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Utilisation des protéines de Fusion recombinantes dans une plate-forme de test de protéase Fluorescent et leur Renaturation en gel
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Use of Recombinant Fusion Proteins in a Fluorescent Protease Assay Platform and Their In-gel Renaturation
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Utilisation des protéines de Fusion recombinantes dans une plate-forme de test de protéase Fluorescent et leur Renaturation en gel

DOI:
10.3791/58824-v

•

19:23 min

•

January 16, 2019

•

, , , ,
1Department of Biochemistry and Molecular Biology, Faculty of Medicine,University of Debrecen, 2Biotechnology Research Department,Gedeon Richter Plc

Chapters

  • 00:00Title
  • 01:05Generation of the Substrate-coding Expression Plasmids
  • 02:16Expression of the Fluorescent Substrates
  • 03:35Cell Disruption
  • 04:26Ni-NTA Magnetic Agarose Bead-based Protease Assay
  • 12:39PAGE Analysis
  • 14:41Representative Results
  • 18:29Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

Nous présentons ici la procédure détaillée d’une plateforme de test de protéase récemment développés utilisant la protéine liant le maltose/protéine N-terminale et fusionné avec protéines recombinantes substrats fluorescents attachés à la surface de nickel-nitrilotriacétique acide magnétique agarose perles. Une analyse ultérieure de dans-gel de l’essai des échantillons séparés par électrophorèse sur gel sodium dodécyl sulfate polyacrylamide est également présentée.

Tags

Recombinant Fusion ProteinsFluorescent Protease AssayIn-gel RenaturationHIV-1 ProteaseHigh-throughput ScreeningFluorescence-based AssayProtein ExpressionCleavage SiteBL21(DE3) CellsPlasmid Construction

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