcholine खुराक-प्रतिक्रिया प्रोटोकॉल
चित्रा 1 ए ACh खुराक-प्रतिक्रिया प्रोटोकॉल का विवरण देने वाला एक योजनाबद्ध दर्शाया गया है। चित्रा 1 बी समय के साथ एक विषय के लिए मानकीकृत ACh खुराक-प्रतिक्रिया प्रोटोकॉल से आरबीसी प्रवाह मूल्यों (छिड़काव इकाइयों, पु; 30 एस औसत) के प्रतिनिधि अनुरेखण दिखाता है। चित्रा 1 सी एक एसीएच खुराक-प्रतिक्रिया प्रोटोकॉल की एक कच्ची डेटा फ़ाइल दिखाता है। अतिरिक्त आधारभूत माप कच्चे डेटा फ़ाइल में बनाए रखा गया, लेकिन केवल ~ 10 आधार रेखा के मिनट डेटा विश्लेषण के लिए उपयोग किया गया.
हाइपरमिया संकल्प और 5 मिनट के लिए एक स्थिर आरबीसी प्रवाह के बाद, 10 मिनट आधारभूत डेटा संग्रह शुरू हो सकता है। आधार रेखा को अपेक्षाकृत स्थिर क्षैतिज आरबीसी फ्लक्स लाइन के रूप में दर्शाया गया है, जहां विचलन के लिए कोई कारण (जैसे, आंदोलन कलाकृतियां, जांच समायोजन) विश्लेषण उद्देश्यों के लिए डेटा अधिग्रहण सॉफ्टवेयर टिप्पणियों के रूप में लॉग इन किया जाना चाहिए। खुराक-प्रतिक्रिया प्रोटोकॉल आधारभूत अवधि का अनुसरण करता है, और सीरिंज को प्रत्येक खुराक के साथ 10−10 एम से 10−1 एम एसीएच तक बदला जाना चाहिए। प्रत्येक खुराक के 5-10 मिनट छिड़काव शुरू करने से पहले, एक सुनिश्चित करें कि औषधीय एजेंट पूरी तरह से फाइबर की लंबाई के माध्यम से perfused है चाहिए. डेटा अधिग्रहण सॉफ्टवेयर में, छिड़काव के कारण आरबीसी प्रवाह में प्रारंभिक वृद्धि होगी, लेकिन यह विश्लेषण में शामिल नहीं है, क्योंकि उस एकाग्रता के लिए 5 मिनट का डेटा संग्रह शुरू नहीं हुआ है। एक बार प्रत्येक खुराक के लिए छिड़काव शुरू हो गया है, वहाँ एक चोटी के लिए आरबीसी प्रवाह में एक निरंतर वृद्धि हो जाएगा, एक स्थिर गिरावट के बाद. औषधीय एजेंटों के लिए इस वक्रता प्रतिक्रिया प्रोटोकॉल भर में दोहराया जाएगा, लेकिन आरबीसी प्रवाह ACh की बढ़ती सांद्रता के साथ अपेक्षाकृत अधिक हो जाएगा. ACh की कम सांद्रता के साथ, वक्रता प्रतिक्रिया उतनी प्रमुख नहीं हो सकती है। गैर-इष्टतम आरबीसी प्रवाह के उदाहरणों में निम्नलिखित शामिल हैं: 1) एक गैर-वक्रीय प्रतिक्रिया, जहां आरबीसी प्रवाह नहीं बढ़ता है और पठार रहता है, या 2) आरबीसी प्रवाह पर न्यूनतम प्रभाव डालने वाले एसीएच सांद्रता में वृद्धि, जहां आरबीसी प्रवाह एसीएच की प्रत्येक एकाग्रता के साथ अपेक्षाकृत वृद्धि नहीं करता है। यह शोध प्रश्न और परीक्षण किए जा रहे नैदानिक समूह पर निर्भर है।
ACh की अंतिम एकाग्रता के बाद, लैक्टेटेड रिंगर को सुगंधित किया जाता है, और स्थानीय हीटरों को 43 डिग्री सेल्सियस तक बढ़ाया जाता है। इस चरण के दौरान, सोडियम नाइट्रोप्रासाइड को छिड़कने से पहले एक पठार प्राप्त किया जाना चाहिए। यह ~ 45 मिनट तक लग सकता है, पिछले एजेंटों perfused पर निर्भर करता है. इस चरण को विश्लेषण में शामिल नहीं किया गया है। एक बार पठार 5 मिनट के लिए प्राप्त किया गया है, सोडियम नाइट्रोप्रासाइड अधिकतम स्थानीय वासोडिलेशन का उत्पादन करने के लिए perfused है. इस अधिकतम स्थानीय वासोडिलेशन को आरबीसी प्रवाह में वृद्धि के रूप में दर्शाया गया है, जहां एक पठार ~ 20 मिनट के छिड़काव के बाद प्राप्त होता है, या आरबीसी प्रवाह द्वारा एक चरम तक पहुंचने और तुरंत बाद गिरावट आती है। एक बार सोडियम नाइट्रोप्रासाइड के लिए आरबीसी प्रवाह में पठार या गिरावट प्राप्त हो जाने के बाद, प्रोटोकॉल पूरा हो गया है। गैर-इष्टतम आरबीसी प्रवाह का एक सामान्य उदाहरण आरबीसी प्रवाह का उच्चतम मूल्य है जो अधिकतम स्थानीय वासोडिलेशन के बजाय प्रोटोकॉल के एक अलग चरण (जैसे, खुराक-प्रतिक्रिया प्रोटोकॉल के दौरान) में प्राप्त किया जा रहा है।
Acetylcholine खुराक-प्रतिक्रिया प्रोटोकॉल: नाइट्रिक ऑक्साइड सिंथेज़ निषेध
ACh के जवाब में त्वचीय रक्त प्रवाह में NO के योगदान को निर्धारित करने के लिए, N G-nitro-l-arginine मिथाइल एस्टर (L-NAME), एक NO सिंथेज़ अवरोधक, एक अतिरिक्त फाइबर के माध्यम से ACh के साथ संयोजन में छिद्रित होता है। चित्रा 2 ए एल नाम के साथ ACh खुराक प्रतिक्रिया प्रोटोकॉल का विवरण एक योजनाबद्ध दर्शाया गया है. चित्रा 2 बी एल-नाम के साथ समय के साथ एक विषय के लिए मानकीकृत एसीएच खुराक-प्रतिक्रिया प्रोटोकॉल से आरबीसी प्रवाह (30 एस औसत) के प्रतिनिधि ट्रेसिंग को दिखाता है। चित्रा 2 सी एल नाम के साथ एक ACh खुराक प्रतिक्रिया प्रोटोकॉल की एक कच्चे डेटा फ़ाइल दिखाता है. अतिरिक्त आधारभूत माप कच्चे डेटा फ़ाइल में बनाए रखा गया, लेकिन केवल ~ 10 आधार रेखा के मिनट डेटा विश्लेषण के लिए उपयोग किया गया.
हाइपरमिया रिज़ॉल्यूशन के बाद, 5 मिनट के लिए एक स्थिर आरबीसी फ्लक्स, और ब्याज के एंजाइमेटिक मार्ग को पूरी तरह से अवरुद्ध करने के लिए पर्याप्त समय (जैसे, कोई सिंथेज़ नहीं) और / या सह-कारकों की पर्याप्त सांद्रता प्रदान करने के लिए, बेसलाइन डेटा संग्रह के 10 मिनट शुरू हो सकते हैं (अपेक्षाकृत स्थिर क्षैतिज रेखा के रूप में चित्रित)। खुराक-प्रतिक्रिया प्रोटोकॉल बेसलाइन का अनुसरण करता है, और सीरिंज को 1010 एम से 101 एम एसीएच तक शुरू होने वाली प्रत्येक खुराक के साथ कोई सिंथेज़ अवरोधक (जैसे, 15 एमएम एल-नाम) के साथ बदला जाना चाहिए। NO सिंथेज़ अवरोधक की उपस्थिति में, ACh की उच्च सांद्रता तक वक्रता प्रतिक्रिया को अच्छी तरह से दोहराया नहीं जाता है। एक अपेक्षाकृत कम आरबीसी प्रवाह, बिना सिंथेज़ अवरोध के साइट की तुलना में, देखा जाएगा। गैर-इष्टतम आरबीसी प्रवाह का एक सामान्य उदाहरण कोई सिंथेज़ निषेध नहीं है, जैसा कि कोई सिंथेज़ निषेध के बिना स्थितियों की तुलना में है, जिसके परिणामस्वरूप उच्च आरबीसी प्रवाह होता है। यह इंगित करता है कि प्रोटोकॉल विफल हो गया है।
ACh की अंतिम एकाग्रता के छिड़काव के बाद, लैक्टेटेड रिंगर को सुगंधित किया जाता है, और स्थानीय हीटरों को 43 डिग्री सेल्सियस तक बढ़ाया जाता है। इस चरण के दौरान, सोडियम नाइट्रोप्रासाइड को छिड़कने से पहले एक पठार प्राप्त किया जाना चाहिए। इस चरण को विश्लेषण में शामिल नहीं किया गया है। एक बार पठार 5 मिनट के लिए प्राप्त किया गया है, सोडियम नाइट्रोप्रासाइड perfused है, अधिकतम स्थानीय vasodilation उत्पादन. अधिकतम स्थानीय वासोडिलेशन के दौरान, पिछले NO सिंथेज़ निषेध के कारण RBC प्रवाह में घातीय वृद्धि होगी। छिड़काव के ~ 20 मिनट के बाद एक पठार प्राप्त किया जाएगा, या आरबीसी प्रवाह अपने पूर्ण शिखर तक पहुंच जाएगा और तुरंत बाद गिरावट आएगी। एक बार सोडियम नाइट्रोप्रासाइड के लिए आरबीसी प्रवाह में पठार या गिरावट प्राप्त हो जाने के बाद, प्रोटोकॉल पूरा हो गया है। गैर-इष्टतम आरबीसी प्रवाह का एक सामान्य उदाहरण अधिकतम स्थानीय वासोडिलेशन के बजाय प्रोटोकॉल के एक अलग चरण (जैसे, खुराक-प्रतिक्रिया प्रोटोकॉल के दौरान) में उच्चतम आरबीसी प्रवाह मूल्य प्राप्त कर रहा है।
स्थानीय हीटिंग प्रोटोकॉल
चित्रा 3 ए स्थानीय हीटिंग प्रोटोकॉल का विवरण देने वाला एक योजनाबद्ध दर्शाया गया है। चित्रा 3 बी समय के साथ एक विषय के लिए मानकीकृत स्थानीय हीटिंग प्रोटोकॉल के लिए आरबीसी प्रवाह (30 एस औसत) के प्रतिनिधि अनुरेखण दिखाता है। चित्रा 3 सी एक स्थानीय हीटिंग प्रोटोकॉल की एक कच्ची डेटा फ़ाइल दिखाता है। हाइपरमिया रिज़ॉल्यूशन और 5 मिन के लिए एक स्थिर आरबीसी फ्लक्स के बाद, बेसलाइन डेटा संग्रह के 10 मिनट (अपेक्षाकृत स्थिर क्षैतिज रेखा के रूप में चित्रित) शुरू हो सकते हैं। स्थानीय हीटर या तो 39 डिग्री सेल्सियस या 42 डिग्री सेल्सियस पर सेट हैं, और आरबीसी प्रवाह में एक प्रारंभिक शिखर और नादिर प्रतिक्रिया होगी। स्थानीय गर्मी उत्तेजना के जवाब में त्वचीय रक्त प्रवाह में NO के योगदान को निर्धारित करने के लिए, L-NAME को RBC प्रवाह में एक स्थिर पठार प्राप्त होने के बाद छिड़का जाता है। आरबीसी प्रवाह में तेजी से गिरावट आएगी जब तक कि यह एल-नाम के जवाब में एक नए पठार तक नहीं पहुंच जाता। स्थिर आरबीसी प्रवाह मूल्यों के 5 मिनट के बाद, लैक्टेटेड रिंगर को सुगंधित किया जाता है, और स्थानीय हीटर 43 डिग्री सेल्सियस तक बढ़ जाते हैं। हीटिंग आरबीसी प्रवाह में एक अतिरिक्त शिखर और नादिर प्रतिक्रिया का उत्पादन करेगा। इस चरण के दौरान, किसी को यह सुनिश्चित करना चाहिए कि सोडियम नाइट्रोप्रासाइड के छिद्रित होने से पहले एक पठार प्राप्त किया गया है। इस चरण को विश्लेषण में शामिल नहीं किया गया है। स्थानीय अधिकतम वासोडिलेशन को प्रेरित करने के लिए, सोडियम नाइट्रोप्रुसाइड को सुगंधित किया जाता है, और आरबीसी प्रवाह में तेजी से वृद्धि होगी। एक बार सोडियम नाइट्रोप्रासाइड के जवाब में आरबीसी प्रवाह में पठार या गिरावट देखी गई है, प्रोटोकॉल पूरा हो गया है।
चित्रा 1: एसिटाइलकोलाइन (एसीएच) खुराक-प्रतिक्रिया प्रोटोकॉल। (ए) एक ACh खुराक-प्रतिक्रिया प्रोटोकॉल का योजनाबद्ध। (बी) एक ACh खुराक-प्रतिक्रिया प्रोटोकॉल के प्रतिनिधि अनुरेखण (30 एस औसत)। (सी) एक ACh खुराक-प्रतिक्रिया प्रोटोकॉल का कच्चा डेटा। स्थिरीकरण से पहले उतार-चढ़ाव को प्रदर्शित करने के लिए कच्चे डेटा फ़ाइल में अतिरिक्त आधारभूत माप बनाए रखा जाता है, लेकिन डेटा विश्लेषण के लिए केवल ~ 10 मिनट के स्थिर आराम डेटा का उपयोग किया गया था। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्रा 2: नाइट्रिक ऑक्साइड (एनओ) सिंथेज़ निषेध के साथ एसीएच खुराक-प्रतिक्रिया प्रोटोकॉल। (ए) कोई सिंथेज़ निषेध के साथ एक ACh खुराक-प्रतिक्रिया प्रोटोकॉल का योजनाबद्ध। (बी) कोई सिंथेज़ निषेध के साथ एक ACh खुराक-प्रतिक्रिया प्रोटोकॉल के प्रतिनिधि अनुरेखण। (सी) कोई सिंथेज़ निषेध के साथ एक ACh खुराक-प्रतिक्रिया प्रोटोकॉल का कच्चा डेटा। स्थिरीकरण से पहले उतार-चढ़ाव को प्रदर्शित करने के लिए कच्चे डेटा फ़ाइल में अतिरिक्त आधारभूत माप बनाए रखा जाता है, लेकिन डेटा विश्लेषण के लिए केवल ~ 10 मिनट के स्थिर आराम डेटा का उपयोग किया गया था। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्रा 3: स्थानीय हीटिंग प्रोटोकॉल। (ए) एक स्थानीय हीटिंग प्रोटोकॉल का योजनाबद्ध। (बी) एक स्थानीय हीटिंग प्रोटोकॉल के प्रतिनिधि अनुरेखण। (सी) एक स्थानीय हीटिंग प्रोटोकॉल का कच्चा डेटा। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
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Discussion
इंट्राडर्मल माइक्रोडायलिसिस तकनीक मानव संवहनी अनुसंधान में एक बहुमुखी उपकरण है। जांचकर्ता इसके अनुप्रयोगों में और विविधता लाने के लिए प्रोटोकॉल को बदल सकते हैं। उदाहरण के लिए, हम एक ACh खुराक-प्रतिक्रिया प्रोटोकॉल का वर्णन करते हैं, लेकिन अकेले वासोडिलेशन के बजाय वाहिकासंकीर्णन या वासोमोटर टोन के तंत्र में अन्य जांचों ने नॉरपेनेफ्रिन या सोडियम नाइट्रोप्रासाइड खुराक-प्रतिक्रिया दृष्टिकोण 26,27,28,29,30,31का उपयोग किया है। मेन्थॉल या मेटाक्लोरीन क्लोराइड जैसे वासोडिलेशन के अन्य मध्यस्थों को भी खुराक-प्रतिक्रिया प्रोटोकॉल31,32 में नियोजित किया गया है। संवहनी समारोह के औषधीय मूल्यांकन के रूप में खुराक-प्रतिक्रिया प्रोटोकॉल स्थानीय हीटिंग प्रोटोकॉल की तुलना में विशिष्ट सिग्नलिंग तंत्र को अलग करने के लिए एक अधिक लक्षित, यंत्रवत तकनीक है, क्योंकि यह थर्मल उत्तेजनाओं के प्रति सहानुभूति प्रतिक्रिया में भिन्नता को हटा देता है। हालांकि, स्थानीय हीटिंग एक लागत प्रभावी दृष्टिकोण है जो न्यूरोजेनिक और एंडोथेलियम-निर्भर तंत्र दोनों के माध्यम से वासोडिलेशन को प्रेरित करने के लिए एक शारीरिक उत्तेजना का उपयोग करता है। 39 डिग्री सेल्सियस या 42 डिग्री सेल्सियस स्थानीय हीटिंग प्रोटोकॉल के बीच चयन करते समय ब्याज के तंत्र पर विचार करना भी महत्वपूर्ण है। 39 डिग्री सेल्सियस प्रोटोकॉल बेहतर नहीं मध्यस्थता वासोडिलेशन अलग करने के लिए सुझाव दिया गया है, जबकि 42 डिग्री सेल्सियस प्रोटोकॉल नहीं मध्यस्थता वासोडिलेशन और endothelial व्युत्पन्न hyperpolarizing कारक-मध्यस्थता वाहिकाप्रसरण33,34 दोनों की जांच के लिए अनुमति देता है. इसके अतिरिक्त, 42 डिग्री सेल्सियस स्थानीय हीटिंग के जवाब में सीवीसी वृद्धि अधिक मजबूत होती है (यानी, उच्च% सीवीसीअधिकतम34 तक पहुंचना)। हालांकि, एक विशिष्ट सिग्नलिंग मार्ग से पूछताछ करने के लिए एक नए एजेंट का उपयोग करते समय, सह-कारकों की प्रभावकारिता (यानी, पूरी तरह से ब्लॉक) और / या संतृप्त सांद्रता का मूल्यांकन करने के लिए कठोर तरीकों को नियोजित किया जाना चाहिए।
एंडोथेलियल फ़ंक्शन को अक्सर प्रवाह-मध्यस्थता फैलाव तकनीक का उपयोग करके मापा जाता है, लेकिन माइक्रोवैस्कुलर बेड में एंडोथेलियल डिसफंक्शन बड़े नाली धमनियों में एंडोथेलियल डिसफंक्शन से पहले या स्वतंत्र हो सकता है, खासकर एचटीएन 6,7,8 जैसे विकृति विज्ञान में। इसके अलावा, प्रवाह-मध्यस्थता फैलाव तकनीक प्रणालीगत प्रभावों से अलगाव में एंडोथेलियल डिसफंक्शन के पैथोफिज़ियोलॉजी के औषधीय विच्छेदन की अनुमति नहीं देती है। microvascular endothelial समारोह, इस तरह के योणोगिनेसिस या पश्चात occlusive प्रतिक्रियाशील hyperemia के रूप में जांच के लिए अन्य तरीकों, ठीक औषधीय हस्तक्षेप12 के साथ endothelial समारोह के तंत्र को लक्षित करने में असमर्थ हैं. इसलिए, इंट्राडर्मल माइक्रोडायलिसिस विशिष्ट रूप से संवहनी कार्य के तंत्र में लक्षित जांच के लिए अनुमति देता है, और इसका उपयोग, प्रवाह-मध्यस्थता फैलाव परिणामों के साथ, प्रणालीगत संवहनी कार्य की अधिक समग्र तस्वीर प्रदान कर सकता है।
जो भी इंट्राडर्मल माइक्रोडायलिसिस दृष्टिकोण का उपयोग किया जाता है, प्रतिक्रियाओं की वैधता और प्रजनन क्षमता सुनिश्चित करने के लिए कुछ सावधानियां बरतनी चाहिए। प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल की बारीकियों विशिष्ट अनुसंधान सवालों के जवाब देने के लिए समायोजित किया जा सकता है, जबकि माइक्रोडायलिसिस जांच के सटीक प्लेसमेंट बिल्कुल महत्वपूर्ण है. डर्मिस में जांच डालने और त्वचा के बड़े दृश्य या स्पष्ट रक्त वाहिकाओं से बचने के लिए देखभाल की जानी चाहिए। इन जहाजों को पंचर करने से असामान्य रूप से कम छिड़काव इकाई मान होंगे; इस मामले में, लेजर डॉपलर फ्लोमेट्री एक अक्षुण्ण पोत के माध्यम से लाल रक्त कोशिकाओं के प्रवाह के बजाय एक हेमेटोमा के गठन को मापेगी। इसके बाद, इस प्रोटोकॉल का अगला सबसे महत्वपूर्ण कदम सुई पंचर के लिए हाइपरमिक प्रतिक्रिया का संकल्प है। यदि हाइपरमिक प्रतिक्रिया को पूरी तरह से कम करने की अनुमति नहीं है, तो बेसलाइन में रिकॉर्ड की गई छिड़काव इकाइयां और प्रोटोकॉल के शुरुआती हिस्से सही आराम मूल्यों से अधिक होंगे। पर्याप्त वसूली समय की अनुमति दी गई है, लेकिन छिड़काव इकाइयों असामान्य रूप से उच्च रहते हैं, जांच का एक recalibration आधारभूत डेटा संग्रह चरण शुरू करने से पहले की आवश्यकता हो सकती है.
इंट्राडर्मल माइक्रोडायलिसिस तकनीक की एक सीमा यह है कि यह विशेष रूप से संवहनी सिग्नलिंग मार्गों का मूल्यांकन करने के लिए एक ऊतक प्रकार को अलग नहीं कर सकता है। चूंकि त्वचा के जहाजों को विविच्छेदित नहीं किया जा सकता है और विवो में कल्पना की जा सकती है, इसलिए यह सुनिश्चित करने का कोई तरीका नहीं है कि माइक्रोडायलिसिस जांच का अर्धवृत्ताकार हिस्सा ब्याज के ऊतक (जैसे, संवहनी एंडोथेलियम) के तुरंत निकट है। इसलिए, इस तकनीक से प्राप्त परिणाम मानव शरीर क्रिया विज्ञान की एकीकृत प्रकृति के प्रतिनिधि हैं और स्थानीय रक्त प्रवाह पर एंडोथेलियल, संवहनी चिकनी मांसपेशियों और तंत्रिका प्रभावों के सामूहिक कार्य में अंतर्दृष्टि प्रदान करते हैं। हालांकि, यदि स्थानीय हीटिंग प्रोटोकॉल का उपयोग करते हैं, तो आरबीसी प्रवाह को 39 डिग्री सेल्सियस या 42 डिग्री सेल्सियस तक गर्मी में प्रारंभिक वृद्धि पर पठार तक पहुंचने की अनुमति देता है, जो तब मुख्य रूप से एंडोथेलियम-मध्यस्थता प्रतिक्रिया के लिए अनुमति देता है, जैसा कि कहीं और चर्चा की गईहै 35. इस तकनीक की एक अतिरिक्त सीमा त्वचा के रक्त प्रवाह के सूचकांक के रूप में लेजर डॉपलर फ्लोमेट्री का उपयोग है। लेजर डॉपलर फ्लोमेट्री लाल रक्त कोशिका प्रवाह को निर्धारित करती है, जो पोत व्यास (यानी, माइक्रोवैस्कुलचर के फैलाव) में परिवर्तन के लिए जिम्मेदार नहीं है, जैसा कि पूर्ण प्रवाह को निर्धारित करने के लिए आवश्यक होगा। यह प्रतिभागी के बीच या हालत के बीच मतभेद36 के प्रति संवेदनशील हो सकता है. इंट्राडर्मल माइक्रोडायलिसिस के भविष्य के अनुप्रयोगों में पूर्ण माइक्रोवास्कुलर रक्त प्रवाह को निर्धारित करने के लिए तकनीक शामिल हो सकती है। उदाहरण के लिए, ऑप्टिकल जुटना टोमोग्राफी के हाल के विकास त्वचा microvasculature13 के तीन आयामी इमेजिंग का उपयोग पोत व्यास की मात्रा का ठहराव के लिए अनुमति देता है. इंट्राडर्मल माइक्रोडायलिसिस तकनीक बहुत कम लेकिन महत्वपूर्ण उदाहरणों में contraindicated है, जिसमें शामिल हैं, लेकिन त्वचा की स्थिति वाले प्रतिभागियों, यहां वर्णित पदार्थों से संबंधित एलर्जी वाले प्रतिभागियों, गंभीर ट्रिपैनोफोबिया वाले प्रतिभागियों, और टैटू वाले प्रतिभागियों को प्रकोष्ठ के उदर पहलू की संपूर्णता को कवर करते हैं (लेकिन इस क्षेत्र में छोटे टैटू बहिष्करण नहीं हैं)।
अंतर्निहित पैथोफिजियोलॉजिकल तंत्र को अलग करने और चित्रित करने में सहायता करने के लिए माइक्रोडायलिसिस दृष्टिकोण की अनूठी क्षमता अन्य सीवीडी के बीच एचटीएन के चर एटियलजि की जांच के लिए फायदेमंद बनाती है। प्रोटोकॉल अनुकूलन के बाद, इस तकनीक उपन्यास सीवीडी उपचार की प्रभावकारिता का मूल्यांकन करने के लिए अनुमति देता है. इसके अलावा, इंट्राडर्मल माइक्रोडायलिसिस काल्पनिक रूप से असंबंधित फार्माकोथेरेपी के ऑफ-टारगेट प्रभावों का आकलन करने के लिए एक विधि प्रदान करता है, जिससे यह बड़े पैमाने पर नैदानिक परीक्षणों को सूचित करने के लिए एक अत्यधिक मूल्यवान उपकरण बन जाता है। एक साथ लिया गया, यह तकनीक माइक्रोवैस्कुलर अनुसंधान में एक अमूल्य संपत्ति है।
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Disclosures
लेखकों के पास हितों का कोई टकराव नहीं है और खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है।
Acknowledgments
कोई नहीं।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 1 mL syringes | BD Syringes | 302100 | |
| Acetlycholine | United States Pharmacopeia | 1424511 | Pilot data collected in our lab indicate drying acetylcholine increases variability of CVC response; do not dry, store in desiccator |
| Alcohol swabs | Mckesson | 191089 | |
| Baby Bee Syringe Drive | Bioanalytical Systems, Incorporated | MD-1001 | In this study the optional 3-syringe bracket (catalg number MD-1002) was utilized |
| CMA 30 Linear Microdialysis Probes | Harvard Apparatus | CMA8010460 | |
| Connex Spot Monitor | WelchAllyn | 74CT-B | automated blood pressure monitor |
| Hive Syringe Pump Controller | Bioanalytical Systems, Incorporated | MD-1020 | Controls up to 4 Baby Bee Syringe Drives |
| LabChart 8 | AD Instruments | **PowerLab hardware and LabChart software must be compatible versions | |
| Lactated Ringer's Solution | Avantor (VWR) | 76313-478 | |
| Laser Doppler Blood FlowMeter | Moor Instruments | MoorVMS-LDF | |
| Laser Doppler probe calibration kit | Moor Instruments | CAL | |
| Laser Doppler VP12 probe | Moor Instruments | VP12 | |
| Linear Microdialysis Probes | Bioanalytical Systems, Inc. | MD-2000 | |
| NG-nitro-l-arginine methyl ester | Sigma Aldrich | 483125-M | L-NAME |
| Povidone-iodine / betadine | Dynarex | 1202 | |
| PowerLab C Data Acquisition Device | AD Instruments | PLC01 | ** |
| PowerLab C Instrument Interface | AD Instruments | PLCI1 | ** |
| Probe adhesive discs | Moor Instruments | attach local heating unit to skin | |
| Skin Heater Controller | Moor Instruments | moorVMS-HEAT 1.3 | |
| Small heating probe | Moor Instruments | VHP2 | |
| Sterile drapes | Halyard | 89731 | |
| Sterile gauze | Dukal Corporation | 2085 | |
| Sterile surgical gloves | Esteem Cardinal Health | 8856N | catalogue number followed by the initials of the glove size, then the letter "B" (e.g., 8856NMB for medium) |
| Surgical scissors | Cole-Parmer | UX-06287-26 |
References
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