Summary
Denne protokollen undersøker bruken av ekstracellulært vesikkel (EV) -rikt plasma som en indikator på den koagulative evnen til EV. EV-rikt plasma oppnås gjennom en prosess med differensial sentrifugering og påfølgende omkalkning.
Abstract
Rollen til ekstracellulære vesikler (EV) i ulike sykdommer får økt oppmerksomhet, særlig på grunn av deres potente prokoagulerende aktivitet. Imidlertid er det et presserende behov for en sengetest for å vurdere prokoagulantaktiviteten til EV i kliniske omgivelser. Denne studien foreslår bruk av trombinaktiveringstid for EV-rikt plasma som et mål på EVs prokoagulantaktivitet. Standardiserte prosedyrer ble brukt for å oppnå natriumsitrert fullblod, etterfulgt av differensiell sentrifugering for å oppnå EV-rikt plasma. Det EV-rike plasmaet og kalsiumkloridet ble tilsatt testkoppen, og endringene i viskoelastisitet ble overvåket i sanntid ved hjelp av en analysator. Den naturlige koagulasjonstiden for EV-rikt plasma, referert til som EV-ACT, ble bestemt. Resultatene viste en signifikant økning i EV-ACT når EV ble fjernet fra plasma oppnådd fra friske frivillige, mens den ble betydelig redusert når EV ble beriket. Videre ble EV-ACT betydelig forkortet i humane prøver fra preeklampsi, hoftebrudd og lungekreft, noe som indikerer forhøyede nivåer av plasma EV og fremme av blodhyperkoagulasjon. Med sin enkle og raske prosedyre viser EV-ACT løfte som en sengetest for evaluering av koagulasjonsfunksjon hos pasienter med høye plasma EV-nivåer.
Introduction
Trombose, som er forårsaket av hyperkoagulabilitet, spiller en betydelig rolle i ulike sykdommer, inkludert hjerne traumer1, preeklampsi2, svulster3 og bruddpasienter4. Mekanismen som ligger til grunn for hyperkoagulabilitet er kompleks, og nylig har det blitt lagt vekt på rollen som ekstracellulære vesikler (EV) i koagulasjonsforstyrrelser. EV er vesikkellignende legemer med en tolagsstruktur som løsner fra cellemembranen, som varierer i diameter fra 10 nm til 1000 nm. De er forbundet med en rekke sykdomsprosesser, spesielt koagulasjonsforstyrrelser5. Flere studier har identifisert elbiler som en lovende prediktor for tromboserisiko 6,7. Den prokoagulerende aktiviteten til EV avhenger av uttrykket av koagulasjonsfaktorer, primært vevsfaktor (TF) og fosfatidylserin (PS). Elbiler med robust prokoagulantaktivitet øker den katalytiske effektiviteten til tenase og protrombinkompleks betydelig, og fremmer dermed trombinmediert fibrinogen og lokal trombose8. Forhøyede nivåer av EV og deres årsakssammenheng med hyperkoagulabilitet har blitt observert i mange sykdommer9. Standardisering av deteksjon av elbiler og rapportering av prokoagulantaktivitet er derfor et viktig undersøkelsesområde10.
Til dags dato er bare noen få kommersielle sett tilgjengelige for å oppdage den prokoagulerende aktiviteten til elbiler. MP-Activity-analysen og MP-TF-analysen, produsert av et kommersielt selskap, er funksjonelle analyser som brukes til å måle EVs prokoagulantaktivitet i plasma11. Disse analysene benytter et prinsipp som ligner på enzymkoblede immunosorbentanalyser for å oppdage PS og TF på EV. Imidlertid er disse settene dyre og begrenset til noen få forskningsinstitusjoner på høyt nivå. Prosessen er kompleks og tidkrevende, noe som gjør det utfordrende å implementere dem i kliniske omgivelser. I tillegg blander en kommersielt utviklet prokoagulant fosfolipid (PPL)-analyse PS-fritt plasma med testplasma, og måler koagulasjonstid for kvantitativt å oppdage nivåer av PS-positive EV12. Imidlertid fokuserer disse analysene primært på PS og TF på elbiler, og overser andre koagulasjonsveier som sirkulerende elbiler kan være involvert i12.
Plasmakoagulasjonssystemet er intrikat og består av både "usynlige" og "synlige" komponenter, inkludert koagulantia, antikoagulantia, fibrinolytiske systemer og EV suspendert i plasma. Fysiologisk opprettholder disse komponentene en dynamisk balanse. Ved patologiske forhold bidrar signifikant økt elbil i omløp til hyperkoagulerbarhet, spesielt hos pasienter med hjernetraumer, svangerskapsforgiftning, brudd og ulike typer kreft13. For tiden innebærer evaluering av koagulasjonsstatus i kliniske laboratorier primært å vurdere koagulasjonssystemet, antikoagulasjonssystemet og fibrinolyse 14,15,16,17. Protrombintid, aktivert partiell tromboplastintid, trombintid og internasjonalt normalisert forhold brukes ofte til å evaluere koagulasjonsfaktornivåer i koagulasjonssystemet18. Nylige studier har imidlertid vist at disse testene ikke fullt ut gjenspeiler hyperkoagulerbarheten til visse sykdommer19. Andre analysemetoder, som tromboelastometri (TEG), rotasjons-TEG og Sonoklot-analyse, måler viskoelastiske endringer i fullblod20,21. Siden hele blodprøver inneholder mange blodceller og blodplater, er disse testene mer sannsynlig å indikere koagulasjonsstatusen til prøven som helhet. Noen forskere har rapportert om rollen til blodceller og blodplater i prokoagulant aktivitet 22,23. En nylig studie oppdaget også at tidligere koagulasjonsfunksjonstester har vanskeligheter med å oppdage endringer i mikropartiklenes prokoagulantaktivitet24. Derfor har en hypotese blitt foreslått at den prokoagulerende funksjonen til EV kan evalueres ved viskoelastiske målinger av den aktiverte koagulasjonstiden (ACT) i EV-rikt plasma.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Innsamlingen av menneskelige prøver ble godkjent av den medisinske etiske komiteen ved Tianjin Medical University General Hospital. Samlingen av humant venøst blod fulgte strengt retningslinjene utstedt av National Health Commission of China, nemlig WS / T 661-2020 Retningslinje for innsamling av venøse blodprøver. Kort fortalt ble blod samlet inn fra friske individer med informert samtykke fra den fremre brakialområdet, og prøvene ble blandet ved bruk av 3,2% natriumcitrat antikoagulant i forholdet 1:9. Når bare natriumcitrat antikoagulasjonsprøver ble samlet, ble det første oppsamlingskaret kassert. Behandlingsflyten ble igangsatt innen 0,5 timer etter prøvetaking. Voksne friske forsøkspersoner ble rekruttert til prøvetaking etter innhenting av informert samtykke. Pasientens eksklusjonskriterier var: (1) en nylig intravaskulær trombose, (2) nedsatt lever- og nyrefunksjon, (3) hypertensjon, hyperlipidemi, diabetes og andre kroniske sykdommer, (4) aspirin- eller antikoagulasjonsbehandling, (5) menstruasjon og graviditet.
1. Isolering av EV-rikt plasma
- Sentrifuger prøvene ved 120 x g i 20 minutter ved romtemperatur for å fjerne blodceller. Supernatanten er blodplaterikt plasma. Overfør deretter den øvre 1/2 av supernatanten til et nytt sentrifugerør med pipette.
- Sentrifuger det blodplaterike plasmaet ved 1500 x g i 20 minutter ved romtemperatur for å fjerne blodplatene. Supernatanten er blodplatefattig plasma. Overfør deretter den øvre 1/2 av supernatanten til et nytt sentrifugerør.
- Sentrifuger det blodplatefattige plasmaet ved 13000 x g i 2 minutter ved romtemperatur for å fjerne celleavfall. Supernatanten er elbilrikt plasma. Overfør deretter den øvre 1/2 av supernatanten til et nytt sentrifugerør for påfølgende testing.
2. Påvisning av EV-ACT av prøven ved analysatoren
- Slå på blodproppanalysatoren (se materialfortegnelse) og forvarm instrumentet til 37 °C. Installer engangssonden og testkoppen, og start deretter kvalitetskontrollprosedyren til maskinen.
MERK: Når den viskøse motstandssignalverdien på skjermen vises som en rett linje, betyr det at deteksjonen ikke forstyrres, og kvalitetskontrollen av analysatorstatusen er kvalifisert. Testprosedyren kan startes etter at selvtesten er kvalifisert. - Skriv inn eksempelinformasjon i systemet. Deretter overfører du 200 μL EV-rikt plasma til testkoppen, etterfulgt av 20 mM 170 μL kalsiumklorid. Klikk på startknappen. Den magnetiske omrøringsstangen i testkoppen vil blande prøven og kalsiumkloridet fullstendig. Lukk dekselet, og sonden begynner å oppdage endringen i prøvemotstand.
MERK: Etter at testen er ferdig, vil analysatoren automatisk spørre "test fullført". Tidspunktet for EV-ACT vises og registreres av systemet. Resultatet uttrykkes i tidsenheten "sekund". Kast sonden og test koppen.
3. Flowcytometribasert kvalitetskontroll av den elbilrike plasmaprøven
- Elbiler ble først identifisert av størrelsen (0,1-1 μm). Juster parametrene til strømningscytometeret på forhånd og sett "porten" til EV ved hjelp av kommersielt tilgjengelige polystyrenperler (0,5, 0,9 og 3,0 μm) (se materialtabell).
MERK: Perleblandingen består av fluorescerende kuler med forskjellige diametre som dekker størrelsesområdet for mikrovesikler (0,5 og 0,9 μm) og blodplater (0,9 μm og 3 μm). - Juster spenningen til Forward Scatter og Side Scatter, og sørg for at 0,9 μm mikrosfærene faller i riktig region. EV-regionen kan tegnes i henhold til mikrosfærens diameter.
- Overfør 50 μL EV-rikt plasma inn i strømningsrøret, etterfulgt av 450 μL filtrert fosfatbuffersaltvann. Bland væsken grundig i strømningsrøret. Til slutt oppdager du prøvene ved hjelp av flowcytometri25.
- Bruk Ultra Rainbow fluorescerende partikler (se materialtabellen) for å kvantifisere antall EVs.In kort, legg til 10 μL av partiklene til prøven før strømningsdeteksjonen, og beregne EV-konsentrasjonen ved hjelp av følgende formel etter at prøvedeteksjonen er fullført: 10,120 * EV (#) / (mikroperler * volum) * fortynningsfaktor26.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Trombinaktiveringstiden for EV-rikt plasma ble målt ved hjelp av en viskoelastisk metodeanalysator for plasmakoagulasjonstidsmåling. Maskinen består av fire hovedkomponenter: en elektronisk signalomformer, en sonde, en deteksjonstank og et varmeelement (figur 1A,B). Sonden benytter høyfrekvente og lavamplitude oscillasjoner for å oppdage endringer i plasmaviskositet. Daglig kvalitetskontroll innebærer primært luftkvalitetskontroll for å vurdere stabiliteten til testplattformen og identifisere eventuelle fysiske forstyrrelser på sonden. Kvalitetskontroll av høy ytelse innebærer testing med standard viskositetsolje for å sikre at motstandsverdien som oppdages av sonden, faller innenfor det innstilte området.
Etter å ha oppnådd EV-rikt plasma ble EV målt ved hjelp av flowcytometri for kvalitetskontroll av prøven. Ukvalifiserte prøver viser en distinkt klynge med litt større partikkelstørrelse nær "porten" til EV (figur 2A). I motsetning til dette viser kvalifiserte EV-rike prøver at de fleste signaler faller innenfor "porten" til EV som en enkelt gruppe (figur 2B).
For å evaluere EV-konsentrasjon i EV-rike plasmaprøver fra friske frivillige, ble superspeed sentrifugering (1,00,000 x g, 70 min) utført. Resultatene viste at en økning i EV-konsentrasjon forkortet EV-ACT, mens en reduksjon i EV-konsentrasjon forlenget EV-ACT (figur 3A). EV-ACT-tid kan vise en negativ korrelasjon med EV-nivåer. Flere prøver fra kliniske pasienter ble undersøkt, og funnene viste at EV-rike plasmaprøver fra pasienter med preeklampsi, hoftefrakturer og lungekreft (fra venstre til høyre) hadde signifikant kortere EV-ACT-tider sammenlignet med friske frivillige (figur 3B).
Avslutningsvis ble en rask og kostnadseffektiv eksperimentell metode for å oppdage EV-prokoagulantaktivitet foreløpig etablert, og holdt løfte om kliniske anvendelser i sengeundersøkelser.
Figur 1: Det skjematiske diagrammet og det fysiske bildet av blodproppanalysatoren. (A) og (B) representerer henholdsvis hovedkomponentene i analysatoren og driftsinnstillingene. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 2: Representativ flowcytometri av EV i EV-rikt plasma. (A) Ukvalifiserte EV-rike plasmaprøver. (B) Kvalifiserte EV-rike plasmaprøver. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 3: Representative resultater av utvalgets EV-ACT. (A) EV-ACT-resultater etter EV-fjerning og EV-konsentrasjon i EV-rike prøver fra friske frivillige (fra venstre til høyre, suspensjon av sediment etter supersentrifugering, EV-rikt plasma og supernatant etter ultrasentrifugering). (B) EV-ACT-resultater av EV-rike prøver fra friske frivillige og pasienter (Fra venstre til høyre, preeklampsi, hoftebrudd, lungekreft og sunn frivillig). Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
I denne studien ble fremstilling av EV-rikt plasma beskrevet, og metodens rasjonalitet ble verifisert ved hjelp av flowcytometri. Deretter ble de rekalsifiserte plasmaprøvene analysert for ACT-tid ved bruk av en koagulasjonsanalysator basert på viskoelastisitetsprinsipper24. Som vist i figur 3A ble konsentrasjonen av elbiler oppnådd gjennom ultrasentrifugering funnet å forkorte EV-ACT-tiden, mens supernatanten etter ultrasentrifugering, som hadde reduserte EV-nivåer, viste lengre EV-ACT-tider. Disse funnene antyder et nært forhold mellom EV-ACT-resultater og EV-nivåer. I figur 3B ble EV-ACT av plasmaprøver fra pasienter med svangerskapsforgiftning, hoftefrakturer og lungekreft sammenlignet med friske frivillige, og avslørte signifikant kortere EV-ACT-tider i sykdomsgruppene. Tidligere rapporter har indikert forhøyede nivåer av koagulasjonsfremmende elbiler i plasma for disse sykdommene 27,28,29. Det skal imidlertid bemerkes at andre faktorer tilstede i plasma kan påvirke EV-ACT-utfall, og videre utforskning av disse påvirkningsfaktorene er berettiget. Denne analysen foreslår å anerkjenne den avgjørende rollen som elbiler i hyperkoagulerbar tilstand av visse sykdommer og adresserer mangelen på en billig og rask deteksjonsmetode for EV-prokoagulantaktivitet.
Innenfor det isolerte blodprøvesystemet kan koagulasjonsrelaterte stoffer deles inn i blodceller, blodplater, cellemetabolitter (hovedsakelig EV) og andre "usynlige" komponenter (som koagulasjonsfaktorer og antikoagulasjonsfaktorer)30,31,32. Gitt kompleksiteten til koagulasjonsmekanismen ble deteksjonssystemet forenklet til EV-rikt plasma for å minimere interferens fra andre faktorer. Viktige trinn i denne prosessen inkluderer å forhindre generering av kunstige EV-er under prøvebehandling og minimere blodplatekontaminering. Derfor er det nødvendig å starte differensialsentrifugeringsprosedyren innen 0,5 timer og fullføre deteksjonen innen 2 timer etter prøveinnsamling. Tidligere studier har vist at bruk av tilstrekkelig høy sentrifugalkraft og tilbakeholdelse av den øvre halvdelen av supernatanten effektivt kan redusere blodplatekontaminering33. Flowcytometri ble brukt til å påvise gjenværende blodplater i EV-rikt plasma, noe som bekreftet deres svært lave tilstedeværelse. Ukvalifiserte prøver skyldes primært blodplatekontaminering og cellefragmentering forårsaket av håndteringsprosessen. Blodplateforurensning er preget av tilstedeværelsen av partikler utenfor "porten" til EV, mens cellefragmentering fremstår som en distinkt klynge innenfor "porten" til EV.
Nylige studier har bekreftet betydelig forhøyede nivåer av plasma-EV i visse sykdommer34,35. Disse elbilene fremmer primært koagulasjon gjennom tilstedeværelse av fosfatidylserin (PS) og vevsfaktor (TF) på overflaten. Derfor er ACT-tiden for EV-rikt plasma i stor grad avhengig av nivået av koagulerende EV. En begrensning av denne testen er behovet for å sikre at nivåene av koagulasjonsfaktorer ikke endres vesentlig i den grad de påvirker koagulasjonstiden under EV-ACT-analyse. Imidlertid er studier på endringer i koagulasjonsfaktornivåer etter sykdomsdebut relativt knappe, og deres effekt på EV-ACT må evalueres i videre forskning. Videre kan overdreven bruk av antikoagulerende legemidler påvirke EV-ACT-resultatene betydelig, så denne metoden bør ikke brukes under slik behandling.
Det finnes flere metoder for å bestemme prokoagulerende elbiler, hver med sine fordeler og ulemper. Piwkham et al. evaluerte EV-prokoagulantaktivitet ved å blande EV-suspensjon med normalt plasma og observere tidspunktet for blodproppdannelse i et vannbad ved 37 ° C36. Selv om denne metoden er enkel, kan den subjektive observasjonen av koagulasjonsdannelsestiden føre til resultatvariasjoner blant forskjellige observatører. Patil et al. benyttet en intern standardisert koagulasjonsanalyse for prokoagulant mikropartikkeltesting ved bruk av Russell viper gift på et halvautomatisk koagulometer37. Denne deteksjonsmetoden benytter halvautomatisk utstyr, og tilbyr høy effektivitet og enkelhet. Imidlertid overser tilsetningen av Russell viper gift for å aktivere faktor X tilstedeværelsen av andre antikoagulantia i plasma, slik som laktadherinprotein. Denne metoden vurderer utfall basert på balansen mellom prokoagulerende EV og antikoagulerende komponenter i plasma, noe som gir en mer nøyaktig refleksjon av koagulasjonsfunksjonen til plasmaprøven.
Eksisterende koagulasjonsfunksjonstester fokuserer primært på trombinaktiveringstid i fullblod eller blodplaterikt blod, eller påviser mangler i koagulasjonsfaktorer24. Å utvikle en testmetode for EV-prokoagulant aktivitet vil bidra til å belyse rollen til EV i sykdom og fremtidige behandlinger. Den enkle prøveprepareringsprosessen, som involverer tillegg av bare CaCl2, gjør analysen praktisk for klinikere å raskt bestemme pasientens koagulasjonsfunksjonsstatus. EV-ACT-testen er enkel å utføre, med resultater tilgjengelig innen 10-15 minutter, noe som gjør den godt egnet for utvikling som en nattbordstest. Tidligere studier har forsøksvis identifisert anvendelser av EV-ACT i preeklampsi, svulster og brudd. Fremtidig forskning vil fortsette å utforske de kliniske applikasjonsutsiktene til EV-ACT.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Alle forfatterne erklærte at det ikke er noen potensielle interessekonflikter.
Acknowledgments
Dette arbeidet ble støttet av tilskudd fra National Natural Science Foundation of China, stipend nr. 81930031, 81901525. I tillegg takker vi Tianjin Century Yikang Medical Technology Development Co, Ltd for å gi oss maskiner og teknisk veiledning.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| AccuCount Ultra Rainbow Fluorescent Particles | 3.8 microm; Spherotech, Lake Forest, IL, USA | For quantitative detection of MP | |
| Calcium chloride | Werfen (china) | 0020006800 | 20 mM |
| Century Clot analyzer | Tianjin Century Yikang Medical Technology Development Co., Ltd | The principle is to measure plasma viscosity by viscoelastic method | |
| Disposable probe and test cup | Tianjin Century Yikang Medical Technology Development Co., Ltd | ||
| LSR Fortessa flow cytometer | BD, USA | Used to detect MP | |
| Megamix polystyrene beads | Biocytex, Marseille, France | 7801 | The Megamix consists of a mixture of microbeads of selected diameters: 0.5 µm, 0.9 µm and 3 µm. |
References
- Zhang, J., Zhang, F., Dong, J. F. Coagulopathy induced by traumatic brain injury: systemic manifestation of a localized injury. Blood. 131 (18), 2001-2006 (2018).
- Han, C., Chen, Y. Y., Dong, J. F. Prothrombotic state associated with preeclampsia. Current Opinion in Hematology. 28 (5), 323-330 (2021).
- Campello, E., Bosch, F., Simion, C., Spiezia, L., Simioni, P. Mechanisms of thrombosis in pancreatic ductal adenocarcinoma. Best Practice & Research Clinical Haematology. 35 (1), 101346 (2022).
- You, D., et al. Identification of hypercoagulability with thrombelastography in patients with hip fracture receiving thromboprophylaxis. Canadian Journal of Surgery. 64 (3), E324-E329 (2021).
- Shah, R., Patel, T., Freedman, J. E. Circulating extracellular vesicles in human disease. The New England Journal of Medicine. 379 (10), 958-966 (2018).
- Zang, X., et al. Hepatocyte-derived microparticles as novel biomarkers for the diagnosis of deep venous thrombosis in trauma patients. Clinical and Applied Thrombosis/Hemostasis. 29, 10760296231153400 (2023).
- Chen, Y., et al. Annexin V(-) and tissue factor(+) microparticles as biomarkers for predicting deep vein thrombosis in patients after joint arthroplasty. Clinica Chimica Acta. 536, 169-179 (2022).
- Wang, C., Yu, C., Novakovic, V. A., Xie, R., Shi, J. Circulating microparticles in the pathogenesis and early anticoagulation of thrombosis in COVID-19 with kidney injury. Frontiers in Cell and Developmental Biology. 9, 784505 (2021).
- Lacroix, R., Dubois, C., Leroyer, A. S., Sabatier, F., Dignat-George, F. Revisited role of microparticles in arterial and venous thrombosis. Journal of Thrombosis and Haemostasis. 11 (Suppl 1), 24-35 (2013).
- Cointe, S., et al. Standardization of microparticle enumeration across different flow cytometry platforms: results of a multicenter collaborative workshop. Journal of Thrombosis and Haemostasis. 15 (1), 187-193 (2017).
- Ayers, L., Harrison, P., Kohler, M., Ferry, B. Procoagulant and platelet-derived microvesicle absolute counts determined by flow cytometry correlates with a measurement of their functional capacity. Journal of Extracellular Vesicles. 3, 25348 (2014).
- Mooberry, M. J., et al. Procoagulant microparticles promote coagulation in a factor XI-dependent manner in human endotoxemia. Journal of Thrombosis and Haemostasis. 14 (5), 1031-1042 (2016).
- Zhao, Z., et al. Cellular microparticles and pathophysiology of traumatic brain injury. Protein & Cell. 8 (11), 801-810 (2017).
- Bolliger, D., Tanaka, K. A. Point-of-care coagulation testing in cardiac surgery. Seminars in Thrombosis and Hemostasis. 43 (4), 386-396 (2017).
- Ganter, M. T., Hofer, C. K. Coagulation monitoring: current techniques and clinical use of viscoelastic point-of-care coagulation devices. Anesthesia & Analgesia. 106 (5), 1366-1375 (2008).
- Samuelson, B. T., Cuker, A., Siegal, D. M., Crowther, M., Garcia, D. A. Laboratory assessment of the anticoagulant activity of direct oral anticoagulants: a systematic review. Chest. 151 (1), 127-138 (2017).
- Maier, C. L., Sniecinski, R. M. Anticoagulation monitoring for perioperative physicians. Anesthesiology. 135 (4), 738-748 (2021).
- Tuktamyshov, R., Zhdanov, R. The method of in vivo evaluation of hemostasis: Spatial thrombodynamics. Hematology. 20 (10), 584-586 (2015).
- Tsantes, A. G., et al. Higher coagulation activity in hip fracture patients: A case-control study using rotational thromboelastometry. International Journal of Laboratory Hematology. 43 (3), 477-484 (2021).
- Premkumar, M., et al. COVID-19-related dynamic coagulation disturbances and anticoagulation strategies using conventional D-dimer and point-of-care Sonoclot tests: a prospective cohort study. BMJ Open. 12 (5), e051971 (2022).
- Sakai, T. Comparison between thromboelastography and thromboelastometry. Minerva Anestesiologica. 85 (12), 1346-1356 (2019).
- Yan, M., et al. TMEM16F mediated phosphatidylserine exposure and microparticle release on erythrocyte contribute to hypercoagulable state in hyperuricemia. Blood Cells, Molecules and Diseases. 96, 102666 (2022).
- Yu, H., et al. Hyperuricemia enhances procoagulant activity of vascular endothelial cells through TMEM16F regulated phosphatidylserine exposure and microparticle release. The FASEB Journal. 35 (9), e21808 (2021).
- Gao, Y., et al. MPs-ACT, an assay to evaluate the procoagulant activity of microparticles. Clinical and Applied Thrombosis/Hemostasis. 29, 10760296231159374 (2023).
- Wang, J., et al. Brain-derived extracellular vesicles induce vasoconstriction and reduce cerebral blood flow in mice. Journal of Neurotrauma. 39 (11-12), 879-890 (2022).
- Tan, J., et al. Analysis of circulating microvesicles levels and effects of associated factors in elderly patients with obstructive sleep apnea. Frontiers in Aging Neuroscience. 13, 609282 (2021).
- Kubo, H.
- Gilani, S. I., Weissgerber, T. L., Garovic, V. D., Jayachandran, M.
- Pourakbari, R., Khodadadi, M., Aghebati-Maleki, A., Aghebati-Maleki, L., Yousefi, M. The potential of exosomes in the therapy of the cartilage and bone complications; emphasis on osteoarthritis. Life Science. 236, 116861 (2019).
- Shi, J., Gilbert, G. E. Lactadherin inhibits enzyme complexes of blood coagulation by competing for phospholipid-binding sites. Blood. 101 (7), 2628-2636 (2003).
- Dasgupta, S. K., Le, A., Chavakis, T., Rumbaut, R. E., Thiagarajan, P. Developmental endothelial locus-1 (Del-1) mediates clearance of platelet microparticles by the endothelium. Circulation. 125 (13), 1664-1672 (2012).
- Frey, B., Gaipl, U. S. The immune functions of phosphatidylserine in membranes of dying cells and microvesicles. Seminars in Immunopathology. 33 (5), 497-516 (2011).
- Rikkert, L. G., Coumans, F. A. W., Hau, C. M., Terstappen, L., Nieuwland, R. Platelet removal by single-step centrifugation. Platelets. 32 (4), 440-443 (2021).
- Chen, Y., et al. Association of placenta-derived extracellular vesicles with pre-eclampsia and associated hypercoagulability: a clinical observational study. BJOG. 128 (6), 1037-1046 (2021).
- Liu, Y., et al. The potential applications of microparticles in the diagnosis, treatment, and prognosis of lung cancer. Journal of Translational Medicine. 20 (1), 404 (2022).
- Piwkham, D., et al. The in vitro red blood cell microvesiculation exerts procoagulant activity of blood cell storage in Southeast Asian ovalocytosis. Heliyon. 9 (1), e12714 (2023).
- Patil, R., Ghosh, K., Shetty, S. A simple clot based assay for detection of procoagulant cell-derived microparticles. Clinical Chemistry and Laboratory Medicine. 54 (5), 799-803 (2016).
