Compartmented 문화의 도설 루트 신경의 뉴런의 준비 및 유지 관리
Summary
여기서 우리는 지느러미 루트 신경의 culturing 감각 뉴런에 compartmented 회의소 준비 및 유지 관리의 기법을 설명합니다.
Abstract
뉴런은 멀리 대상 – 파생 성장 요소의 연결을 생존과 기능에 필요한 대상 조직을 신경을 분포시키다하는 세포 본체에서 제거됩니다 axonal 프로세스를 확장합니다. Neurotrophins은 특히 감각 뉴런을 innervating의 생존과 분화를 유지하기 위해 필요하지만, 이러한 목표 – 파생 neurotrophins은 innervating 뉴런의 세포 기관에 의사 소통 방법의 문제는 30 년 넘게 적극적인 연구 영역을했습니다. neurotrophin 신호가 세포 신체에 도달하는 방법 중 가장 일반적으로 인정 모델은 신호가 축삭을 따라 retrogradely이 신호를 운반 endosomes 것을 제안합니다. 역행 수송을 연구하기 위해, 문화 시스템은 원래 세포 시신은 axons으로부터 격리하는 로버트 Campenot에 의해 고안되었다. culturing 감각 뉴런의 recapitulates 대상 – 파생 neurotrophins의 생체내 다음 릴리스에서 발생하는 신경 세포 단말기의 선택적 자극에 대해 이러한 compartmented 회의소 준비의 기술. 장거리 미세 소관에 의존 역행 수송을 필요로 역행 신호 이벤트가 neurodegenerative 장애의 치료에 중요한 의미를했습니다.
Protocol
Discussion
이 비디오에서는, 우리는 culturing의 DRG의 뉴런에 사용하기 위해 compartmented 회의소를 준비하고 유지하는 방법을 증명하고있다. 제대로 완료,이 시스템은 neurotrophins 오래 axons에 걸쳐 신호를하는 메커니즘을 연구하기 위해 축삭에서 세포 기관의 분리 수 있습니다. 구획 사이에 유체 절연이 있기 때문에, 그것은 다른 구획에 영향을받지 않고 한 구역의 선택적 자극이나 치료 수 있습니다. Compartmented 챔버 문화는 우수…
Acknowledgements
우리는 도움이 토론 Katharina Cosker과 스테파니 코세인 감사하고 싶습니다.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| collagen | Reagent | BD Biosciences | 354249 | |
| N2-methylcellulose 400CPS | Reagent | Sel-Win Chemicals | ||
| Teflon divider | Other | Tyler Research | CAMP10 | many other types of dividers are available |
| Pin rake | Tool | Tyler Research | Camp-PR | |
| Grease loader | Tool | Tyler Research | Camp-GLSS | |
| DMEM | Reagent | Fisher | MT10017CV | |
| NGF | Reagent | Peprotech | 450-01 | |
| BDNF | Reagent | Peprotech | 450-02 | |
| High vacuum grease | Reagent | Fisher | 14-635-5D | |
| AraC | Reagent | Sigma | C-1768 | |
| 23 gauge luer stub adapter | Tool | Fisher | 427565 | |
| 90° angle hemostats | Tool | Roboz | RS-7035 |
References
- Campenot, R. B. Independent Control of the Local Environment of Somas and Neurites. Methods in Enzymology. 58, 302-307 (1979).
- Watson, F. L., et al. Neurotrophins use the Erk5 pathway to mediate a retrograde survival response. Nature Neuroscience. 4, 981-988 (2001).
- Heerssen, H. M., et al. Dynein motors transport activated Trks to promote survival of target-dependent neurons. Nature Neuroscience. 7, 596-603 (2004).
- Taylor, A. M., et al. A microfluidic culture platform for CNS axonal injury, regeneration and transport. Nature Methods. 2, 599-605 (2006).
- Park, J. W., et al. Microfluidic culture platform for neuroscience research. Nat Protoc. 4, 2128-2136 (2006).
- Ure, D. R., et al. Retrograde transport and steady-state distribution of 125I-nerve growth factor in rat sympathetic neurons in compartmented cultures. J Neuroscience. 4, 1282-1290 (1997).
