Préparation et entretien des neurones ganglions de la racine dorsale dans les cultures à compartiments
Summary
Nous décrivons ici la technique de la préparation et l'entretien des chambres compartimentées pour les neurones sensoriels en culture des ganglions de la racine dorsale.
Abstract
Neurones étendre les processus axonal qui sont loin du corps cellulaire pour innerver les tissus cibles, où la cible des facteurs de croissance dérivés sont nécessaires pour la survie des neurones et la fonction. Les neurotrophines sont spécifiquement requis pour maintenir la survie et la différenciation des neurones sensoriels innervant mais la question de savoir comment ces neurotrophines cibles dérivées de communiquer vers le corps cellulaire des neurones innervant a été un domaine de recherche actif depuis plus de 30 ans. Le modèle le plus communément acceptée de la façon dont les signaux atteignent neurotrophine du corps cellulaire propose que la signalisation endosomes réaliser ce signal rétrograde le long de l'axone. Afin d'étudier le transport rétrograde, un système de culture a été initialement conçu par Robert Campenot, dans laquelle les corps cellulaires sont isolés de leurs axones. La technique de préparation de ces chambres compartimentées pour les récapitule en culture des neurones sensoriels de la stimulation sélective des terminaisons neuronales qui se produit dans le communiqué suivant in vivo de cibles dérivées de neurotrophines. Rétrograde événements de signalisation qui exigent longue portée transport rétrograde microtubules dépendants ont des implications importantes pour le traitement des troubles neurodégénératifs.
Protocol
Discussion
Dans cette vidéo, nous avons montré comment préparer et entretenir les chambres compartimentées pour une utilisation dans les neurones DRG culture. Fait correctement, ce système permet la séparation des corps de la cellule de l'axone, afin d'étudier les mécanismes par lesquels les neurotrophines signal à travers longs axones. Comme il est l'isolement fluidique entre les compartiments, il permet une stimulation sélective ou le traitement d'un compartiment, sans les autres compartiments touchés. Cultures de chambre …
Acknowledgements
Nous tenons à remercier Katharina Cosker et Stephanie Courchesne pour les discussions utiles.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| collagen | Reagent | BD Biosciences | 354249 | |
| N2-methylcellulose 400CPS | Reagent | Sel-Win Chemicals | ||
| Teflon divider | Other | Tyler Research | CAMP10 | many other types of dividers are available |
| Pin rake | Tool | Tyler Research | Camp-PR | |
| Grease loader | Tool | Tyler Research | Camp-GLSS | |
| DMEM | Reagent | Fisher | MT10017CV | |
| NGF | Reagent | Peprotech | 450-01 | |
| BDNF | Reagent | Peprotech | 450-02 | |
| High vacuum grease | Reagent | Fisher | 14-635-5D | |
| AraC | Reagent | Sigma | C-1768 | |
| 23 gauge luer stub adapter | Tool | Fisher | 427565 | |
| 90° angle hemostats | Tool | Roboz | RS-7035 |
References
- Campenot, R. B. Independent Control of the Local Environment of Somas and Neurites. Methods in Enzymology. 58, 302-307 (1979).
- Watson, F. L., et al. Neurotrophins use the Erk5 pathway to mediate a retrograde survival response. Nature Neuroscience. 4, 981-988 (2001).
- Heerssen, H. M., et al. Dynein motors transport activated Trks to promote survival of target-dependent neurons. Nature Neuroscience. 7, 596-603 (2004).
- Taylor, A. M., et al. A microfluidic culture platform for CNS axonal injury, regeneration and transport. Nature Methods. 2, 599-605 (2006).
- Park, J. W., et al. Microfluidic culture platform for neuroscience research. Nat Protoc. 4, 2128-2136 (2006).
- Ure, D. R., et al. Retrograde transport and steady-state distribution of 125I-nerve growth factor in rat sympathetic neurons in compartmented cultures. J Neuroscience. 4, 1282-1290 (1997).
