Journal
/
Bioengineering
/
En protokol til multipel gen-knockout i mus-små tarmorganoider ved anvendelse af en CRISPR-concatemer
JoVE Journal
Bioengineering
This content is Free Access.
JoVE Journal Bioengineering
A Protocol for Multiple Gene Knockout in Mouse Small Intestinal Organoids Using a CRISPR-concatemer

En protokol til multipel gen-knockout i mus-små tarmorganoider ved anvendelse af en CRISPR-concatemer

DOI:
10.3791/55916-v

•

11:53 min

•

July 12, 2017

•

, , , , ,
1Wellcome Trust – Medical Research Council Stem Cell Institute,University of Cambridge, 2Department of Genetics,University of Cambridge, 3Department of Pathology,Yonsei University College of Medicine

Chapters

  • 00:05Title
  • 00:50Cloning of gRNAs into the CRISPER-concatemer Vector
  • 03:40Assessing Success of Cloning by Restriction Digest
  • 05:28Preparing Intestinal Organoids for Electroporation
  • 08:08Electroporation
  • 10:36Results: Successful Generation of CRISPER-concatemers and Electroporation of Intestinal Organoids
  • 11:24Conlcusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

Denne protokol beskriver trinene til kloning af flere enkelt-guide-RNA'er i en RNA-concatemervektor, som er særlig anvendelig til at skabe multi-gen-knockouts ved hjælp af CRISPR / Cas9-teknologi. Frembringelsen af ​​dobbelt knockouts i tarmorganoider er vist som en mulig anvendelse af denne metode.

Tags

CRISPR-concatemerMultiple Gene KnockoutMouse Small Intestinal OrganoidsCRISPRGuide RNAsElectroporationSimultaneous KnockoutLoss Of Function StudiesParallel CompensationCloningBbs1 Shuffling ReactionThree GRNA ConcatemerFour GRNA Concatemer

Article

Embed

ADD TO PLAYLIST

Usage Statistics

Related Videos

Fabrication of Electrochemical-DNA Biosensors for the Reagentless Detection of Nucleic Acids, Proteins and Small Molecules

Creating Two-Dimensional Patterned Substrates for Protein and Cell Confinement

En mikrofluid enhed for at studere flere forskellige stammer

En Decellularization metoden til udarbejdelse af en naturlig Acellular Intestinal Matrix

Brug Tomoauto: En protokol til High-throughput Automatiseret Cryo-elektron Tomography

Real Time Overvågning af intracellulære Bile Acid Dynamics Ved hjælp af en genetisk indkodede FRET-baserede Bile Acid Sensor

En protokol til Decellularizing musen Cochleae for indre øre vævsmanipulering

Visuel genkendelse af flere nukleinsyrer i en kapillær Array

Undertrykke gen transskription ved at omdirigere cellulære maskiner med kemiske epigenetiske modifikatorer

Gennemføre flere Imaging tilstande med et fluorescens mikroskop

Read Article