Encyclopedia of Experiments: Biology
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- Transferencia de góganes C. e lavados en líquido en un tobogán de vidrio previamente recubierto con poli-lisina, un compuesto que ayudará a las cutículas de gusano a pegarse a la superficie de vidrio. Presione suavemente otro tobogán de vidrio hacia abajo con un borde que sobresala la diapositiva inferior. Para inmovilizar los gusanos sin daños, comprima a los animales evitando cualquier movimiento lateral.
El metal es un conductor de temperatura eficaz que garantiza que la superficie del bloque esté lo suficientemente fría como para congelar rápidamente las cutículas del gusano a ambas superficies de vidrio. Una vez congelados, separe rápidamente los toboganes de vidrio para separar o romper las cutículas de gusano.
- Primero, prepara una diapositiva para fijar los gusanos. Pipette 30 microlitros de poli-L-lisina en un tobogán, unand luego, establece una segunda diapositiva sobre el otro y frotalos juntos para extender la solución uniformemente sobre ambos.
A continuación, coloque un bloque de metal plano en un recipiente lleno de nitrógeno líquido. Lave las placas con solución M9 y transfiera unos 10 microlitros de M9 que contengan los gusanos.
Una vez que los gusanos son transferidos, suelte suavemente un cruce de cubiertas sobre ellos de tal manera que el deslizamiento de cubierta sobresale de un borde.
Ahora, transfiera inmediatamente la diapositiva al bloque de metal en nitrógeno líquido y déjela congelar. Después de cinco minutos, deslice la cubierta usando el borde colgante.
A continuación, sumerja el tobogán en un frasco de coplina de vidrio lleno de metanol a menos 20 grados centígrados. Después de cinco minutos, transfiera el tobogán a un frasco de coplina de vidrio lleno de acetona durante otros cinco minutos a la misma temperatura.
