Uma das muitas vantagens do uso de levedura como sistema modelo é que grandes quantidades de biomacromléculas, incluindo ácidos nucleicos (DNA e RNA), podem ser purificadas a partir das células cultivadas.
Este vídeo abordará as etapas necessárias para realizar a extração de ácido nucleico. Começaremos delineando brevemente o crescimento e a colheita, e a lise das células de levedura, que são os passos iniciais comuns ao isolamento de todas as biomacromoleculas. Em seguida, discutiremos dois métodos únicos de purificação para a separação de ácidos nucleicos: ligação de coluna e separação de fases. Além disso, demonstraremos várias maneiras pelas quais esses métodos são aplicados em laboratório, incluindo a preparação de ácidos nucleicos para técnicas de biologia molecular, como PCR e manchas do sul, quantificação da expressão genética em resposta a estímulos ambientais e purificação de grandes quantidades de proteínas recombinantes.
Procedure
Hoje vamos mostrar como purificar ácidos nucleicos de Saccharomyces cerevisiae, também conhecido como levedura de padeiro. Ácidos nucleicos podem incluir DNA ou RNA. Este vídeo discutirá o isolamento dessas moléculas das células de levedura por separação de fases e cromatografia. Embora existam muitos métodos diferentes para purificar ácidos nucleicos da levedura, a maioria deles compartilha os mesmos passos iniciais. As células de levedura são primeiramente propagada…