Saggio di preferenza del gusto: un metodo per misurare il comportamento di alimentazione in Drosophila

- Per eseguire il saggio delle preferenze di gusto, utilizzare una camera, ad esempio una piastra di Petri divisa in sezioni uguali. Se si misura la scelta tra due soluzioni di gusti diversi, etichettare una in rosso e l'altra in blu utilizzando agenti coloranti alimentari insipidi. Quindi posizionare gocce ugualmente distanziate di ogni soluzione lungo il bordo del piatto attraverso sezioni alternate.

Ora aggiungete mosche anestetizzate e precedentemente affamate al centro della camera e coprite il piatto. Eseguire l'esperimento al buio per escludere potenziali distorsioni del colore e incubare a 25 gradi Celsius in un determinato periodo di tempo. Quando viene data la possibilità di scegliere tra due soluzioni, più soggetti preferiscono consumare soluzioni il cui gusto è più attraente, ad esempio, dolce, evitando opzioni avverse come le soluzioni amare. Interrompere l'esperimento spostando la camera in un congelatore.

Per misurare il comportamento di alimentazione e la preferenza del gusto, confrontare il numero di mosche con addome di colore diverso. Nel protocollo di esempio, vedremo una dimostrazione del saggio delle preferenze di gusto che misura la scelta tra varie soluzioni di saccarosio.

- Per iniziare l'esperimento, saturare un batuffolo di cotone con acqua sul fondo di una fiala a mosca standard. Successivamente, raccogliere le mosche in set di 100 animali su un cuscinetto di CO2, quindi aggiungere le mosche a una fiala preparata. Utilizzare un batuffolo di cotone per fissare le fiale chiuse. Posizionare quindi le fiale su un lato in un'incubatrice controllata dall&;ambiente. Preparare il tastant di controllo di 1 millimolare di saccarosio combinando 10 microlitri di soluzione di saccarosio millimolare, 13 microlitri di colorante alimentare rosso e 977 microlitri di acqua.

Quindi, preparare il tastant sperimentale di 5 millimolare di saccarosio. Quindi, creare le camere di dosaggio ottenendo una piastra di Petri di plastica da 100 millimetri per 15 millimetri e posizionando tre gocce di 10 microlitri di tastant di controllo il più vicino possibile al bordo della piastra a ore 12. A ore 3, posizionare tre gocce da 10 microliter di tastante sperimentale il più vicino possibile al bordo della piastra. Posizionare altre tre gocce del tastant di controllo a ore 6. Quindi posizionare altre tre gocce del tastant sperimentale a ore 9.

Successivamente, svuotare una fiala di 100 mosche affamate su un cuscinetto di CO2 abbastanza a lungo da anestetizzare tutti gli animali. Spazzolare gli animali al centro di una camera di dosaggio preparata e coprirla con il coperchio del piatto. Posizionare la camera di dosaggio in una scatola di cartone opaca. Quindi etichettare l'esterno della scatola con la condizione e il genotipo in fase di test. Spostare l'intera configurazione in un'incubatrice. Dopo due ore, posizionare le camere di dosaggio, ancora contenute all'interno di scatole di cartone, direttamente in un congelatore negativo di 20 gradi Celsius fino a quando non sono pronti per la quantificazione.