Encyclopedia of Experiments: Biology
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- शुरू करने के लिए, पारंपरिक स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप, एसईएमएस के कम ऑपरेटिंग दबाव पर गैसों और तरल पानी को हटाने के कारण नमूना विरूपण को कम करने के लिए एक निश्चित नमूना निर्जलीकरण और सुखाने से शुरू करें।
नमूने को निर्जलित करने के लिए, इसे पानी में इथेनॉल की बढ़ती सांद्रता के साथ धोएं जब तक कि 100% इथेनॉल नहीं पहुंच जाता है। फिर इस प्रक्रिया को इथेनॉल में रासायनिक सुखाने वाले एजेंट के साथ दोहराएं जब तक कि नमूना शुद्ध सुखाने वाले एजेंट के साथ धोया न जाए। नमूना और सुखाने वाले एजेंट को वाष्पीकरण पकवान में स्थानांतरित करें। इसे न्यूनतम अतिरिक्त सुखाने वाले एजेंट के साथ कवर करें और इसे रात भर धुएं के हुड में सूखने दें।
इसके बाद, कार्बन चिपकने वाले टेप का उपयोग करके माइक्रोस्कोप स्टब के शीर्ष पर तैयार नमूने को माउंट करें। अंत में, स्टब के किनारों पर चांदी के पेंट को लागू करें, फिर स्टब के किनारे से प्रत्येक नमूने तक, अतिरिक्त इलेक्ट्रॉनों के बिल्डअप को कम करने के लिए, जिसके परिणामस्वरूप अवांछनीय छवि कलाकृतियों हो सकती है।
इस प्रयोग में, फल मक्खियों, ड्रोसोफिला मेलनोगास्टर, सुखाने एजेंट एचएमडीएस का उपयोग करके एसईएम विश्लेषण के लिए तैयार किए जाते हैं।
- ड्रोसोफिला मेलानोगेस्टर तैयार करने के लिए, 4 डिग्री सेल्सियस पर 2 घंटे के लिए स्थिर के 1 मिलीलीटर में एनेस्थेटाइज्ड मक्खियों को विसर्जित करें, जिससे यह सुनिश्चित हो सके कि वे पूरी तरह से जलमग्न हैं।
फिक्सेटिव को हटाने के लिए ग्लास पिपेट का इस्तेमाल करें फिक्स्ड ड्रोसोफिला सैंपल को 1.5 मिलीलीटर माइक्रोसेंट्रफ्यूज ट्यूब में तीन बार 0.1 मोलर फॉस्फेट बफर पीएच 7.2 के 1 मिलीलीटर के साथ 10 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर धोएं। 10 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर एक ग्लास पिपेट का उपयोग करें।
फिर एक माइक्रोफ्यूज ट्यूब में नमूना निर्जलित, 1 मिलीलीटर की मात्रा में, प्रत्येक 10 मिनट के लिए एक ग्रेडेड इथेनॉल श्रृंखला का उपयोग करें । प्रत्येक धोने को हटाने के लिए एक ग्लास पिपेट का उपयोग करें, नमूना हटाने के लिए सावधान नहीं किया जा रहा है । नमूना को कवर करने के लिए पर्याप्त १००% इथेनॉल के साथ १.५ मिलीलीटर माइक्रोसेंट्राइज ट्यूब में नमूना रखें ।
एचएमडीएस का उपयोग करके मक्खियों के रासायनिक सुखाने का प्रदर्शन करने के लिए, सबसे पहले, 100% इथेनॉल समाधान को 20 मिनट के लिए एचएमडीएस के 1 से 2 समाधान और 100% इथेनॉल के साथ बदलें। 20 मिनट के लिए एचएमडीएस के 2 से 1 समाधान और 100% इथेनॉल के साथ समाधान को बदलें। अंत में, इस समाधान को 20 मिनट के लिए 100% HMDS के साथ बदलें, और फिर एक बार प्रक्रिया दोहराएं।
नमूना है, जो एक 1.5 मिलीलीटर माइक्रोसेंट्रफ्यूज ट्यूब और HMDS में है स्थानांतरित, एक डिस्पोजेबल एल्यूमीनियम वजनी डिश में। 100% एचएमडी को नमूने को कवर करने के लिए पर्याप्त ताजा 100% एचएमडीएस के साथ बदलें। एल्यूमीनियम डिश के भीतर नमूना सीधे एक रासायनिक धुएं हुड में रखें, जैसे कि एक बॉक्स के रूप में ढीले ढक्कन के साथ सूखने के लिए, मलबे को नमूने पर गिरने से रोकने के लिए, और इसे 12 से 24 घंटे के लिए सूखने दें।
ड्रोसोफिला को माउंट करने के लिए एल्यूमीनियम के नीचे बढ़ते स्टब के नीचे लेबल करें। सूखे मक्खियों को एक विच्छेदन माइक्रोस्कोप के तहत स्टब के शीर्ष पर सुरक्षित कार्बन चिपकने वाले टैब पर वांछित स्थिति में रखने के लिए सटीक चिमटी का उपयोग करें। स्टब्स के बाहरी किनारों के चारों ओर चांदी प्रवाहकीय चिपकने वाला लागू करें।
चांदी के पेंट को मक्खियों से जोड़ने के लिए टूथपिक का प्रयोग करें, चालकता सुनिश्चित करें, जिससे यह सुनिश्चित हो सके कि पेंट वांछित इमेजिंग क्षेत्र को न छुए। स्टब होल्डर बॉक्स में स्टब्स रखें। और फिर खुले स्टब होल्डर बॉक्स को एक डिसकेटर में रखें और चांदी के पेंट को कम से कम तीन घंटे तक सूखने दें।
