Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Mısır unu ortamı içeren bir şişede belirli sayıda erkek ve dişi Drosophila melanogaster meyve sineklerini cohousing ile başlayın. Bu, tutarlı bir yavru yoğunluğu sağlar.
Dişi sineklerin yumurta bırakmasına izin verin. Sonra yetişkin sinekleri çıkarın. Yumurtalar larva, pupa ve son olarak 10 gün içinde yetişkin sinekler haline gelecek. Kohortlarından daha erken ortaya çıkan yeni sinekler 9 günden önce çıkarılmalıdır. Şimdi senkronize olmuş sinekleri kontrol ve deneysel koşullar için gruplara bölün. Erkek ve dişi sinekleri bir arada bırakmak çiftleşmeye izin verir, ömrü etkileyen bir değişkeni ortadan kaldırır.
Birkaç gün sonra, sinekleri cinsiyete göre gruplara ayırın. İlgili deneysel duruma eşit sayıda sinek yerleştirin. Her üç günde bir, canlı sinekleri yeni bir şişeye aktarın ve ölü sineklerin sayısını kaydedin. Tüm sinekler ölene kadar bu işlemi tekrarlayın.
En az üç çoğaltma deneyinden sonra, her durum için ortalama hayatta kalma eğrileri oluşturmak için gün geçtikten sonra hayatta kalan sineklerin ortalama yüzdesini çizin. Bu örnekte, endokrin bozucu kimyasallarla tedavi edilen kohortlar için hayatta kalma eğrilerinin nasıl üreteceğini göreceğiz.
- Ömür protokolünde, ilk olarak, her biri 10 mililitre mısır unu yiyeceği ile doldurulmuş sekiz kadın ve dört erkek ile 20 şişe kurun ve 25 santigrat derecede barındırın. Dört gün sonra, sinekleri atın ve şişeleri inkübatöre geri yerleştirin. Günün öğleden sonra 9' unda, yeni ortaya çıkan tüm sinekleri şişelerden çıkarın ve şişeleri inkübatöre geri verin.
16 ila 24 saat sonra, her iki cinsiyetten 250 bir günlük yetişkin sinekleri hafif karbondioksit anestezisi altında dört gruba ayırın ve yetişkin orta gıda içeren 250 mililitre şişeye aktarın, üçü farklı EDC konsantrasyonları ile desteklenmiş ve biri sadece EE2 çözücü ile. Çiftleşmelerine izin vermek için sinekleri iki ila üç gün boyunca 25 santigrat derecede koruyun. Sonra her sinek kohortunun cinsiyete göre iki gruba ayırın. Her iki cinsiyet için her tedavi koşulunda, her grubu rastgele şişe başına 20 kişilik bir yoğunlukta beş paralel şişeye ayırın. ölü sinek sayısının önceki transferden hayatta kalan sinek sayısından çıkarılıyor, böylece her transferde hayatta kalanların sayısı otomatik olarak elde ediliyor.
Üç gün sonra, anestezi olmadan sinekleri aynı anda ilgili yiyecekleri içeren yeni şişelere aktarın ve ölümü kontrol edin. Sineklerin yaşını ve ölü sinek sayısını kaydedin. Tüm sinekler ölene kadar her üç günde bir transferi tekrarlayın.
