Summary
Dit protocol onderzoekt het gebruik van extracellulair vesikel (EV)-rijk plasma als indicator van het stollingsvermogen van EV. EV-rijk plasma wordt verkregen door een proces van differentiële centrifugatie en daaropvolgende recalcificatie.
Abstract
De rol van extracellulaire blaasjes (EV) bij verschillende ziekten krijgt steeds meer aandacht, met name vanwege hun krachtige procoagulerende activiteit. Er is echter dringend behoefte aan een bedtest om de procoagulerende activiteit van EV in klinische omgevingen te beoordelen. Deze studie stelt het gebruik van trombine-activeringstijd van EV-rijk plasma voor als een maat voor de procoagulerende activiteit van EV. Gestandaardiseerde procedures werden gebruikt om natriumgecitreerd volbloed te verkrijgen, gevolgd door differentiële centrifugatie om EV-rijk plasma te verkrijgen. Het EV-rijke plasma en calciumchloride werden aan de testbeker toegevoegd en de veranderingen in visco-elasticiteit werden in realtime gevolgd met behulp van een analysator. De natuurlijke stollingstijd van EV-rijk plasma, aangeduid als EV-ACT, werd bepaald. De resultaten toonden een significante toename van EV-ACT wanneer EV werd verwijderd uit plasma verkregen van gezonde vrijwilligers, terwijl het significant afnam wanneer EV werd verrijkt. Bovendien werd EV-ACT aanzienlijk verkort in menselijke monsters van pre-eclampsie, heupfracturen en longkanker, wat wijst op verhoogde niveaus van plasma-EV en bevordering van hypercoagulatie in het bloed. Met zijn eenvoudige en snelle procedure is EV-ACT veelbelovend als test aan het bed voor het evalueren van de stollingsfunctie bij patiënten met hoge plasma-EV-spiegels.
Introduction
Trombose, die wordt veroorzaakt door hypercoagulabiliteit, speelt een belangrijke rol bij verschillende ziekten, waaronder hersentrauma1, pre-eclampsie2, tumoren3 en fractuurpatiënten4. Het mechanisme dat ten grondslag ligt aan hypercoagulabiliteit is complex en onlangs is de nadruk gelegd op de rol van extracellulaire blaasjes (EV) bij stollingsstoornissen. EV's zijn blaasjesachtige lichamen met een dubbellaagse structuur die loskomen van het celmembraan, variërend in diameter van 10 nm tot 1000 nm. Ze worden in verband gebracht met een verscheidenheid aan ziekteprocessen, met name stollingsstoornissen5. Verschillende onderzoeken hebben EV's geïdentificeerd als een veelbelovende voorspeller van het risico op trombose 6,7. De procoagulerende activiteit van EV's hangt af van de expressie van stollingsfactoren, voornamelijk weefselfactor (TF) en fosfatidylserine (PS). EV's met een robuuste procoagulerende activiteit verbeteren de katalytische efficiëntie van tenase en protrombinecomplex aanzienlijk, waardoor trombine-gemedieerd fibrinogeen en lokale trombose worden bevorderd8. Verhoogde niveaus van EV's en hun causale verband met hypercoagulabiliteit zijn waargenomen bij tal vanziekten9. Bijgevolg is het standaardiseren van de detectie van EV's en het rapporteren van hun procoagulerende activiteit een belangrijk onderzoeksgebied10.
Tot op heden zijn er slechts enkele commerciële kits beschikbaar voor het detecteren van de procoagulerende activiteit van EV's. De MP-Activity-test en de MP-TF-assay, geproduceerd door een commercieel bedrijf, zijn functionele tests die worden gebruikt om de procoagulerende activiteit van EV in plasma11 te meten. Deze tests maken gebruik van een principe dat vergelijkbaar is met dat van enzymgekoppelde immunosorbenttests om PS en TF op EV's te detecteren. Deze kits zijn echter duur en beperkt tot een paar onderzoeksinstellingen op hoog niveau. Het proces is complex en tijdrovend, waardoor het een uitdaging is om ze in klinische omgevingen te implementeren. Bovendien mengt een commercieel ontwikkelde procoagulerende fosfolipide (PPL)-assay PS-vrij plasma met testplasma, waarbij de stollingstijd wordt gemeten om kwantitatief niveaus van PS-positieve EV's te detecteren12. Deze tests richten zich echter voornamelijk op PS en TF op EV's, waarbij andere stollingsroutes over het hoofd worden gezien waarbij circulerende EV's betrokken kunnen zijn12.
Het plasmastollingssysteem is ingewikkeld en omvat zowel "onzichtbare" als "zichtbare" componenten, waaronder stollingsmiddelen, anticoagulantia, fibrinolytische systemen en EV's die in het plasma zijn gesuspendeerd. Fysiologisch zorgen deze componenten voor een dynamisch evenwicht. Bij pathologische aandoeningen dragen aanzienlijk verhoogde EV's in de circulatie bij aan hypercoagulabiliteit, met name bij patiënten met hersentrauma, pre-eclampsie, fracturen en verschillende soorten kanker13. Momenteel omvat de evaluatie van de stollingsstatus in klinische laboratoria voornamelijk het beoordelen van het stollingssysteem, het antistollingssysteem en fibrinolyse 14,15,16,17. Protrombinetijd, geactiveerde partiële tromboplastinetijd, trombinetijd en internationale genormaliseerde ratio worden vaak gebruikt om stollingsfactorniveaus in het stollingssysteem te evalueren18. Recente studies hebben echter aangetoond dat deze tests de hypercoagulabiliteit van bepaalde ziekten niet volledig weerspiegelen19. Andere testmethoden, zoals trombo-elastometrie (TEG), rotatie-TEG en sonoclotanalyse, meten visco-elastische veranderingen in volbloed20,21. Aangezien volbloedmonsters veel bloedcellen en bloedplaatjes bevatten, is de kans groter dat deze tests de stollingsstatus van het monster als geheel aangeven. Sommige onderzoekers hebben gerapporteerd over de rol van bloedcellen en bloedplaatjes bij procoagulantia-activiteit22,23. Een recente studie ontdekte ook dat eerdere stollingsfunctietests moeilijkheden ondervinden bij het detecteren van veranderingen in de procoagulerende activiteit van microdeeltjes24. Daarom is een hypothese geopperd dat de procoagulerende functie van EV's kan worden geëvalueerd door visco-elastische metingen van de geactiveerde stollingstijd (ACT) in EV-rijk plasma.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Het verzamelen van menselijke monsters werd goedgekeurd door de Medisch-Ethische Commissie van het Tianjin Medical University General Hospital. De inzameling van menselijk veneus bloed volgde strikt de richtlijn van de Nationale Gezondheidscommissie van China, namelijk WS/T 661-2020 Richtlijn voor het verzamelen van veneuze bloedmonsters. In het kort werd bloed afgenomen van gezonde personen met geïnformeerde toestemming van de voorste ader in het brachiale gebied, en de monsters werden gemengd met 3,2% natriumcitraat-anticoagulans in een verhouding van 1:9. Toen alleen monsters van natriumcitraatanticoagulantia werden verzameld, werd het eerste verzamelvat weggegooid. De verwerkingsstroom werd binnen 0,5 uur na monsterafname gestart. Volwassen gezonde proefpersonen werden gerekruteerd voor monsterafname na het verkrijgen van geïnformeerde toestemming. Uitsluitingscriteria voor patiënten waren: (1) een recente intravasculaire trombose, (2) lever- en nierfunctiestoornis, (3) hypertensie, hyperlipidemie, diabetes en andere chronische ziekten, (4) behandeling met aspirine of antistollingsmiddelen, (5) menstruatie en zwangerschap.
1. Isolatie van EV-rijk plasma
- Centrifugeer de monsters bij 120 x g gedurende 20 minuten bij kamertemperatuur om bloedcellen te verwijderen. Het supernatans is bloedplaatjesrijk plasma. Breng vervolgens het bovenste 1/2 van het supernatans over in een nieuwe centrifugebuis met een pipet.
- Centrifugeer het bloedplaatjesrijke plasma bij 1500 x g gedurende 20 minuten bij kamertemperatuur om de bloedplaatjes te verwijderen. Het supernatans is bloedplaatjesarm plasma. Breng vervolgens het bovenste 1/2 van het supernatans over in een nieuwe centrifugebuis.
- Centrifugeer het bloedplaatjesarme plasma bij 13000 x g gedurende 2 minuten bij kamertemperatuur om celresten te verwijderen. Het supernatans is EV-rijk plasma. Breng vervolgens het bovenste 1/2 van het supernatans over in een nieuwe centrifugebuis voor latere tests.
2. Detectie van EV-ACT van het monster door de analysator
- Schakel de stollingsanalysator in (zie Materiaaltabel) en verwarm het instrument voor op 37 °C. Installeer de wegwerpsonde en testbeker en start vervolgens de kwaliteitscontroleprocedure van de machine.
OPMERKING: Wanneer de waarde van het viskeuze weerstandssignaal op het scherm als een rechte lijn wordt weergegeven, betekent dit dat de detectie niet wordt verstoord en dat de kwaliteitscontrole van de status van de analysator gekwalificeerd is. De testprocedure kan worden gestart nadat de zelftest is gekwalificeerd. - Voer voorbeeldinformatie in het systeem in. Breng vervolgens 200 μL EV-rijk plasma over in de testbeker, gevolgd door 20 mM 170 μL calciumchloride. Klik op de startknop. De magnetische roerstaaf in de testbeker zal het monster en calciumchloride volledig mengen. Sluit het deksel en de sonde begint de verandering in de monsterweerstand te detecteren.
NOTITIE: Nadat de test is voltooid, zal de analysator automatisch "test voltooid" vragen. De tijd van EV-ACT wordt weergegeven en geregistreerd door het systeem. Het resultaat wordt uitgedrukt in de tijdseenheid "seconde". Gooi de sonde weg en test de beker.
3. Kwaliteitscontrole op basis van flowcytometrie van het EV-rijke plasmamonster
- EV's werden voor het eerst geïdentificeerd aan de hand van hun grootte (0,1-1 μm). Pas de parameters van de flowcytometer van tevoren aan en stel de "poort" van EV in met behulp van in de handel verkrijgbare polystyreenkorrels (0,5, 0,9 en 3,0 μm) (zie Materiaaltabel).
OPMERKING: Het parelmengsel bestaat uit fluorescerende bolletjes met verschillende diameters die het groottebereik van microvesikels (0,5 en 0,9 μm) en bloedplaatjes (0,9 μm en 3 μm) bestrijken. - Pas de spanning van de voorwaartse verstrooiing en de zijverstrooiing aan en zorg ervoor dat de microsferen van 0.9 μm in het juiste gebied vallen. Het EV-gebied kan worden getekend op basis van de diameter van de microbol.
- Breng 50 μL EV-rijk plasma over in de stroombuis, gevolgd door 450 μL gefilterde fosfaatbufferzoutoplossing. Meng de vloeistof grondig in de stroombuis. Detecteer ten slotte de monsters met behulp van flowcytometrie25.
- Gebruik Ultra Rainbow fluorescerende deeltjes (zie materiaaltabel) om het aantal EVs.In kort te kwantificeren, voeg 10 μL van de deeltjes toe aan het monster vóór de stroomdetectie en bereken de EV-concentratie met behulp van de volgende formule nadat de monsterdetectie is voltooid: 10.120 * EV (#) / (microbeads * volume) * verdunningsfactor26.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
De trombineactiveringstijd van EV-rijk plasma werd gemeten met behulp van een visco-elastische methodeanalysator voor plasmastollingstijdmeting. De machine bestaat uit vier hoofdcomponenten: een elektronische signaalomvormer, een sonde, een detectietank en een verwarmingselement (Figuur 1A,B). De sonde maakt gebruik van hoogfrequente en lage amplitude-oscillaties om veranderingen in de plasmaviscositeit te detecteren. Dagelijkse kwaliteitscontrole omvat voornamelijk luchtkwaliteitscontrole om de stabiliteit van het testplatform te beoordelen en eventuele fysieke verstoringen van de sonde te identificeren. Kwaliteitscontrole van de prestaties omvat testen met standaard viscositeitsolie om ervoor te zorgen dat de door de sonde gedetecteerde weerstandswaarde binnen het ingestelde bereik valt.
Na het verkrijgen van EV-rijk plasma werden EV's gemeten met behulp van flowcytometrie voor de kwaliteitscontrole van het monster. Ongekwalificeerde monsters vertonen een duidelijk cluster met een iets grotere deeltjesgrootte in de buurt van de "poort" van EV (Figuur 2A). Daarentegen laten gekwalificeerde EV-rijke steekproeven zien dat de meeste signalen als een enkele groep binnen de "poort" van EV vallen (Figuur 2B).
Om de EV-concentratie in EV-rijke plasmamonsters van gezonde vrijwilligers te evalueren, werd supersnelle centrifugatie (1.00.000 x g, 70 min) uitgevoerd. De resultaten toonden aan dat een toename van de EV-concentratie EV-ACT verkortte, terwijl een afname van de EV-concentratie EV-ACT verlengde (Figuur 3A). EV-ACT-tijd kan een negatieve correlatie vertonen met EV-niveaus. Verschillende monsters van klinische patiënten werden onderzocht en de bevindingen toonden aan dat EV-rijke plasmamonsters van patiënten met pre-eclampsie, heupfracturen en longkanker (van links naar rechts) significant kortere EV-ACT-tijden hadden in vergelijking met gezonde vrijwilligers (Figuur 3B).
Concluderend werd voorlopig een snelle en kosteneffectieve experimentele methode vastgesteld voor het detecteren van EV-procoagulantia, die veelbelovend is voor klinische toepassingen bij onderzoeken aan het bed.
Figuur 1: Het schematische diagram en het fysieke beeld van de stollingsanalysator. (A) en (B) vertegenwoordigen respectievelijk de belangrijkste componenten van de analysator en de bedieningsinstellingen. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 2: Representatieve flowcytometrie van EV in EV-rijk plasma. (A) Niet-gekwalificeerde EV-rijke plasmamonsters. (B) Gekwalificeerde EV-rijke plasmamonsters. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 3: Representatieve resultaten van de EV-ACT van het monster. (A) EV-ACT-resultaten na verwijdering van EV en EV-concentratie in EV-rijke monsters van gezonde vrijwilligers (van links naar rechts, suspensie van sediment na supercentrifugatie, EV-rijk plasma en supernatans na ultracentrifugatie). (B) EV-ACT-resultaten van EV-rijke monsters van gezonde vrijwilligers en patiënten (van links naar rechts, pre-eclampsie, heupfractuur, longkanker en gezonde vrijwilliger). Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
In deze studie werd de bereiding van EV-rijk plasma beschreven en werd de rationaliteit van de methode geverifieerd met behulp van flowcytometrie. Vervolgens werden de opnieuw verkalkte plasmamonsters geanalyseerd op ACT-tijd met behulp van een stolselanalysator op basis van visco-elasticiteitsprincipes24. Zoals te zien is in figuur 3A, bleek de concentratie EV's verkregen door ultracentrifugatie de EV-ACT-tijd te verkorten, terwijl het supernatans na ultracentrifugatie, dat de EV-niveaus had verlaagd, langere EV-ACT-tijden vertoonde. Deze bevindingen suggereren een nauwe relatie tussen EV-ACT-resultaten en EV-niveaus. In figuur 3B werden de EV-ACT van plasmamonsters van patiënten met pre-eclampsie, heupfracturen en longkanker vergeleken met gezonde vrijwilligers, wat significant kortere EV-ACT-tijden in de ziektegroepen aan het licht bracht. Eerdere rapporten hebben voor deze ziekten verhoogde niveaus van stollingsbevorderende EV's in plasma aangetoond27,28,29. Er moet echter worden opgemerkt dat andere factoren die in plasma aanwezig zijn, de EV-ACT-uitkomsten kunnen beïnvloeden, en verder onderzoek naar deze beïnvloedende factoren is gerechtvaardigd. Deze test stelt voor om de cruciale rol van EV's in de hypercoaguleerbare toestand van bepaalde ziekten te erkennen en pakt het gebrek aan een goedkope en snelle detectiemethode voor EV-procoagulantiaactiviteit aan.
Binnen het geïsoleerde bloedmonstersysteem kunnen stollingsgerelateerde stoffen worden onderverdeeld in bloedcellen, bloedplaatjes, celmetabolieten (voornamelijk EV's) en andere "onzichtbare" componenten (zoals stollingsfactoren en antistollingsfactoren)30,31,32. Gezien de complexiteit van het stollingsmechanisme werd het detectiesysteem vereenvoudigd tot EV-rijk plasma om interferentie van andere factoren te minimaliseren. Belangrijke stappen in dit proces zijn onder meer het voorkomen van het ontstaan van kunstmatige EV's tijdens de monsterverwerking en het minimaliseren van besmetting met bloedplaatjes. Daarom is het noodzakelijk om de differentiële centrifugatieprocedure binnen 0,5 uur te starten en de detectie binnen 2 uur na monsterafname te voltooien. Eerdere studies hebben aangetoond dat het gebruik van voldoende hoge middelpuntvliedende kracht en het vasthouden van de bovenste helft van het supernatans de besmetting met bloedplaatjes effectief kanverminderen33. Flowcytometrie werd gebruikt om resterende bloedplaatjes in EV-rijk plasma te detecteren, wat hun zeer lage aanwezigheid bevestigde. Niet-gekwalificeerde monsters zijn voornamelijk het gevolg van besmetting met bloedplaatjes en celfragmentatie veroorzaakt door het verwerkingsproces. Besmetting met bloedplaatjes wordt gekenmerkt door de aanwezigheid van deeltjes buiten de "poort" van EV's, terwijl celfragmentatie verschijnt als een duidelijk cluster binnen de "poort" van EV's.
Recente studies hebben significant verhoogde niveaus van plasma-EV's bij bepaalde ziektenbevestigd34,35. Deze EV's bevorderen voornamelijk de stolling door de aanwezigheid van fosfatidylserine (PS) en weefselfactor (TF) op hun oppervlak. Daarom is de ACT-tijd van EV-rijk plasma grotendeels afhankelijk van het niveau van stollingsmiddel EV's. Een beperking van deze test is de noodzaak om ervoor te zorgen dat de niveaus van stollingsfactoren niet significant veranderen in de mate dat ze de stollingstijd beïnvloeden tijdens EV-ACT-analyse. Studies naar veranderingen in stollingsfactorniveaus na het begin van de ziekte zijn echter relatief schaars en hun effect op EV-ACT moet in verder onderzoek worden geëvalueerd. Bovendien kan overmatig gebruik van anticoagulantia de resultaten van EV-ACT aanzienlijk beïnvloeden, dus deze methode mag niet worden gebruikt tijdens een dergelijke behandeling.
Er bestaan verschillende methoden voor het bepalen van procoagulante EV's, elk met zijn voor- en nadelen. Piwkham et al. evalueerden de activiteit van EV-procoagulantia door EV-suspensie te mengen met normaal plasma en het tijdstip van bloedstolselvorming in een waterbad bij 37 °C36 te observeren. Hoewel deze methode eenvoudig is, kan de subjectieve observatie van de stolselvormingstijd leiden tot resultaatvariaties tussen verschillende waarnemers. Patil et al. gebruikten een interne gestandaardiseerde stollingstest voor het testen van procoagulantmicrodeeltjes met behulp van Russell-addergif op een semi-geautomatiseerde coagulometer37. Deze detectiemethode maakt gebruik van semi-automatische apparatuur en biedt een hoge efficiëntie en eenvoud. De toevoeging van Russell-addergif om factor X te activeren, gaat echter voorbij aan de aanwezigheid van andere anticoagulantia in plasma, zoals lactadherine-eiwit. Deze methode beoordeelt de resultaten op basis van de balans tussen procoagulantia EV's en antistollingscomponenten in het plasma, wat een nauwkeurigere weerspiegeling geeft van de stollingsfunctie van het plasmamonster.
Bestaande stollingsfunctietests richten zich voornamelijk op de activeringstijd van trombine in volbloed of bloedplaatjesrijk bloed, of detecteren tekorten in stollingsfactoren24. Het ontwikkelen van een testmethode voor de activiteit van EV-procoagulantia zal helpen de rol van EV's bij ziekte en toekomstige behandelingen op te helderen. Het eenvoudige monstervoorbereidingsproces, waarbij alleen CaCl2 wordt toegevoegd, maakt de test handig voor clinici om snel de stollingsfunctiestatus van patiënten te bepalen. De EV-ACT-test is eenvoudig uit te voeren, met resultaten die binnen 10-15 minuten beschikbaar zijn, waardoor deze zeer geschikt is voor ontwikkeling als test aan het bed. Eerdere studies hebben voorlopig toepassingen van EV-ACT geïdentificeerd bij pre-eclampsie, tumoren en fracturen. Toekomstig onderzoek zal de klinische toepassingsmogelijkheden van EV-ACT blijven onderzoeken.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Alle auteurs verklaarden dat er geen sprake is van potentiële belangenconflicten.
Acknowledgments
Dit werk werd ondersteund door subsidies van de National Natural Science Foundation of China, subsidie nr. 81930031, 81901525. Daarnaast danken we Tianjin Century Yikang Medical Technology Development Co., Ltd. voor het verstrekken van machines en technische begeleiding.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| AccuCount Ultra Rainbow Fluorescent Particles | 3.8 microm; Spherotech, Lake Forest, IL, USA | For quantitative detection of MP | |
| Calcium chloride | Werfen (china) | 0020006800 | 20 mM |
| Century Clot analyzer | Tianjin Century Yikang Medical Technology Development Co., Ltd | The principle is to measure plasma viscosity by viscoelastic method | |
| Disposable probe and test cup | Tianjin Century Yikang Medical Technology Development Co., Ltd | ||
| LSR Fortessa flow cytometer | BD, USA | Used to detect MP | |
| Megamix polystyrene beads | Biocytex, Marseille, France | 7801 | The Megamix consists of a mixture of microbeads of selected diameters: 0.5 µm, 0.9 µm and 3 µm. |
References
- Zhang, J., Zhang, F., Dong, J. F. Coagulopathy induced by traumatic brain injury: systemic manifestation of a localized injury. Blood. 131 (18), 2001-2006 (2018).
- Han, C., Chen, Y. Y., Dong, J. F. Prothrombotic state associated with preeclampsia. Current Opinion in Hematology. 28 (5), 323-330 (2021).
- Campello, E., Bosch, F., Simion, C., Spiezia, L., Simioni, P. Mechanisms of thrombosis in pancreatic ductal adenocarcinoma. Best Practice & Research Clinical Haematology. 35 (1), 101346 (2022).
- You, D., et al. Identification of hypercoagulability with thrombelastography in patients with hip fracture receiving thromboprophylaxis. Canadian Journal of Surgery. 64 (3), E324-E329 (2021).
- Shah, R., Patel, T., Freedman, J. E. Circulating extracellular vesicles in human disease. The New England Journal of Medicine. 379 (10), 958-966 (2018).
- Zang, X., et al. Hepatocyte-derived microparticles as novel biomarkers for the diagnosis of deep venous thrombosis in trauma patients. Clinical and Applied Thrombosis/Hemostasis. 29, 10760296231153400 (2023).
- Chen, Y., et al. Annexin V(-) and tissue factor(+) microparticles as biomarkers for predicting deep vein thrombosis in patients after joint arthroplasty. Clinica Chimica Acta. 536, 169-179 (2022).
- Wang, C., Yu, C., Novakovic, V. A., Xie, R., Shi, J. Circulating microparticles in the pathogenesis and early anticoagulation of thrombosis in COVID-19 with kidney injury. Frontiers in Cell and Developmental Biology. 9, 784505 (2021).
- Lacroix, R., Dubois, C., Leroyer, A. S., Sabatier, F., Dignat-George, F. Revisited role of microparticles in arterial and venous thrombosis. Journal of Thrombosis and Haemostasis. 11 (Suppl 1), 24-35 (2013).
- Cointe, S., et al. Standardization of microparticle enumeration across different flow cytometry platforms: results of a multicenter collaborative workshop. Journal of Thrombosis and Haemostasis. 15 (1), 187-193 (2017).
- Ayers, L., Harrison, P., Kohler, M., Ferry, B. Procoagulant and platelet-derived microvesicle absolute counts determined by flow cytometry correlates with a measurement of their functional capacity. Journal of Extracellular Vesicles. 3, 25348 (2014).
- Mooberry, M. J., et al. Procoagulant microparticles promote coagulation in a factor XI-dependent manner in human endotoxemia. Journal of Thrombosis and Haemostasis. 14 (5), 1031-1042 (2016).
- Zhao, Z., et al. Cellular microparticles and pathophysiology of traumatic brain injury. Protein & Cell. 8 (11), 801-810 (2017).
- Bolliger, D., Tanaka, K. A. Point-of-care coagulation testing in cardiac surgery. Seminars in Thrombosis and Hemostasis. 43 (4), 386-396 (2017).
- Ganter, M. T., Hofer, C. K. Coagulation monitoring: current techniques and clinical use of viscoelastic point-of-care coagulation devices. Anesthesia & Analgesia. 106 (5), 1366-1375 (2008).
- Samuelson, B. T., Cuker, A., Siegal, D. M., Crowther, M., Garcia, D. A. Laboratory assessment of the anticoagulant activity of direct oral anticoagulants: a systematic review. Chest. 151 (1), 127-138 (2017).
- Maier, C. L., Sniecinski, R. M. Anticoagulation monitoring for perioperative physicians. Anesthesiology. 135 (4), 738-748 (2021).
- Tuktamyshov, R., Zhdanov, R. The method of in vivo evaluation of hemostasis: Spatial thrombodynamics. Hematology. 20 (10), 584-586 (2015).
- Tsantes, A. G., et al. Higher coagulation activity in hip fracture patients: A case-control study using rotational thromboelastometry. International Journal of Laboratory Hematology. 43 (3), 477-484 (2021).
- Premkumar, M., et al. COVID-19-related dynamic coagulation disturbances and anticoagulation strategies using conventional D-dimer and point-of-care Sonoclot tests: a prospective cohort study. BMJ Open. 12 (5), e051971 (2022).
- Sakai, T. Comparison between thromboelastography and thromboelastometry. Minerva Anestesiologica. 85 (12), 1346-1356 (2019).
- Yan, M., et al. TMEM16F mediated phosphatidylserine exposure and microparticle release on erythrocyte contribute to hypercoagulable state in hyperuricemia. Blood Cells, Molecules and Diseases. 96, 102666 (2022).
- Yu, H., et al. Hyperuricemia enhances procoagulant activity of vascular endothelial cells through TMEM16F regulated phosphatidylserine exposure and microparticle release. The FASEB Journal. 35 (9), e21808 (2021).
- Gao, Y., et al. MPs-ACT, an assay to evaluate the procoagulant activity of microparticles. Clinical and Applied Thrombosis/Hemostasis. 29, 10760296231159374 (2023).
- Wang, J., et al. Brain-derived extracellular vesicles induce vasoconstriction and reduce cerebral blood flow in mice. Journal of Neurotrauma. 39 (11-12), 879-890 (2022).
- Tan, J., et al. Analysis of circulating microvesicles levels and effects of associated factors in elderly patients with obstructive sleep apnea. Frontiers in Aging Neuroscience. 13, 609282 (2021).
- Kubo, H.
- Gilani, S. I., Weissgerber, T. L., Garovic, V. D., Jayachandran, M.
- Pourakbari, R., Khodadadi, M., Aghebati-Maleki, A., Aghebati-Maleki, L., Yousefi, M. The potential of exosomes in the therapy of the cartilage and bone complications; emphasis on osteoarthritis. Life Science. 236, 116861 (2019).
- Shi, J., Gilbert, G. E. Lactadherin inhibits enzyme complexes of blood coagulation by competing for phospholipid-binding sites. Blood. 101 (7), 2628-2636 (2003).
- Dasgupta, S. K., Le, A., Chavakis, T., Rumbaut, R. E., Thiagarajan, P. Developmental endothelial locus-1 (Del-1) mediates clearance of platelet microparticles by the endothelium. Circulation. 125 (13), 1664-1672 (2012).
- Frey, B., Gaipl, U. S. The immune functions of phosphatidylserine in membranes of dying cells and microvesicles. Seminars in Immunopathology. 33 (5), 497-516 (2011).
- Rikkert, L. G., Coumans, F. A. W., Hau, C. M., Terstappen, L., Nieuwland, R. Platelet removal by single-step centrifugation. Platelets. 32 (4), 440-443 (2021).
- Chen, Y., et al. Association of placenta-derived extracellular vesicles with pre-eclampsia and associated hypercoagulability: a clinical observational study. BJOG. 128 (6), 1037-1046 (2021).
- Liu, Y., et al. The potential applications of microparticles in the diagnosis, treatment, and prognosis of lung cancer. Journal of Translational Medicine. 20 (1), 404 (2022).
- Piwkham, D., et al. The in vitro red blood cell microvesiculation exerts procoagulant activity of blood cell storage in Southeast Asian ovalocytosis. Heliyon. 9 (1), e12714 (2023).
- Patil, R., Ghosh, K., Shetty, S. A simple clot based assay for detection of procoagulant cell-derived microparticles. Clinical Chemistry and Laboratory Medicine. 54 (5), 799-803 (2016).
