Biology
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ओमेंटम को माउस में टाप प्रत्यारोपण के लिए एक विधि
Chapters
Summary January 7th, 2019
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एक माउस में टाप के omental प्रत्यारोपण के लिए एक विधि शुरू की है । पृथक टाप को hydrogel के साथ मिलाया जाता है और मिश्रण को डायबिटिक माउस के omental पाउच में रखा जाता है । फिर, रक्त ग्लूकोज पर नजर रखी है, और इंयूनो-histochemical विश्लेषण किया जाता है ।
Transcript
इस विधि से आइलेट प्रत्यारोपण क्षेत्र में महत्वपूर्ण प्रश्नों के उत्तर देने में मदद मिल सकती है जैसे कि इलेट प्रत्यारोपण ओमेंटम के लिए। इस तकनीक के निहितार्थ प्रकार मैं मधुमेह की चिकित्सा की ओर विस्तार क्योंकि ओमेंटम आइलेट प्रत्यारोपण के लिए एक संभावित मूल्य स्थल के रूप में फिर से आपात है । इस तकनीक का मुख्य लाभ यह है कि अलग आइलेट्स को हाइड्रोगेल के साथ मिलाया जाता है और मिश्रण को मधुमेह माउस के ओमेंटम पाउच में रखा जाता है।
ड्रेप्स और डिस्पोजेबल जैसे बाँझ सामग्री के साथ सर्जिकल क्षेत्र में एक एसेप्टिक क्षेत्र तैयार करके शुरू करें। स्टरलाइज्ड सर्जिकल उपकरणों को एसेप्टिक फील्ड में रखें। 200 माइक्रोलीटर पिपेट टिप का उपयोग करके स्टीरियो-माइक्रोस्कोप के तहत दाता आइलेट्स चुनें।
प्रत्येक जानवर के लिए, 450 से 500 आइलेट्स इकट्ठा करें और सीएमआरएल 10 66 माध्यम के 100 माइक्रोलीटर के साथ बाँझ 1.5 मिलीलीटर स्नैप टॉप ट्यूब में स्थानांतरित करें। प्रत्यारोपण के लिए तैयार होने तक ट्यूब को बर्फ पर रखें। एक बार आइलेट्स काटा गया है, बर्फ पर गल तहखाने झिल्ली मैट्रिक्स हाइड्रोजेल ।
सभी मधुमेह प्राप्तकर्ता चूहों का वजन और टैग करें। एक संस्थागत रूप से अनुमोदित प्रोटोकॉल के अनुसार पहले माउस को एनेस्थेटाइज करने के बाद, एक टोंड चुटकी का प्रशासन करके संज्ञाहरण की गहराई का परीक्षण करें। यदि निकासी पलटा नहीं है, तो सर्जरी के लिए संज्ञाहरण का स्तर सही है।
संज्ञाहरण के तहत सूखापन को रोकने के लिए आंखों को पशु चिकित्सक मरहम प्रशासन। 70% इथेनॉल के साथ पेट झाड़ू। इसके बाद सर्जरी साइट से बालों को शेव करें।
एक बाँझ कपड़ा के साथ जानवर को कवर, और एक आयोडीन स्क्रब के साथ क्षेत्र कीटाणुरहित । पेट के मिडलाइन के साथ 4 से 5 सेंटीमीटर चीरा बनाने के लिए नेत्र कैंची का उपयोग करने के बाद, आंतों को बाईं ओर ले जाएं और सर्जरी प्रक्रिया के दौरान निर्जलीकरण को रोकने के लिए नमकीन लथपथ धुंध के साथ कवर करें। फिर पेट को पूरी तरह से बेनकाब करने और पेट के नीचे ओमेंटम का पता लगाने के लिए कपास झाड़ू का उपयोग करें।
इस बिंदु पर, हाइड्रोगेल को पूरी तरह से गल जाना चाहिए। 30 सेकंड के लिए 200 बार जी पर आइलेट्स युक्त ट्यूब स्पिन करें। स्पिन के बाद, सुपरनैंट को हटा दें।
फिर हाइड्रोगेल के 50 माइक्रोलीटर को आइलेट्स युक्त ट्यूब में जोड़ें और बुलबुले के गठन से धीरे-धीरे मिलाएं। अगले ओसम के किनारों को लेने के लिए संदंश के दो जोड़े का उपयोग करें और धीरे से इसे उठाने के लिए गैस्ट्रिक दीवार और आंतों के बीच एक नाली बनाने के लिए । सर्जरी में इस बिंदु पर, एक दूसरे व्यक्ति को 200 माइक्रोलीटर पिपेट टिप के साथ पुनर्निपित आइलेट हाइड्रोगेल मिश्रण को एस्पिरेट करने और इसे नाली में वितरित करने की आवश्यकता होती है।
सुनिश्चित करें कि मिश्रण धीरे-धीरे उठाने या ओमेंटम के किनारों को कम करके नाली में अच्छी तरह से तैनात है। हाइड्रोगेल जमने से पहले मिश्रण की स्थिति को तीन मिनट के भीतर पूरा करें। हाइड्रोगेल सेट के बाद, ग्राफ्टम को कवर करने के लिए ओमेंटम को फोल्ड करें।
ओमेंटम आसपास की गैस्ट्रिक दीवार का पालन करेगा क्योंकि हाइड्रोजेल जम जाता है। जब हाइड्रोगेल पूरी तरह से जम जाता है, तो प्रत्यारोपण की साइट को छूने के लिए ध्यान न देते हुए पेट की गुहा में आंतों को फिर से स्थान देने के लिए कपास झाड़ू का उपयोग करें। अगले संक्रमण को रोकने के लिए पेट की गुहा में एक उपयुक्त एंटीबायोटिक के २०० माइक्रोलीटर बांटना ।
इसके बाद पेट को बंद करने के लिए 4 ओ सीवन का इस्तेमाल करें। आम तौर पर इस विधि के लिए नए व्यक्ति संघर्ष करेंगे क्योंकि चूहों में ओमेंटम की साइटें छोटी और आकलन करने के लिए थका देने वाली हैं। माउस को एक गर्म वसूली पिंजरे में रखें जब तक कि यह पूरी तरह से बाहरी अनुलम्बक को फिर से नहीं ले जाए।
अगले दिन और उसके बाद हर दिन एक सप्ताह के लिए, पोस्ट सर्जरी प्रोफिलैक्सिस के रूप में एंटीबायोटिक सुई । इसके अलावा, प्रत्यारोपण के बाद दिन में एक बार रक्त ग्लूकोज मीटर का उपयोग करके पूंछ नस रक्त नमूने से गैर-उपवास रक्त ग्लूकोज स्तर को मापें। ओमेंटम में प्रत्यारोपण करते समय, आइलेट भ्रष्टाचार में देरी से कार्य हो सकता है और दो से तीन सप्ताह तक पूरी तरह से सामान्य रक्त शर्करा स्तर तक नहीं पहुंच सकता है।
प्रत्यारोपण के 14 दिन बाद यूकेथेंड माउस से ग्राफ्ट किए गए ऊतक को वापस लाया गया । यहां भ्रष्टाचार DAPI धुंधला के बाद नाभिक के एक समूह के रूप में दिखाई दे रहा है । ग्राफ्ट किए गए ऊतक की कार्यक्षमता एंटी-इंसुलिन एंटीबॉडी के साथ इम्यूनोफ्लोरेसेंस धुंधला द्वारा प्रकट होती है।
एच एंड ई स्टेनिंग ओमेंटम के एडिपोसाइट्स से घिरे ग्राफ्ट किए गए ऊतकों को दिखाता है। एक बार महारत हासिल करने के बाद अगर इसे ठीक से किया जाए तो इस तकनीक को एक घंटे में किया जा सकता है। इस प्रक्रिया का प्रयास करते समय, यह भी याद रखना महत्वपूर्ण है कि माउस ओमेंटम नाजुक है।
इस प्रक्रिया के बाद, विभिन्न हाई स्कूल में उपयोग किए जाने वाले अन्य तरीके, एमबी प्रदर्शन सभी में जो विशेष सवालों के जवाब देंगे जैसे कि वासक्यूलाइजेशन में आइलेट का प्रसार और प्रदर्शन। इस विकास के बाद, इस तकनीक ने शोधकर्ताओं को उनके और प्रत्यारोपण में एक से अधिक अंश में टाइप I मधुमेह के लिए उपचार का पता लगाने का मार्ग प्रशस्त किया। इस वीडियो को देखने के बाद आपको अच्छी समझ होनी चाहिए कि आइलेट्स को माउस में ओमेंटम कैसे ट्रांसप्लांट किया जाए।
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