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Digestione delle proteine, ultrafiltrazione e cromatografia di esclusione di formato per ottimizzare l'isolamento degli esosomi da siero e Plasma sanguigno umano
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Chapters
- 00:04Title
- 01:06Preparation of Crude Sample (Either Plasma or Serum) by Pelleting Larger Vesicles and Cellular Debris
- 02:04Digestion of Non-exosomal Blood Proteins and Removal of Small Proteins/Peptides by Centrifuge Ultrafiltration
- 04:21Purification of Vesicles by Size Exclusion Chromatography (SEC)
- 05:45Concentration of Purified Exosomes/Total Protein Quantification and Quantification/Sizing of Exosomes by Nanoparticle Tracking Analysis (NTA)
- 07:09Results: Increased Vesicle Yield and Exosome-specific Markers After Purification
- 08:15Conclusion
Qui, presentiamo un protocollo per purificare gli esosomi da siero con ridotta co-purificazione non-exosomal di proteine del sangue e del plasma. Il protocollo ottimizzato include ultrafiltrazione, trattamento con proteasi e cromatografia di esclusione di formato. Una maggiore purificazione di esosomi analisi a valle di vantaggi, tra cui più accurata quantificazione delle vescicole e caratterizzazione proteomica.
