Summary
يبحث هذا البروتوكول في استخدام البلازما الغنية بالحويصلة خارج الخلية (EV) كمؤشر على قدرة التخثر ل EV. يتم الحصول على البلازما الغنية ب EV من خلال عملية الطرد المركزي التفاضلي وإعادة التكلس اللاحقة.
Abstract
يكتسب دور الحويصلات خارج الخلية (EV) في الأمراض المختلفة اهتماما متزايدا ، لا سيما بسبب نشاطها القوي في تجلط الدم. ومع ذلك ، هناك حاجة ملحة لإجراء اختبار بجانب السرير لتقييم نشاط تجلط الدم للمركبات الكهربائية في الإعدادات السريرية. تقترح هذه الدراسة استخدام وقت تنشيط الثرومبين للبلازما الغنية ب EV كمقياس لنشاط تجلط الدم في EV. تم استخدام إجراءات موحدة للحصول على الدم الكامل المقتبس من الصوديوم ، يليه الطرد المركزي التفاضلي للحصول على البلازما الغنية بالمركبات الكهربائية. تمت إضافة البلازما الغنية ب EV وكلوريد الكالسيوم إلى كوب الاختبار ، وتم مراقبة التغيرات في مرونة اللزوجة في الوقت الفعلي باستخدام محلل. تم تحديد وقت التخثر الطبيعي للبلازما الغنية ب EV ، المشار إليها باسم EV-ACT. كشفت النتائج عن زيادة كبيرة في EV-ACT عندما تمت إزالة EV من البلازما التي تم الحصول عليها من متطوعين أصحاء ، بينما انخفضت بشكل ملحوظ عندما تم إثراء EV. علاوة على ذلك ، تم تقصير EV-ACT بشكل كبير في العينات البشرية من تسمم الحمل وكسر الورك وسرطان الرئة ، مما يشير إلى ارتفاع مستويات EV البلازما وتعزيز فرط تخثر الدم. من خلال إجراءاته البسيطة والسريعة ، يظهر EV-ACT وعدا كاختبار بجانب السرير لتقييم وظيفة التخثر في المرضى الذين يعانون من ارتفاع مستويات EV في البلازما.
Introduction
يلعب تجلط الدم ، الناجم عن فرط التخثر ، دورا مهما في أمراض مختلفة ، بما في ذلك صدمة الدماغ1 ، مقدمات الارتعاج2 ، الأورام3 ، ومرضى الكسور4. الآلية الكامنة وراء فرط التخثر معقدة ، وقد تم التركيز مؤخرا على دور الحويصلات خارج الخلية (EV) في اضطرابات التخثر. EVs عبارة عن أجسام تشبه الحويصلة ذات بنية ثنائية الطبقة تنفصل عن غشاء الخلية ، ويتراوح قطرها من 10 نانومتر إلى 1000 نانومتر. ترتبط بمجموعة متنوعة من العمليات المرضية ، وخاصة اضطرابات التخثر5. حددت العديد من الدراسات المركبات الكهربائية كمؤشر واعد لخطر تجلط الدم 6,7. يعتمد نشاط التخثر للمركبات الكهربائية على التعبير عن عوامل التخثر ، في المقام الأول عامل الأنسجة (TF) والفوسفاتيديل سيرين (PS). تعمل المركبات الكهربائية ذات نشاط التخثر القوي على تعزيز الكفاءة التحفيزية لمركب التيناز والبروثرومبين بشكل كبير ، وبالتالي تعزيز الفيبرينوجين بوساطة الثرومبين والتخثر الموضعي8. وقد لوحظت مستويات مرتفعة من EVs وعلاقتها السببية مع فرط تجلط الدم في العديد من الأمراض9. وبالتالي ، فإن توحيد الكشف عن المركبات الكهربائية والإبلاغ عن نشاطها في تجلط الدم هو مجال مهم للتحقيق10.
حتى الآن ، لا يتوفر سوى عدد قليل من المجموعات التجارية للكشف عن نشاط تجلط الدم للمركبات الكهربائية. مقايسة MP-Activity ومقايسة MP-TF ، التي تنتجها شركة تجارية ، هي مقايسات وظيفية تستخدم لقياس نشاط تجلط الدم في EV في البلازما11. تستخدم هذه المقايسات مبدأ مشابها لمقايسات الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم للكشف عن PS و TF على المركبات الكهربائية. ومع ذلك ، فإن هذه المجموعات باهظة الثمن وتقتصر على عدد قليل من المؤسسات البحثية رفيعة المستوى. العملية معقدة وتستغرق وقتا طويلا ، مما يجعل من الصعب تنفيذها في البيئات السريرية. بالإضافة إلى ذلك ، يمزج اختبار فوسفوليبيد (PPL) للتخثر المطور تجاريا البلازما الخالية من PS مع بلازما الاختبار ، ويقيس وقت التخثر للكشف الكمي عن مستويات EVs الإيجابيةPS 12. ومع ذلك ، تركز هذه المقايسات بشكل أساسي على PS و TF على المركبات الكهربائية ، متجاهلة مسارات التخثر الأخرى التي قد تشارك فيها المركبات الكهربائية المتداولةفي 12.
نظام تخثر البلازما معقد ويتألف من مكونات "غير مرئية" و "مرئية" ، بما في ذلك مواد التخثر ومضادات التخثر وأنظمة تحلل الفيبرين والمركبات الكهربائية المعلقة في البلازما. من الناحية الفسيولوجية ، تحافظ هذه المكونات على توازن ديناميكي. في الحالات المرضية ، تساهم الزيادة الكبيرة في EVs في الدورة الدموية في فرط تجلط الدم ، خاصة في المرضى الذين يعانون من صدمات الدماغ ، وتسمم الحمل ، والكسور ، وأنواع مختلفة من السرطان13. حاليا ، يتضمن تقييم حالة التخثر في المختبرات السريرية في المقام الأول تقييم نظام التخثر ونظام منع التخثر وانحلال الفيبرين14،15،16،17. يشيع استخدام وقت البروثرومبين ، ووقت الثرومبوبلاستين الجزئي المنشط ، ووقت الثرومبين ، والنسبة الطبيعية الدولية لتقييم مستويات عامل التخثر في نظام التخثر18. ومع ذلك ، فقد كشفت الدراسات الحديثة أن هذه الاختبارات لا تعكس تماما فرط تخثر بعض الأمراض19. طرق الفحص الأخرى ، مثل قياس تخثر الدم (TEG) ، TEG الدوراني ، وتحليل Sonoclot ، تقيس التغيرات اللزجة المرنة في الدم الكامل20,21. نظرا لأن عينات الدم الكاملة تحتوي على العديد من خلايا الدم والصفائح الدموية ، فمن المرجح أن تشير هذه الاختبارات إلى حالة تخثر العينة ككل. أبلغ بعض الباحثين عن دور خلايا الدم والصفائح الدموية في نشاط التخثر22,23. اكتشفت دراسة حديثة أيضا أن اختبارات وظيفة التخثر السابقة تواجه صعوبات في اكتشاف التغيرات في نشاط تجلط الدم للجسيمات الدقيقة24. لذلك ، تم اقتراح فرضية مفادها أنه يمكن تقييم وظيفة التخثر للمركبات الكهربائية عن طريق القياسات اللزجة المرنة لوقت التخثر المنشط (ACT) في البلازما الغنية ب EV.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
تمت الموافقة على جمع العينات البشرية من قبل لجنة الأخلاقيات الطبية في المستشفى العام بجامعة تيانجين الطبية. اتبع جمع الدم الوريدي البشري بدقة المبدأ التوجيهي الصادر عن لجنة الصحة الوطنية في الصين ، وهو WS / T 661-2020 Guideline لجمع عينات الدم الوريدي. باختصار ، تم جمع الدم من الأفراد الأصحاء بموافقة مستنيرة من الوريد الأمامي للمنطقة العضدية ، وتم خلط العينات باستخدام مضادات التخثر سترات الصوديوم بنسبة 3.2٪ بنسبة 1: 9. عندما تم جمع عينات سترات الصوديوم المضادة للتخثر فقط ، تم التخلص من وعاء التجميع الأول. بدأ تدفق المعالجة في غضون 0.5 ساعة من جمع العينات. تم تجنيد الأشخاص الأصحاء البالغين لجمع العينات بعد الحصول على الموافقة المستنيرة. كانت معايير استبعاد المريض: (1) تجلط الدم داخل الأوعية الدموية مؤخرا ، (2) ضعف وظائف الكبد والكلى ، (3) ارتفاع ضغط الدم ، فرط شحميات الدم ، السكري ، وأمراض مزمنة أخرى ، (4) الأسبرين أو العلاج المضاد للتخثر ، (5) الحيض والحمل.
1. عزل البلازما الغنية بالمركبات الكهربائية
- أجهزة الطرد المركزي العينات في 120 × غرام لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة لإزالة خلايا الدم. الطافي هو البلازما الغنية بالصفائح الدموية. بعد ذلك ، انقل الجزء العلوي من المادة الطافية إلى أنبوب طرد مركزي جديد باستخدام ماصة.
- أجهزة الطرد المركزي البلازما الغنية بالصفائح الدموية عند 1500 × جم لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة لإزالة الصفائح الدموية. الطافي هو البلازما الفقيرة بالصفائح الدموية. ثم انقل الجزء العلوي من المادة الطافية إلى أنبوب طرد مركزي جديد.
- أجهزة الطرد المركزي البلازما الفقيرة بالصفائح الدموية عند 13000 × جم لمدة 2 دقيقة في درجة حرارة الغرفة لإزالة بقايا الخلايا. الطافي هو البلازما الغنية ب EV. بعد ذلك ، انقل الجزء العلوي من المادة الطافية إلى أنبوب طرد مركزي جديد للاختبار اللاحق.
2. الكشف عن EV-ACT للعينة بواسطة المحلل
- قم بتشغيل محلل الجلطة (انظر جدول المواد) وقم بتسخين الجهاز مسبقا إلى 37 درجة مئوية. قم بتثبيت المسبار القابل للتصرف وكوب الاختبار ، ثم ابدأ إجراء مراقبة الجودة للجهاز.
ملاحظة: عندما يتم عرض قيمة إشارة المقاومة اللزجة على الشاشة كخط مستقيم ، فهذا يعني أن الاكتشاف لا يتداخل معه وأن مراقبة جودة حالة المحلل مؤهلة. يمكن بدء إجراء الاختبار بعد تأهيل الاختبار الذاتي. - أدخل عينة من المعلومات في النظام. بعد ذلك ، انقل 200 ميكرولتر من البلازما الغنية ب EV إلى كوب الاختبار ، متبوعا ب 20 مللي مول 170 ميكرولتر من كلوريد الكالسيوم. انقر فوق زر البدء. سيخلط قضيب التحريك المغناطيسي في كوب الاختبار العينة وكلوريد الكالسيوم بالكامل. أغلق الغطاء ، وسيبدأ المسبار في اكتشاف التغيير في مقاومة العينة.
ملاحظة: بعد الانتهاء من الاختبار ، سيطلب المحلل تلقائيا "اكتمال الاختبار". يتم عرض وقت EV-ACT وتسجيله بواسطة النظام. يتم التعبير عن النتيجة في وحدة الوقت "الثانية". تخلص من المسبار واختبر الكوب.
3. مراقبة الجودة القائمة على قياس التدفق الخلوي لعينة البلازما الغنية بالمركبات الكهربائية
- تم تحديد EVs لأول مرة من خلال حجمها (0.1-1 ميكرومتر). اضبط معلمات مقياس التدفق الخلوي مسبقا واضبط "بوابة" EV باستخدام حبات البوليسترين المتاحة تجاريا (0.5 و 0.9 و 3.0 ميكرومتر) (انظر جدول المواد).
ملاحظة: يتكون خليط الخرزة من كرات فلورية بأقطار مختلفة تغطي نطاق حجم الحويصلات الدقيقة (0.5 و 0.9 ميكرومتر) والصفائح الدموية (0.9 ميكرومتر و 3 ميكرومتر). - اضبط جهد التشتت الأمامي والتشتت الجانبي ، وتأكد من سقوط الكريات المجهرية 0.9 ميكرومتر في المنطقة المناسبة. يمكن رسم منطقة EV وفقا لقطر الكرة المجهرية.
- نقل 50 ميكرولتر من البلازما الغنية ب EV إلى أنبوب التدفق ، تليها 450 ميكرولتر من محلول ملحي عازل للفوسفات المصفى. خلط السائل جيدا في أنبوب التدفق. أخيرا ، اكتشف العينات باستخدام قياس التدفقالخلوي 25.
- استخدم جسيمات الفلورسنت Ultra Rainbow (انظر جدول المواد) لتحديد عدد EVs.In الموجز ، وأضف 10 ميكرولتر من الجسيمات إلى العينة قبل اكتشاف التدفق ، واحسب تركيز EV باستخدام الصيغة التالية بعد اكتمال اكتشاف العينة: 10120 * EV (#) / (ميكروبيدات * حجم) * عامل التخفيف26.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
تم قياس وقت تنشيط الثرومبين للبلازما الغنية ب EV باستخدام محلل طريقة لزجة مرنة لقياس وقت تخثر البلازما. تتكون الماكينة من أربعة مكونات رئيسية: محول إشارة إلكتروني ، مسبار ، خزان كشف ، وعنصر تسخين (الشكل 1 أ ، ب). يستخدم المسبار تذبذبات عالية التردد ومنخفضة السعة للكشف عن التغيرات في لزوجة البلازما. تتضمن مراقبة الجودة اليومية في المقام الأول مراقبة جودة الهواء لتقييم استقرار منصة الاختبار وتحديد أي اضطرابات مادية للمسبار. تتضمن مراقبة جودة الأداء الاختبار باستخدام زيت اللزوجة القياسي للتأكد من أن قيمة المقاومة التي يكتشفها المسبار تقع ضمن النطاق المحدد.
بعد الحصول على البلازما الغنية ب EV ، تم قياس EVs باستخدام قياس التدفق الخلوي لمراقبة جودة العينة. تظهر العينات غير المؤهلة مجموعة متميزة ذات حجم جسيمات أكبر قليلا بالقرب من "بوابة" EV (الشكل 2A). في المقابل ، تظهر العينات المؤهلة الغنية بالمركبات الكهربائية أن معظم الإشارات تقع ضمن "بوابة" EV كمجموعة واحدة (الشكل 2B).
لتقييم تركيز EV في عينات البلازما الغنية بالمركبات الكهربائية من المتطوعين الأصحاء ، تم إجراء الطرد المركزي فائق السرعة (1،00،000 × جم ، 70 دقيقة). كشفت النتائج أن الزيادة في تركيز EV أدت إلى تقصير EV-ACT ، بينما أدى انخفاض تركيز EV إلى إطالة EV-ACT (الشكل 3 أ). قد يظهر وقت EV-ACT ارتباطا سلبيا بمستويات EV. تم فحص العديد من العينات من المرضى السريريين ، وأظهرت النتائج أن عينات البلازما الغنية ب EV من المرضى الذين يعانون من تسمم الحمل وكسور الورك وسرطان الرئة (من اليسار إلى اليمين) كانت أوقات EV-ACT أقصر بكثير مقارنة بالمتطوعين الأصحاء (الشكل 3 ب).
في الختام ، تم إنشاء طريقة تجريبية سريعة وفعالة من حيث التكلفة للكشف عن نشاط تجلط الدم EV مبدئيا ، مما يبشر بالتطبيقات السريرية في الفحوصات بجانب السرير.
الشكل 1: الرسم التخطيطي والصورة المادية لمحلل الجلطة. يمثل (أ) و (ب) المكونان الرئيسيان للمحلل وإعدادات التشغيل على التوالي. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 2: قياس التدفق الخلوي التمثيلي للمركبات الكهربائية في البلازما الغنية بالمركبات الكهربائية. (أ) عينات البلازما الغنية بالمركبات الكهربائية غير المؤهلة. (ب) عينات البلازما المؤهلة الغنية بالمركبات الكهربائية. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 3: النتائج التمثيلية ل EV-ACT للعينة. (أ) نتائج EV-ACT بعد إزالة EV وتركيز EV في عينات غنية بالمركبات الكهربائية من متطوعين أصحاء (من اليسار إلى اليمين ، تعليق الرواسب بعد الطرد المركزي الفائق ، البلازما الغنية ب EV ، والطافية بعد الطرد المركزي الفائق). (ب) نتائج EV-ACT لعينات غنية ب EV من متطوعين ومرضى أصحاء (من اليسار إلى اليمين ، تسمم الحمل ، كسر الورك ، سرطان الرئة ، ومتطوع صحي). يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
في هذه الدراسة ، تم وصف تحضير البلازما الغنية ب EV ، وتم التحقق من عقلانية الطريقة باستخدام قياس التدفق الخلوي. بعد ذلك ، تم تحليل عينات البلازما المعاد تكلسها لوقت ACT باستخدام محلل الجلطة بناء على مبادئ المرونة اللزوجة24. كما هو موضح في الشكل 3 أ ، تم العثور على تركيز المركبات الكهربائية التي تم الحصول عليها من خلال الطرد المركزي الفائق لتقصير وقت EV-ACT ، في حين أن المادة الطافية بعد الطرد المركزي الفائق ، والتي خفضت مستويات EV ، أظهرت أوقات EV-ACT طويلة. تشير هذه النتائج إلى وجود علاقة وثيقة بين نتائج EV-ACT ومستويات EV. في الشكل 3B ، تمت مقارنة EV-ACT لعينات البلازما من المرضى الذين يعانون من تسمم الحمل وكسور الورك وسرطان الرئة بالمتطوعين الأصحاء ، مما كشف عن أوقات EV-ACT أقصر بكثير في مجموعات المرض. أشارت التقارير السابقة إلى مستويات مرتفعة من المركبات الكهربائية المعززة للتخثر في البلازما لهذه الأمراض27،28،29. ومع ذلك ، تجدر الإشارة إلى أن العوامل الأخرى الموجودة في البلازما قد تؤثر على نتائج EV-ACT ، وهناك ما يبرر إجراء مزيد من الاستكشاف لهذه العوامل المؤثرة. يقترح هذا الفحص التعرف على الدور الحاسم للمركبات الكهربائية في حالة فرط التخثر لبعض الأمراض ويعالج عدم وجود طريقة منخفضة التكلفة وسريعة للكشف عن نشاط تخثر المركبات الكهربائية.
داخل نظام عينات الدم المعزولة ، يمكن تقسيم المواد المرتبطة بالتخثر إلى خلايا الدم والصفائح الدموية ومستقلبات الخلايا (بشكل رئيسي EVs) والمكونات "غير المرئية" الأخرى (مثل عوامل التخثر والعوامل المضادة للتخثر)30،31،32. نظرا لتعقيد آلية التخثر ، تم تبسيط نظام الكشف إلى البلازما الغنية ب EV لتقليل التداخل من العوامل الأخرى. تشمل الخطوات الرئيسية في هذه العملية منع توليد المركبات الكهربائية الاصطناعية أثناء معالجة العينات وتقليل تلوث الصفائح الدموية. لذلك ، من الضروري بدء إجراء الطرد المركزي التفاضلي في غضون 0.5 ساعة وإكمال الكشف في غضون 2 ساعة بعد جمع العينة. أظهرت الدراسات السابقة أن استخدام قوة طرد مركزي عالية بما فيه الكفاية والاحتفاظ بالنصف العلوي من المادة الطافية يمكن أن يقلل بشكل فعال من تلوث الصفائح الدموية33. تم استخدام قياس التدفق الخلوي للكشف عن الصفائح الدموية المتبقية في البلازما الغنية بالأشعة فوق البنفسجية ، مما يؤكد وجودها المنخفض للغاية. تنتج العينات غير المؤهلة في المقام الأول عن تلوث الصفائح الدموية وتفتت الخلايا الناجم عن عملية المناولة. يتميز تلوث الصفائح الدموية بوجود جزيئات خارج "بوابة" المركبات الكهربائية ، بينما يظهر تجزئة الخلايا كمجموعة متميزة داخل "بوابة" المركبات الكهربائية.
أكدت الدراسات الحديثة مستويات مرتفعة بشكل ملحوظ من EVs البلازما في بعض الأمراض34,35. تعزز هذه المركبات الكهربائية في المقام الأول التخثر من خلال وجود فوسفاتيديل سيرين (PS) وعامل الأنسجة (TF) على سطحها. لذلك ، يعتمد وقت ACT للبلازما الغنية ب EV إلى حد كبير على مستوى EVs المخثرة. أحد قيود هذا الاختبار هو الحاجة إلى التأكد من أن مستويات عوامل التخثر لا تتغير بشكل كبير إلى الحد الذي تؤثر فيه على وقت التخثر أثناء تحليل EV-ACT. ومع ذلك ، فإن الدراسات حول التغيرات في مستويات عامل التخثر بعد ظهور المرض نادرة نسبيا ، ويجب تقييم تأثيرها على EV-ACT في مزيد من البحث. علاوة على ذلك ، يمكن أن يؤثر الاستخدام المفرط للأدوية المضادة للتخثر بشكل كبير على نتائج EV-ACT ، لذلك لا ينبغي استخدام هذه الطريقة أثناء هذا العلاج.
توجد عدة طرق لتحديد المركبات الكهربائية للتخثر ، ولكل منها مزاياها وعيوبها. قام Piwkham et al. بتقييم نشاط تجلط الدم EV عن طريق خلط تعليق EV مع البلازما الطبيعية ومراقبة وقت تكوين جلطة الدم في حمام مائي عند 37 درجة مئوية36. على الرغم من أن هذه الطريقة بسيطة ، إلا أن الملاحظة الذاتية لوقت تكوين الجلطة يمكن أن تؤدي إلى اختلافات في النتائج بين المراقبين المختلفين. استخدم Patil et al. مقايسة تخثر موحدة داخلية لاختبار الجسيمات الدقيقة للتخثر باستخدام سم Russell viper على مقياس تخثر شبه آلي37. تستخدم طريقة الكشف هذه معدات شبه أوتوماتيكية ، مما يوفر كفاءة وبساطة عالية. ومع ذلك ، فإن إضافة سم راسل فايبر لتنشيط العامل X يتجاهل وجود مضادات التخثر الأخرى في البلازما ، مثل بروتين اللاكتاديرين. تقيم هذه الطريقة النتائج بناء على التوازن بين المركبات الكهربائية للتخثر والمكونات المضادة للتخثر في البلازما ، مما يوفر انعكاسا أكثر دقة لوظيفة التخثر لعينة البلازما.
تركز اختبارات وظيفة التخثر الحالية بشكل أساسي على وقت تنشيط الثرومبين في الدم الكامل أو الدم الغني بالصفائح الدموية ، أو اكتشاف أوجه القصور في عوامل التخثر24. سيساعد تطوير طريقة اختبار لنشاط تجلط الدم EV في توضيح دور المركبات الكهربائية في المرض والعلاجات المستقبلية. إن عملية تحضير العينات البسيطة ، التي تتضمن إضافة CaCl2 فقط ، تجعل الفحص مناسبا للأطباء لتحديد حالة وظيفة التخثر للمرضى بسرعة. اختبار EV-ACT سهل التنفيذ ، مع توفر النتائج في غضون 10-15 دقيقة ، مما يجعله مناسبا تماما للتطوير كاختبار بجانب السرير. حددت الدراسات السابقة مبدئيا تطبيقات EV-ACT في تسمم الحمل والأورام والكسور. ستستمر الأبحاث المستقبلية في استكشاف آفاق التطبيق السريري ل EV-ACT.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
أعلن جميع المؤلفين أنه لا يوجد تضارب محتمل في المصالح.
Acknowledgments
تم دعم هذا العمل بمنح من المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين ، المنحة رقم 81930031 ، 81901525. بالإضافة إلى ذلك ، نشكر شركة تيانجين سينشري ييكانغ لتطوير التكنولوجيا الطبية المحدودة لتزويدنا بالآلات والتوجيه الفني.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| AccuCount Ultra Rainbow Fluorescent Particles | 3.8 microm; Spherotech, Lake Forest, IL, USA | For quantitative detection of MP | |
| Calcium chloride | Werfen (china) | 0020006800 | 20 mM |
| Century Clot analyzer | Tianjin Century Yikang Medical Technology Development Co., Ltd | The principle is to measure plasma viscosity by viscoelastic method | |
| Disposable probe and test cup | Tianjin Century Yikang Medical Technology Development Co., Ltd | ||
| LSR Fortessa flow cytometer | BD, USA | Used to detect MP | |
| Megamix polystyrene beads | Biocytex, Marseille, France | 7801 | The Megamix consists of a mixture of microbeads of selected diameters: 0.5 µm, 0.9 µm and 3 µm. |
References
- Zhang, J., Zhang, F., Dong, J. F. Coagulopathy induced by traumatic brain injury: systemic manifestation of a localized injury. Blood. 131 (18), 2001-2006 (2018).
- Han, C., Chen, Y. Y., Dong, J. F. Prothrombotic state associated with preeclampsia. Current Opinion in Hematology. 28 (5), 323-330 (2021).
- Campello, E., Bosch, F., Simion, C., Spiezia, L., Simioni, P. Mechanisms of thrombosis in pancreatic ductal adenocarcinoma. Best Practice & Research Clinical Haematology. 35 (1), 101346 (2022).
- You, D., et al. Identification of hypercoagulability with thrombelastography in patients with hip fracture receiving thromboprophylaxis. Canadian Journal of Surgery. 64 (3), E324-E329 (2021).
- Shah, R., Patel, T., Freedman, J. E. Circulating extracellular vesicles in human disease. The New England Journal of Medicine. 379 (10), 958-966 (2018).
- Zang, X., et al. Hepatocyte-derived microparticles as novel biomarkers for the diagnosis of deep venous thrombosis in trauma patients. Clinical and Applied Thrombosis/Hemostasis. 29, 10760296231153400 (2023).
- Chen, Y., et al. Annexin V(-) and tissue factor(+) microparticles as biomarkers for predicting deep vein thrombosis in patients after joint arthroplasty. Clinica Chimica Acta. 536, 169-179 (2022).
- Wang, C., Yu, C., Novakovic, V. A., Xie, R., Shi, J. Circulating microparticles in the pathogenesis and early anticoagulation of thrombosis in COVID-19 with kidney injury. Frontiers in Cell and Developmental Biology. 9, 784505 (2021).
- Lacroix, R., Dubois, C., Leroyer, A. S., Sabatier, F., Dignat-George, F. Revisited role of microparticles in arterial and venous thrombosis. Journal of Thrombosis and Haemostasis. 11 (Suppl 1), 24-35 (2013).
- Cointe, S., et al. Standardization of microparticle enumeration across different flow cytometry platforms: results of a multicenter collaborative workshop. Journal of Thrombosis and Haemostasis. 15 (1), 187-193 (2017).
- Ayers, L., Harrison, P., Kohler, M., Ferry, B. Procoagulant and platelet-derived microvesicle absolute counts determined by flow cytometry correlates with a measurement of their functional capacity. Journal of Extracellular Vesicles. 3, 25348 (2014).
- Mooberry, M. J., et al. Procoagulant microparticles promote coagulation in a factor XI-dependent manner in human endotoxemia. Journal of Thrombosis and Haemostasis. 14 (5), 1031-1042 (2016).
- Zhao, Z., et al. Cellular microparticles and pathophysiology of traumatic brain injury. Protein & Cell. 8 (11), 801-810 (2017).
- Bolliger, D., Tanaka, K. A. Point-of-care coagulation testing in cardiac surgery. Seminars in Thrombosis and Hemostasis. 43 (4), 386-396 (2017).
- Ganter, M. T., Hofer, C. K. Coagulation monitoring: current techniques and clinical use of viscoelastic point-of-care coagulation devices. Anesthesia & Analgesia. 106 (5), 1366-1375 (2008).
- Samuelson, B. T., Cuker, A., Siegal, D. M., Crowther, M., Garcia, D. A. Laboratory assessment of the anticoagulant activity of direct oral anticoagulants: a systematic review. Chest. 151 (1), 127-138 (2017).
- Maier, C. L., Sniecinski, R. M. Anticoagulation monitoring for perioperative physicians. Anesthesiology. 135 (4), 738-748 (2021).
- Tuktamyshov, R., Zhdanov, R. The method of in vivo evaluation of hemostasis: Spatial thrombodynamics. Hematology. 20 (10), 584-586 (2015).
- Tsantes, A. G., et al. Higher coagulation activity in hip fracture patients: A case-control study using rotational thromboelastometry. International Journal of Laboratory Hematology. 43 (3), 477-484 (2021).
- Premkumar, M., et al. COVID-19-related dynamic coagulation disturbances and anticoagulation strategies using conventional D-dimer and point-of-care Sonoclot tests: a prospective cohort study. BMJ Open. 12 (5), e051971 (2022).
- Sakai, T. Comparison between thromboelastography and thromboelastometry. Minerva Anestesiologica. 85 (12), 1346-1356 (2019).
- Yan, M., et al. TMEM16F mediated phosphatidylserine exposure and microparticle release on erythrocyte contribute to hypercoagulable state in hyperuricemia. Blood Cells, Molecules and Diseases. 96, 102666 (2022).
- Yu, H., et al. Hyperuricemia enhances procoagulant activity of vascular endothelial cells through TMEM16F regulated phosphatidylserine exposure and microparticle release. The FASEB Journal. 35 (9), e21808 (2021).
- Gao, Y., et al. MPs-ACT, an assay to evaluate the procoagulant activity of microparticles. Clinical and Applied Thrombosis/Hemostasis. 29, 10760296231159374 (2023).
- Wang, J., et al. Brain-derived extracellular vesicles induce vasoconstriction and reduce cerebral blood flow in mice. Journal of Neurotrauma. 39 (11-12), 879-890 (2022).
- Tan, J., et al. Analysis of circulating microvesicles levels and effects of associated factors in elderly patients with obstructive sleep apnea. Frontiers in Aging Neuroscience. 13, 609282 (2021).
- Kubo, H.
- Gilani, S. I., Weissgerber, T. L., Garovic, V. D., Jayachandran, M.
- Pourakbari, R., Khodadadi, M., Aghebati-Maleki, A., Aghebati-Maleki, L., Yousefi, M. The potential of exosomes in the therapy of the cartilage and bone complications; emphasis on osteoarthritis. Life Science. 236, 116861 (2019).
- Shi, J., Gilbert, G. E. Lactadherin inhibits enzyme complexes of blood coagulation by competing for phospholipid-binding sites. Blood. 101 (7), 2628-2636 (2003).
- Dasgupta, S. K., Le, A., Chavakis, T., Rumbaut, R. E., Thiagarajan, P. Developmental endothelial locus-1 (Del-1) mediates clearance of platelet microparticles by the endothelium. Circulation. 125 (13), 1664-1672 (2012).
- Frey, B., Gaipl, U. S. The immune functions of phosphatidylserine in membranes of dying cells and microvesicles. Seminars in Immunopathology. 33 (5), 497-516 (2011).
- Rikkert, L. G., Coumans, F. A. W., Hau, C. M., Terstappen, L., Nieuwland, R. Platelet removal by single-step centrifugation. Platelets. 32 (4), 440-443 (2021).
- Chen, Y., et al. Association of placenta-derived extracellular vesicles with pre-eclampsia and associated hypercoagulability: a clinical observational study. BJOG. 128 (6), 1037-1046 (2021).
- Liu, Y., et al. The potential applications of microparticles in the diagnosis, treatment, and prognosis of lung cancer. Journal of Translational Medicine. 20 (1), 404 (2022).
- Piwkham, D., et al. The in vitro red blood cell microvesiculation exerts procoagulant activity of blood cell storage in Southeast Asian ovalocytosis. Heliyon. 9 (1), e12714 (2023).
- Patil, R., Ghosh, K., Shetty, S. A simple clot based assay for detection of procoagulant cell-derived microparticles. Clinical Chemistry and Laboratory Medicine. 54 (5), 799-803 (2016).
