Optik Görüntüleme ile non-invaziv Algılama için Floresan Boyalar Kök Hücreler Etiketleme
Summary
Bu video floresan boya ile insan embriyonik kök hücreler ve mezenkimal kök hücreler etiketleme teknikleri gösterir. Bu teknik, in vivo olarak bir optik görüntüleme ile nakledilen kök hücrelerin izleme ve floresan mikroskobu ile histopatolojik korelasyon kullanılabilir.
Abstract
Optik görüntüleme (OI), yeni kök hücre tabanlı tedaviler in vivo olarak izlenmesi için kolay, hızlı ve ucuz bir araçtır. Teknik floresan boya etiketli hücreleri belirli hedef organları veya patolojiler kendi birikimi ve görselleştirme sonraki intravenöz enjeksiyon ile kök hücrelerinin ex vivo etiketleme dayanmaktadır. Sunulan tekniği (C67H103CIN2O3S) ve biz insan embriyonik kök hücreleri (hESC) etiket nasıl FDA floresan boya İndosiyanin Yeşil (ICG) onaylı lipofilik floresan boya ile basit inkübasyon insan mezenkimal kök hücreleri (hMSC) etiket nasıl gösterir. Fosfolipid hücre zarı bilayeri genelinde lypophilic boya bağlılık ve difüzyon yoluyla alımı mekanizması. Hücreler serum içeren medya inkübasyon karşı serum serbest medya boya ile inkübe edilir etiketleme verimliliği artırıldı. Ayrıca, transfeksiyon ajan Protamin Sülfat ek kontrast madde alımını önemli ölçüde artırır.
Protocol
Discussion
OI floresan algılama göre, görece yeni bir görüntüleme tekniğidir. OI radyotracer tabanlı görüntüleme teknikleri gibi hassas, ancak herhangi bir ışınlama maruz kalma ile ilişkili değildir. OI, böylece hedef site hücre göçü içgörü sağlayan non-invazif ve tekrarlayan izleme hücreleri etkili bir araç sağlar. Tekniğin önemli bir sınırlama in vivo floresan probları sınırlı doku penetrasyonu. Böylece, cilt yüzeyinden 5-10 cm daha derin dokularda bir izleme birikimi, tespit olmayabilir. Mevcut klinik uygulamal…
Acknowledgements
Bu proje için California Rejeneratif Tıp Enstitüsü bir Leon J. Thal TOHUM hibe ile desteklendi. Tobias Henning, Alman Araştırma Birliği (DFG, HE 4578/1-2) nakit Araştırma tarafından finanse edildi. Biz insan embriyonik kök hücre kültürü onun tavsiye Juanito Meneses minnetle kabul etmek istiyorum.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Indocyanine Green (IR-125) | Reagent | Fisher Scientific | AC41254-1000 | |
| DMSO | Reagent | Sigma | D-2650 | |
| D-MEM High Glucose | Reagent | Sigma | D5648 | |
| Gelatin | Reagent | Sigma | G1890 | Dilute to final concentration of 0.1% in PBS |
| PBS, Mg and Ca free | Reagent | GIBCO | 14190-144 | |
| Trypsin-EDTA 0.05% | Reagent | Invitrogen | 25300-120 | |
| Trypsin-EDTA 0.25% | Reagent | Invitrogen | 25200-114 | |
| FCS, characterized | Reagent | Hyclone | SH30071.03 | |
| Cell Strainer (40 μm Nylon) | Reagent | BD Falcon | 352340 | |
| DiD | Reagent | Molecular Probes | V-22887 | |
| Knockout DMEM | Reagent | GIBCO | 10829018 | |
| Knockout Serum Replacer | Reagent | GIBCO | 10828028 | |
| b-Mercaptoethanol | Reagent | Sigma | 7522 | |
| Non-essential Amino Acids | Reagent | GIBCO | 11140050 | |
| FGF-2 | Reagent | R&D Systems | 233-FB-025 | |
| Glutamine 200mM | Reagent | GIBCO | 25030081 | |
| Penicillin/Streptomycin | Reagent | GIBCO | 15140-122 | |
| Protamine Sulfate | Reagent | American Pharmaceutical Partners Inc. |
References
- Daldrup-Link, H. E., Rudelius, M., Metz, S., Piontek, G., Settles, M., Pichler, B., Heinzmann, U., Weinmann, H. J., Schlegel, J., Link, T. M., Rummeny, E. J., Oostendorp, R. A. J. Stem cell tracking with Gadophrin-2 — a bifunctional contrast agent for MR imaging, optical imaging and fluorescence microscopy. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 31, 1312-1321 (2004).
- Simon, G. H., Daldrup-Link, H. E., Kau, J., Metz, S., Schlegel, J., Piontek, G., Saborowski, O., Demos, S., Duyster, J., Pichler, B. J. Optical imaging of experimental arthritis using allogeneic leukocytes labeled with a near-infrared fluorescent probe. Eur J Nucl Med & Mol Imaging. 33, 998-1006 (2006).
- Sutton, E., Henning, T., Pichler, B., Bremer, C., Daldrup-Link, H. E. Cell Tracking with Optical imaging. Eur Radiol. 2, 350-357 (2003).
- Funovics, M. A., Alencar, H., Su, H. S., Khazaie, K., Weissleder, R., Mahmood, U. Miniaturized multichannel near infrared endoscope for mouse imaging. Mol Imaging. 2, 350-357 (2003).
