Burada dorsal kök gangliyon kültür duyusal nöronlar için kompartman odaları hazırlanması ve bakımı tekniği açıklar.
Abstract
Nöronlar hedef kaynaklı büyüme faktörleri nöronal hayatta kalma ve işlevi için gerekli olan hedef dokular, çok innerve hücre gövdesi çıkarılır aksonal süreçleri uzatmak. Nörotrofinler özellikle duyusal nöronlar innerve hayatta ve farklılaşma korumak için gereklidir, ancak bu hedef elde edilen nörotrofinler innerve nöron hücre gövdesi nasıl iletişim soru, 30 yılı aşkın bir süredir aktif bir araştırma alanı olmuştur. Nörotrofin sinyalleri hücre gövdesinden nasıl ulaşacağını en yaygın kabul gören model, sinyalizasyon, akson boyunca retrograd bu sinyali taşımak endosomes önermektedir. Retrograd taşıma incelemek üzere, bir kültür sistemi, aslında hücre gövdeleri aksonlar izole edildiği Robert Campenot tarafından icat edildi. Kültür duyusal nöronlar özetlediği hedef kaynaklı nörotrofinler in vivo aşağıdaki sürümde oluşan nöron terminalleri seçici uyarılma için bu kompartman odaları hazırlama tekniği. Uzun menzilli mikrotübül bağımlı retrograd taşıma gerektiren Retrograd sinyalleme olaylarını nörodejeneratif hastalıkların tedavisi için önemli etkileri vardır.
Protocol
Reaktiflerin hazırlanması Kollajen kaplama: kollajen kat p35 doku kültürü plakaları ve bir fırında 37 ° ° C bölücüler yağlama 2 gün önce. Kollajen nihai konsantrasyonu 0,71 mg / ml 0,001 N HCl seyreltilmiş olmalıdır. Daha sonra, plaka başına 1 ml karışımı ekleyin. Gres yükleyiciler: gres yükleyici doldurmak için, 60 ml şırınga Corning vakum gres yağı ile dolu olmalıdır. Gres yükleyici doldurmak için 45 dakika otoklavda sonra folyo ile sarın ve ?…
Discussion
Bu video, kompartman odaları kültür DRG nöronlar kullanmak için nasıl hazırlamak ve sürdürmek göstermiştir. Düzgün yapılmazsa, bu sistem hangi nörotrofinler uzun aksonlar boyunca sinyal mekanizmaları araştırmak için akson hücre gövdesinden ayrılması sağlar. Bölmeleri arasında akışkan izolasyon olmadığı için, diğer bölmeleri etkilenen olmadan bir kompartmanı seçici uyarılma veya tedavi için izin verir. Kompartman odasına kültürlerin üstün servikal ganglionlar, retina ganglion nöronlar, ve kortikal …
Acknowledgements
Biz, Katharina Cosker ve Stephanie Courchesne yararlı tartışmalar için teşekkür etmek istiyorum.
F. Pazyra-Murphy, M., A. Segal, R. Preparation and Maintenance of Dorsal Root Ganglia Neurons in Compartmented Cultures. J. Vis. Exp. (20), e951, doi:10.3791/951 (2008).