A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Chapters
- 00:04Title
- 01:01GSH-agarose Affinity Purification of the GST-RING1B(1-159)-BMI1 (1-109) E3 Ubiquitin Ligase Complex
- 02:16Purification of the BAP1/DEUBAD (ASXL2) Deubiquitinase Complex
- 04:58Purification of the Nucleosomes from HEK293T Cells
- 07:38Nucleosome Ubiquitination Assay Using BMI1/RING1B E3 Ubiquitin Ligase Complex and In Vitro Nucleosomal H2A DUB Assay Using BAP1/DEUBAD
- 09:05Results: Purification, Ubiquitination, and Deubiquitination
- 10:40Conclusion
Ubiquitination هو تعديل ما بعد الترجمة الذي يلعب أدوارا هامة في العمليات الخلوية ويتم تنسيقها بإحكام من قبل deubiquitination. العيوب في كل من ردود الفعل تكمن وراء الأمراض البشرية. نحن نقدم بروتوكولات لإجراء رد فعل في كل مكان وdeubiquitination في المختبر باستخدام المكونات النقية.
Tags
In Vitro UbiquitinationDeubiquitinationNucleosomal HistonesPurified ComponentsUbiquitination MechanismsDeubiquitination MechanismsEnzyme MutationsHuman DiseaseHigh-throughput ScreeningSmall Molecule InhibitorsTherapeuticsBacteria LysisPMSFAntiprotease CocktailGSH BeadsChromatography ColumnGlutathioneHis-BAP1MBP-DEUBADNickel NTA BeadsImidazole
