כאן אנו מתארים את הטכניקה של הכנת ושמירה לתאי מחולקים עבור נוירונים culturing חושית של הגרעינים השורש הגבי.
Abstract
נוירונים להאריך תהליכים axonal כי הם רחוקים בגוף התא innervate רקמות היעד, שם היעד הנגזרות גורמי גדילה נדרשים להישרדות תפקוד עצבי ו. Neurotrophins נדרשים במיוחד כדי לשמור על בידול של הישרדות innervating עצב סנסורי אבל השאלה כיצד אלה יעד הנגזרות neurotrophins לתקשר אל גוף התא של הנוירונים innervating כבר על שטח של מחקר פעיל במשך 30 שנים. המודל המקובל בדרך כלל של כמה אותות neurotrophin להגיע לגוף התא מציעה כי איתות endosomes לשאת אות retrogradely לאורך האקסון. כדי ללמוד התחבורה מדרדר, מערכת התרבות פותחה במקור על ידי רוברט Campenot, שבו גופי התא מבודדים האקסונים שלהם. הטכניקה של הכנת אלה מחולקים לתאי עבור culturing נוירונים משחזר את הגירוי החושי סלקטיבית של מסופי נוירון המתרחשת בעקבות שחרור vivo של יעד הנגזרות neurotrophins. אירועים איתות מדרדר הדורשים ארוכי טווח תחבורה תלויה microtubule מדרדר להיות השלכות חשובות בטיפול בהפרעות ניוון עצבי.
Protocol
הכנה של ריאגנטים ציפוי קולגן: קולגן מעיל P35 רקמה תרבות צלחות ומכניסים לתנור על 37 מעלות צלזיוס למשך 2 ימים לפני שמון חוצצים. הריכוז הסופי של קולגן צריך להיות 0.71 מ"ג / מ"ל מדולל ב .001 N HCl. לאחר מכן, הוסף 1 מ"ל של …
Discussion
בסרטון הזה, אנחנו הוכיחו כיצד להכין ולתחזק לתאי מחולקים לשימוש נוירונים DRG culturing. בוצע כהלכה, מערכת זו מאפשרת הפרדה בין גוף התא של האקסון כדי ללמוד על המנגנונים שבאמצעותם neurotrophins אותות מעבר אקסונים ארוכים. מאז יש בידוד fluidic בין התאים, היא מאפשרת גירוי טיפול סלקטיבי או של תא אחד ללא…
F. Pazyra-Murphy, M., A. Segal, R. Preparation and Maintenance of Dorsal Root Ganglia Neurons in Compartmented Cultures. J. Vis. Exp. (20), e951, doi:10.3791/951 (2008).