Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 20 seconds.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- För att testa temperaturpreferensen hos Drosophila larver, skapa en temperaturgradient genom att värma ena sidan av en aluminiumanalysplatta och kyla den andra. Aluminium har hög värmeledningsförmåga, vilket innebär att värmen överförs effektivt, vilket skapar en stabil linjär temperaturgradient.
Täck hela systemet för att eliminera störningar från starkt ljus och starta rättegången. Larver distribuerar genom lutningen, undviker aversiva zoner som är för varma eller för kalla och bosätter sig i zoner med gynnsamma temperaturer.
I exempelprotokollet kommer vi att se hur man ställer in en enriktad temperaturgradient mellan 18 och 28 grader Celsius och hur larver hanteras under analysen.
- För att förbereda en enkelriktad gradient, skapa först en fuktig omgivningsmiljö för analysen. Placera två aluminiumblock anslutna till separata vattenbad på våta pappershanddukar 10 centimeter från varandra.
Sedan, för att främja effektiv temperaturöverföring, fyll eventuella luckor mellan aluminiumblocken i analysplattorna med vatten som levereras från en sprayflaska.
Spraya sedan en vattenfilm på plattornas yta så att gelerna inte torkar ut. Täck sedan systemet med en kartong för att minska avdunstning och stabilisera temperaturen på gelytan. Vänta i 5 till 10 minuter för att låta temperaturen jämställas. Kontrollera sedan yttemperaturen på plattan på minst 12 platser för att säkerställa att det finns en jämn temperatur i hela, ge eller ta 2 grader Celsius. Sedan, byt ut kartongskyddet tills analysen utförs.
Ta först bort kartongen över gelén och kontrollera snabbt gelytans temperatur. Om ytan är torr, spraya en liten mängd vatten på ytan. Om gelén är bra, ladda sedan 100 till 200 larver i mitten av varje platta med en liten pensel.
Efter 10 till 30 minuter, ta bort kartongen och mikroplåtlocket. Sedan fotografera plattorna ovanifrån för att spela in larvernas position. Placera lådan ovanför kameran för att undvika reflektion på gelens yta.
Beräkna nu den procentuella fördelningen av larver i varje zon med hjälp av bildanalysprogramvara.
- Vid räkning, ignorera larver fördelade i regioner 0,5 centimeter från varje kant. Geltjocklek och temperaturförhållanden är inte enhetliga nära kanten.
