Summary
Hier wurde eine digitale immunhistochemische Bildanalyseplattform entwickelt und validiert, um die Immunzellen des Endometriums von Patientinnen mit rezidivierenden Fehlgeburten im Implantationsfenster quantitativ zu analysieren.
Abstract
Um die Immunumgebung des Endometriums von Patientinnen mit rezidivierenden Fehlgeburten (RM) zu bewerten, wurde eine digitale immunhistochemische Bildanalyseplattform entwickelt und validiert, um Immunzellen des Endometriums während der mittleren Lutealphase quantitativ zu analysieren. Alle Proben der Gebärmutterschleimhaut wurden während der mittleren Lutealphase des Menstruationszyklus entnommen. In Paraffin eingebettetes Endometriumgewebe wurde in 4 μm dicke Objektträger geschnitten und eine immunhistochemische (IHC) Färbung zum Nachweis von Immunzellen des Endometriums, einschließlich CD56+ uNK-Zellen, Foxp3+ Tregs, CD163+ M2-Makrophagen, CD1a+ DCs und CD8+ T-Zellen, durchgeführt. Die Panorama-Dias wurden mit einem digitalen Diascanner gescannt und für die quantitative Analyse wurde ein kommerzielles Bildanalysesystem verwendet. Der prozentuale Anteil der Immunzellen des Endometriums wurde berechnet, indem die Anzahl der Immunzellen in den gesamten Endometriumzellen geteilt wurde. Mit dem kommerziellen Bildanalysesystem konnte die quantitative Bewertung von Immunzellen des Endometriums, die mit herkömmlicher Bildanalyse nur schwer oder gar nicht analysiert werden können, einfach und genau analysiert werden. Diese Methodik kann angewendet werden, um die Mikroumgebung der Gebärmutterschleimhaut, einschließlich der Interaktion zwischen Immunzellen, und ihre Heterogenität für verschiedene Patientinnen mit reproduktivem Versagen quantitativ zu charakterisieren. Die Plattform zur quantitativen Bewertung von Immunzellen des Endometriums könnte für die Diagnose und Behandlung von RM-Patientinnen von wichtiger klinischer Bedeutung sein.
Introduction
Wiederholte Fehlgeburten (RM) sind der Verlust von zwei oder mehr aufeinanderfolgenden Schwangerschaften und sind eine komplexe Erkrankung, die in den letzten Jahren die Aufmerksamkeit von Klinikern auf sich gezogen hat. Die Inzidenzrate von RM bei Frauen im gebärfähigen Alter liegt bei 1%-5% 1. Ergebnisse früherer Studien zeigen, dass Immunfaktoren eng mit der Pathogenese von RM 2,3,4,5 assoziiert sind. Die Aufrechterhaltung der Immunhomöostase an der Schnittstelle zwischen Mutter und Fötus ist für die Einnistung und Entwicklung des Embryos erforderlich. Endometrium-Immunzellen erfüllen mehrere regulatorische Funktionen, um diese Homöostase aufrechtzuerhalten, wie z. B. die Förderung der Trophoblasteninvasion, den Umbau von Spiralarterien und die Mitwirkung an der Plazentaentwicklung 6,7,8,9.
Zuvor wurde über aberrante Immunzellen des Endometriums bei Frauen mit RM berichtet. Die Ergebnisse zeigen einen engen Zusammenhang zwischen der hohen Dichte an uterinen natürlichen Killerzellen (uNKs) und dem Auftreten von RM10,11,12. Eine erhöhte Anzahl von Makrophagen wurde im Endometrium von Frauen mit RM im Vergleich zu Frauen mit Lebendgeburt berichtet13. Regulatorische T-Zellen (Treg) spielen eine Rolle bei der mütterlichen Immuntoleranz gegenüber dem Embryo, und ihr Spiegel und ihre Funktion sind in der Dezidua von RM-Patienten verringert14. Zytotoxizität T-Zellen (CTL) und dendritische Zellen (DCs) spielen ebenfalls eine Rolle bei der Immunregulation der Schwangerschaft15,16. Daher könnte eine umfassende quantitative Analyse lokaler Immunzellen des Endometriums während der mittleren Lutealphase helfen, die Pathogenese der RM besser zu verstehen. Einige aktuelle Methoden zur quantitativen Analyse von Immunzellen des Endometriums verwenden die Durchflusszytometrie, die Immunzellen mit mehreren Markern genau markieren kann17,18. Die klinische Anwendung der Durchflusszytometrie ist jedoch begrenzt, da sie nur an frischem Gewebe durchgeführt werden kann. Die Gewinnung von frischem Gewebe ist nur möglich, wenn ein großes Volumen an überschüssigem Tumor zur Verfügung steht, was bei der Gebärmutterschleimhaut selten vorkommt. Die Immunhistochemie kann die Gewebemorphologie gut in situ beobachten und auch verschiedene Immunzellen markieren, während herkömmliche immunhistochemische Techniken keine quantitative Analyse von Immunzellen durchführen können.
Im Vergleich zu konventionellen immunhistochemischen Experimenten hat die quantitative immunhistochemische Analyse von Immunzellen im Endometrium eine wichtige klinische Bedeutung. Das IHC-Intensitäts-Scoring wird in der Regel auf einer vierstufigen Skala oder stark und schwach in der pathologischen Diagnostik und Forschung eingestuft 19,20,21. Diese semi-quantitative Technik ist jedoch subjektiv, höchst ungenau und weist eine signifikante Variabilität innerhalb und zwischen Beobachtern auf22. Eine mögliche Lösung ist die Anwendung des maschinellen Lernens, das in der digitalen Bildanalyse wertvoll ist23,24. Durch quantitative Messungen ermöglicht dieser Ansatz eine genauere Beurteilung der Infiltration, Verteilung und Dichte von Immunzellen im Gebärmuttergewebe. Diese quantitativen Informationen können dazu beitragen, die dynamischen Veränderungen in Immunzellpopulationen während des Menstruationszyklus und bei verschiedenen pathologischen Zuständen aufzuklären. Insgesamt bietet die Möglichkeit, Immunzellen in der Gebärmutterschleimhaut mittels Immunhistochemie quantitativ zu analysieren, wertvolle Einblicke in die Immunmikroumgebung der Gebärmutter.
Daher zielte das Protokoll darauf ab, eine digitale immunhistochemische Bildanalyseplattform zu entwickeln und zu validieren, um Immunzellen des Endometriums, einschließlich uNK-Zellen, Tregs, Makrophagen, DCs und zytotoxischer T-Zellen, während der mittleren Lutealphase bei RM-Patienten quantitativ zu analysieren.
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Protocol
Der Forschungsinhalt und das Protokoll wurden von der Forschungsethikkommission des Shenzhen Zhongshan Urology Hospital ethisch geprüft und genehmigt. Alle Frauen (20 bis 40 Jahre), die an der Studie teilnahmen, gaben eine informierte Einwilligung für die Probenentnahme und -verwendung.
1. Gewinnung von pathologischem Gewebe
- Bereiten Sie die Werkzeuge für die Gewebeentnahme vor, nämlich Messlineal, Pinzette, Einbettkassette, Einbettpapier und Taschentuchkorb.
- Beobachten Sie, ob die Menge an Endometriumgewebe (größer als eine Mungobohne), die mit einem Standardansatz mit einem Pipellenkatheter entnommen wird, ausreichend ist.
- Übertragen Sie das Endometriumgewebe von Formalin mit einer Pinzette auf das Einbettpapier und messen Sie die Abmessungen des Endometriumgewebes mit einem Lineal.
- Wickeln Sie das Endometriumgewebe mit Einbettpapier ein und legen Sie es in eine Einbettkassette.
- Legen Sie die Einbettkassette zur Dehydrierung in den Taschentuchkorb.
2. Austrocknung des Gewebes
- Stellen Sie den Gewebekorb in die Reaktionskammer des Dörrgeräts (siehe Materialtabelle) und starten Sie das Verfahren zur routinemäßigen Gewebedehydrierung: Formalin für 100 Minuten; Formalin für 100 min; 75% Alkohol für 60 min; 85% Alkohol für 60 min; 95% Alkohol für 60 min; 100% Alkohol für 60 min; 100% Alkohol für 60 min; 100% Alkohol für 60 min; Xylol für 35 min; Xylol für 20 min; Xylol für 20 min; Wachs für 80 min; Wachs für 80 min; 80 Min. wachs lassen. Der Vorgang dauert ca. 15 h.
- Öffnen Sie am Ende der Gewebetrocknung die Reaktionskammer des Dörrgeräts und entfernen Sie den Gewebekorb.
3. Einbettung von Gewebe
- Nehmen Sie eine geeignete Einbettform entsprechend der Größe der Probe heraus und füllen Sie sie bei 70 °C mit Paraffinwachs.
- Legen Sie das Gewebe schnell in die Form und stellen Sie es vorsichtig so ein, dass sich das Gewebe in der Mitte der Form befindet.
- Bewegen Sie die Form sanft auf die Kühlplatte und drücken Sie das Gewebe vorsichtig an, während das Paraffin am Boden aushärtet.
- Legen Sie die Einbettkassette auf die Form und füllen Sie sie mit mehr Wachs auf.
- Stellen Sie die Form auf die Kühlplatte, und wenn das Paraffin vollständig erstarrt ist, entfernen Sie den Block mit der angebrachten Kassette von der Form.
4. Gewebeschnitte
- Setzen Sie den Block in die Probenklammer des Mikrotoms ein, setzen Sie die Klinge in die Halterung, stellen Sie den Winkel zwischen der Ebene des Blocks und der Klinge ein, stellen Sie die Dicke des Abschnitts auf 4 μm ein, drehen Sie das Handrad und beginnen Sie mit dem Schneiden.
- Legen Sie die entsprechende Gewebeoberfläche frei, indem Sie einige dünne Abschnitte aus dem Block schneiden. Nehmen Sie die durchgehenden und vollständigen Abschnitte mit der Bürste heraus.
- Wenn genügend Abschnitte geschnitten sind, hören Sie auf, das Handrad zu drehen, entfernen Sie die unqualifizierten Abschnitte am vorderen Ende mit einer Pinzette und schwimmen Sie die Abschnitte auf der Oberfläche von 42 °C heißem Wasser im Wasserbad mit Pinzette und Bürste.
- Nachdem die Abschnitte vollständig abgeflacht sind, die Abschnitte auf Anti-Ablösungs-Objektträgern aufnehmen und 60 Minuten lang auf einem Objektträgerwärmer bei 65 °C backen.
- Wenn das Backen beendet ist, nehmen Sie die Glasträger aus dem Objektträgerwärmer.
5. Immunhistochemische Färbung
- Verdünnen Sie den Primärantikörper in eine Arbeitslösung mit Antikörperverdünnungsmittel. Weitere Informationen finden Sie in Tabelle 1 .
- Geben Sie die verdünnte Antikörperlösung in eine spezielle Reagenzflasche und das Detektionskit in das Reagenzfach eines automatischen IHC-Färbegeräts (siehe Materialtabelle).
- Legen Sie die Objektträger auf einen Objektträgerhalter, der mit einer speziellen Abdeckung bedeckt ist, und setzen Sie sie in das experimentelle Reaktionsfach des Geräts ein.
- Nachdem das Gerät das Reagenz und die experimentellen Informationen auf dem Objektträger automatisch erkannt hat, klicken Sie auf die Schaltfläche Start , um die immunhistochemische Färbung zu starten. Das Experiment dauert ca. 3 h.
6. Entwässerung und Versiegelung des Objektträgers
- Nehmen Sie nach der immunhistochemischen Färbung den Objektträgerhalter heraus, nehmen Sie die spezielle Abdeckung ab, legen Sie den gefärbten Objektträger in den Objektträgerhalter und waschen Sie den restlichen Farbstoff auf dem Objektträger mit klarem Wasser ab.
- Füllen Sie den Objektträgerhalter in einen automatischen Eindeckbehälter (siehe Materialtabelle), wählen Sie den Trocknungs- und Versiegelungsvorgang aus und führen Sie ihn aus.
- Nehmen Sie die Objektträger nach dem Trocknen und Versiegeln heraus.
7. Objektträger scannen
- Legen Sie die Objektträger auf die Objektträgerablage des pathologischen Panorama-Bildscanners (siehe Materialtabelle) und legen Sie sie in das Objektträger-Scanfach des Instruments, um pathologische Panoramabilder zu scannen. Der Scanvorgang dauert 2 Minuten. Siehe Abbildung 1.
8. Analyse von Bildern
- Bild importieren
- Öffnen Sie die pathologische Bildanalyse-Software (siehe Materialtabelle) und legen Sie einen neuen Ordner an. Importieren Sie immunhistochemische Bilder, die analysiert werden sollen.
- Erstellen eines Gewebeklassifikators
- Markieren Sie mehrere Gewebe und leere Annotationen, um einen Klassifikator zur Identifizierung des Gewebes bzw. des leeren Bereichs zu trainieren und einzurichten.
- Verwenden Sie Echtzeit-Tuning, um die Erkennungskapazität der Software während der Markierungsannotation in Echtzeit zu beobachten. Wenn die Erkennung nicht rechtzeitig erfolgt, markieren Sie die Annotation und trainieren Sie erneut, bis die Gewebeerkennung korrekt ist.
- Analysealgorithmus erstellen
- Wählen Sie den Standardalgorithmus in der Software entsprechend der Art des Experiments aus: Multiplex-IHC.
- Legen Sie die Farbparameter der Zellerkennung fest, indem Sie typische negative und positive Pixel auswählen.
Stellen Sie auf dieser Grundlage die Parameter von Zellkern, Zytoplasma und Zellmembran ein und beobachten Sie die Zellerkennungssituation in Echtzeit, bis die für das Bild am besten geeigneten Parameter gefunden sind. - Stellen Sie die positive Zellerkennungsschwelle ein und beobachten Sie die Erkennungssituation in Echtzeit, bis die entsprechende Schwelle angepasst ist.
- Wählen Sie den Gewebeklassifikator im Algorithmus aus und überprüfen Sie den Gewebeteil im Gewebeklassifikator, um Zellen anhand von Geweben zu identifizieren. An dieser Stelle ist die Etablierung eines Analysealgorithmus abgeschlossen.
- Ausführen der Bildanalyse
- Wählen Sie den Analysebereich aus. Verwenden Sie den etablierten Algorithmus, um Bilder zu analysieren.
- Nachdem die Softwareanalyse abgeschlossen ist, überprüfen Sie manuell, ob die Bilderkennung korrekt ist, einschließlich Gewebeerkennung, negativer und positiver Zellerkennung.
- Wenn die Bilderkennung nicht genau ist, passen Sie den Algorithmus und den Parameterschwellenwert erneut an, und führen Sie die Bildanalyse erneut aus, bis Sie erfolgreich sind. Exportieren Sie die Ergebnisse der Analyse. Siehe Abbildung 1.
- Auch andere Immunzellen können nach den oben genannten Schritten analysiert werden (siehe Abbildung 1). Stellen Sie verschiedene Analyseparameter entsprechend der tatsächlichen Expression verschiedener Endometrium-Immunmarker (CD56+uNK-Zellen, Foxp3+Tregs, CD68+-Makrophagen, CD163+M2-Makrophagen, CD1a+DCs und CD8+T-Zellen25,26) ein.
- Durch die Berechnung der Software erhalten Sie den Anteil der Endometrium-Immunzellen (siehe Tabelle 2). Verwenden Sie dies, um die Konzentrationen verschiedener Immunzellen in der Gebärmutterschleimhaut von Patientinnen mit wiederholten Fehlgeburten zu bewerten.
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Representative Results
Um endometriale Immunzellen quantitativ zu bewerten und die durch vom Menschen verursachte Instabilität zu reduzieren, haben wir eine digitale quantitative Analyseplattform für Endometrium-Immunzellen etabliert, indem wir einen automatischen immunhistochemischen Nachweis und ein digitales quantitatives Auswertungssystem verwenden. Eine immunhistochemische Bildanalyseplattform wurde etabliert, um Immunzellen des Endometriums von Patientinnen mit wiederholten Fehlgeburten (RM) im Implantationsfenster quantitativ zu analysieren. Alle Gewebe der Gebärmutterschleimhaut wurden während der mittleren Lutealphase des Menstruationszyklus gesammelt. In Paraffin eingebettetes Endometriumgewebe wurde in 4 μm dicke Objektträger geschnitten und eine IHC-Färbung zum Nachweis von Immunzellen des Endometriums, einschließlich CD56+uNK-Zellen, Foxp3+Tregs, CD163+M2-Makrophagen, CD1a+ DCs und CD8+ T-Zellen, durchgeführt. Die Panorama-Dias wurden mit dem digitalen Dia-Scanner gescannt und die quantitative Analyse mit einem digitalen Bildanalysesystem durchgeführt. Um den prozentualen Anteil der Endometrium-Immunzellen zu berechnen, dividieren Sie die Anzahl der Immunzellen durch die Gesamtzahl der Endometriumzellen. (Abbildung 1 und Abbildung 2). Der Anteil verschiedener Endometrium-Immunzellen bei Frauen mit RM (N=30) ist in Tabelle 2 dargestellt.
Abbildung 1: Schematischer Workflow für die Analyse von Immunzellen des mittleren Lutealendometriums. Die Entnahme der Proben erfolgte während der mittleren Lutealphase des Menstruationszyklus, 7-9 Tage nach dem Anstieg des luteinisierenden Hormons (LH). Die Fixierung wurde in 10% neutral gepuffertem Formalin für 4-6 h bei Raumtemperatur durchgeführt und dann in Paraffinwachs eingebettet. Die IHC-Färbung wurde zum Nachweis von Immunzellen im Endometrium während der mittleren Lutealphase durchgeführt, einschließlich CD56+uNK-Zellen, Foxp3+Tregs, CD68+-Makrophagen, CD163+M2-Makrophagen, CD1a+DCs und CD8+T-Zellen25,26. Die Gewebe wurden mit einem handelsüblichen Scanner gescannt und die quantitative Analyse mit dem immunhistochemischen Bildanalysesystem durchgeführt. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.
Abbildung 2: Immunfärbung von Endometriumzellen zur Identifizierung positiver Immunzellen. Immunfärbung von CD56+uNK-Zellen, Foxp3+Tregs, CD68+-Makrophagen, CD163+M2-Makrophagen, CD1a+DCs und CD8+T-Zellen im Endometrium von RM-Patientinnen. Braun steht für positive Immunzellen und Blau für den Zellkern. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.
| Primärer Antikörper | Klonen | Verdünnung |
| CD56-KARTON | 123C3-KARTON | 1/800 |
| Fuchsp3 | 236A/E7 | 1/100 |
| CD163-KARTON | 10W6 | 1/1200 |
| CD1a | 10 | 1/200 |
| CD8-KARTON | 4B11-KARTON | 1/300 |
Tabelle 1: Primäre Antikörper, die während der immunhistochemischen Färbung verwendet werden. Die Tabelle zeigt den Klon und die Verdünnung der Primärantikörper.
| Immunmarker | Median (%) | Minimum (%) | Maximum (%) | Mittelwert (%) | 5. Perzentil (%) | 95. Perzentil (%) |
| CD56-KARTON | 4.83 | 1.8 | 16.76 | 6.03 | 2.04 | 13.63 |
| Fuchsp3 | 0.05 | 0.02 | 0.12 | 0.06 | 0.02 | 0.11 |
| CD68-KARTON | 0.78 | 0.37 | 3.62 | 0.99 | 0.44 | 2.67 |
| CD163-KARTON | 0.84 | 0.35 | 2.38 | 0.93 | 0.38 | 2.13 |
| CD1a | 0.04 | 0.01 | 0.11 | 0.05 | 0.01 | 0.1 |
| CD8-KARTON | 1.69 | 0.76 | 4.1 | 1.85 | 0.81 | 3.72 |
Tabelle 2: Prozentsatz verschiedener Endometrium-Immunzellen bei Frauen mit RM. Der prozentuale Anteil von CD56+uNK-Zellen, Foxp3+Tregs, CD68+-Makrophagen, CD163+M2-Makrophagen, CD1a+DCs und CD8+T-Zellen bei RM-Patienten wurde mit Hilfe einer immunhistochemischen Bildanalyseplattform berechnet.
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Discussion
Mit diesem Protokoll wurde eine digitale immunhistochemische Bildanalyseplattform zur quantitativen Analyse von Immunzellen des Endometriums von RM-Patientinnen etabliert. Hier wurden sechs Endometrium-Immunmarker detektiert, um die Mikroumgebung des Endometriumimmuns bei RM-Patientinnen zu bewerten.
Ein rezeptives Endometrium während der mittleren Lutealphase ist der Schlüssel für eine erfolgreiche Einnistung und Schwangerschaft27,28. Daher spielt die Auswertung des Prozentsatzes der Endometrium-Immunzellen eine wichtige Rolle bei der Abschätzung der Empfänglichkeit des Endometriums. Die Analyse von Immunzellen des Endometriums mit herkömmlichen pathologischen Methoden ist prädiktiv und hilft daher nicht in der klinischen Anwendung. Derzeit gibt es keine standardisierte Methode zur Messung des Prozentsatzes von Immunzellen, was ein Hindernis für das Verständnis der Rolle dieser Zellen in der Schwangerschaft darstellt. Die konventionelle IHC-Analyse basiert auf ausgewählten Gesichtsfeldern und manueller Zählung. Eine präzise Gewebesegmentierung und Lokalisierung von Immunzellen kann mit herkömmlicher IHC nicht bewertet werden, da die manuelle Analyse subjektiv ist, was zu einer Beobachterverzerrung führt29.
Im Vergleich zur Analyse der Verteilung von Immunzellen im ausgewählten Feld ist die Panoramaanalyse von Geweben genauer für die Analyse der Verteilung von Endometrium-Immunzellen. Digitale Pathologieansätze, die Algorithmen des maschinellen Lernens verwenden, wurden an mehreren Tumoren getestet, um große Gewebeflächen und komplexe Zellphänotypen zu bewerten30,31. In der vorliegenden Studie wurde ein kommerzielles System zur Gewinnung eines Panoramabildes von Endometriumproben vorgestellt. Der prozentuale Anteil der Immunzellen des Endometriums wurde anschließend mit einer automatisierten quantitativen Analyse auf Basis des immunhistochemischen Bildanalysesystems bestimmt.
Bei dem hier eingesetzten immunhistochemischen Bildanalysesystem handelt es sich um eine auf pathologische Gewebe spezialisierte Bildanalyseplattform, die eine Gewebesegmentierung mittels künstlicher Intelligenz ermöglicht. Viele Studien, in denen verschiedene Module mit diesem System verwendet wurden, wurden berichtet32,33,34. Das System wurde zur Quantifizierung verschiedener histopathologischer Veränderungen und Befunde eingesetzt, die mit herkömmlicher Bildverarbeitungssoftware nur schwer zu analysieren waren. Zum Beispiel macht die Anzahl der CD56+NK-Zellen während der mittleren Lutealphase etwa 5 % der gesamten Zellen in der Gebärmutterschleimhaut aus. Mit der herkömmlichen immunhistochemischen Analyse ist es schwierig, die Anzahl der CD56+ NK-Zellen genau zu berechnen, und es kann mindestens 30 Minuten dauern, um die Gesamtzahl der positiven Zellen auf dem gesamten Abschnitt zu berechnen, aber mit dem hier verwendeten System dauert es 2-3 Minuten. Mit dem hier verwendeten immunhistochemischen Bildanalysesystem konnten daher Immunzellen des Endometriums einfach und genau analysiert werden. Die Quantifizierung pathologischer Befunde durch Bildanalyse kann dazu beitragen, die Objektivität, Präzision und Überzeugungskraft der Beurteilung der Immunumgebung des Endometriums zu verbessern.
Es gibt jedoch eine Einschränkung der beschriebenen Methode. Die Gebärmutterschleimhaut besteht aus verschiedenen Immunzyten, die mit dem Ausgang der Schwangerschaft in Verbindung stehen. Daher könnte es nicht ausreichen, nur ein oder zwei Immunmarker zu definieren. Daher werden multiparametrische Ansätze benötigt, um das Immunprofiling von Zellen umfassend zu bewerten.
Zusammenfassend kann geschlussfolgert werden, dass dieses Protokoll erfolgreich die digitale Bildanalyse in Endometriumschnitten während der mittleren Lutealphase von RM-Patientinnen zur Quantifizierung von Immunzellen angewendet hat und in der vorliegenden Studie eine Panoramaanalyse durchgeführt wurde, um die Verteilung von Endometrium-CD56+-uNKs, Foxp3+Tregs, CD68+-Makrophagen, CD163+-M2-Makrophagen, CD1a+-iDCs und CD8+-Makrophagen zu bestimmenT-Zellen während der mittleren Lutealphase. Es sind weitere Beweise erforderlich, um den Zusammenhang zwischen Immunzellen des Endometriums und Schwangerschaftsergebnissen von Patientinnen mit RM zu unterstützen, und zukünftige Studien werden sich darauf konzentrieren. Dies war die erste Studie, die die Immunumgebung des Endometriums bei RM-Patientinnen mit digitaler Pathologie untersuchte.
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Disclosures
Die Autoren haben nichts zu verraten.
Acknowledgments
Die Autorinnen danken allen Frauen, die zugestimmt und Proben für diese Studie gespendet haben.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Automated coverslipper | Sakuraus | DRS-Prisma-P-JCS&Film-JC2 | |
| CD163 | GrowGn Biotechnology | NCL-L-CD163 | |
| CD1a | Gene Tech | GM357129 | |
| CD56 | Gene Tech | GT200529 | |
| CD8 | Novocastra | NCL-L-CD8-4B11 | |
| Dehydrator | Thermo Fisher | Excelsior ES | |
| Digital pathology and | Indica labs | HALO | |
| Foxp3 | YILIFANG biological | 14-477-82 | |
| IHC stainer | Leica | BOND III | |
| Image analysis platform | Indica labs | HALO | |
| Slide Scanner | Olympus life science | VS200 |
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