Journal
/
Biochemistry
/
Generation af indfødte, ukodede Huntingtin Exon1 monomere og fibriller ved hjælp af en SUMO Fusion strategi
JoVE Journal
Biochemistry
This content is Free Access.
JoVE Journal Biochemistry
Generation of Native, Untagged Huntingtin Exon1 Monomer and Fibrils Using a SUMO Fusion Strategy

Generation af indfødte, ukodede Huntingtin Exon1 monomere og fibriller ved hjælp af en SUMO Fusion strategi

DOI:
10.3791/57506-v

•

11:22 min

•

June 27, 2018

•

, , ,
1Laboratory of Molecular and Chemical Biology of Neurodegeneration,Ecole Polytechnique Fédérale de Lausanne (EPFL)

Chapters

  • 00:04Title
  • 00:53Cell Lysis and Purification of His6-SUMO Httex1 Fusion Protein by Immobilized Metal Affinity Chromatography (IMAC)
  • 02:56Cleavage of the His6-SUMO-tag and HPLC Purification
  • 06:06Disaggregation and Resolubilization of Httex1 Proteins
  • 07:53Results: Characterization of Native, Untagged Huntingtin Exon1 Monomer and Fibrils Prepared via SUMO Fusion
  • 09:52Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

Vi præsenterer her, en robust og optimeret protokol for produktion af milligram mængder af indfødte, tag-gratis monomerer og fibriller af exon1 af Huntingtin-protein (Httex1) baseret på den forbigående fusion af små ubiquitin relaterede modifier (SUMO).

Tags

Native Huntingtin Exon1SUMO Fusion StrategySDS-PAGE AnalysisIMAC PurificationHPLC PurificationDTTL-cysteineTrifluoroacetic AcidAggregation-prone ProteinsAmyloid-betaAlpha-synuclein

Article

Embed

ADD TO PLAYLIST

Usage Statistics

Related Videos

Identifikation af små molekyler-bindende proteiner i en Native Cellular Environment af live-cell fotoaffinitetsmærkning

Løsning affinitetsrensede proteinkomplekser ved Blå Native PAGE og protein Korrelation Profilering

Analyse af superkomplekser af den mitokondrieelektron transportkæde med indfødte elektroforese, in-gel analyser og elektrolysering

Fraktionering for opløsning af opløselige og uopløselige Huntingtin arter

Opsamling og identifikation af RNA-bindende proteiner ved hjælp af klik kemi-assisteret RNA-interactome Capture (CARIC) strategi

Brug af rekombinant Fusion proteiner i et fluorescerende Protease Assay Platform og deres i-gel genopretning

Hybrid Clear/blå Native elektroforese til separation og analyse af Mitokondrial respirations kæde Superkomplekser

En strategi til identificering af forbindelser, der påvirker cellevækst og overlevelse i dyrkede pattedyrceller ved lav til moderat gennemløb

Lokalisering af SUMO-modificerede proteiner ved hjælp af fluorescerende Sumo-diffuse Rings proteiner

Interaktioner med og membran Permeabilisering af hjernen mitochondrier af amyloid Fibrils

Read Article