Medicine
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Modelo murino de estenose venosa central usando fístula Aortocaval com estenose de saída
Chapters
Summary July 11th, 2019
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Uma fístula aortocaval foi criada puncionando a aorta infra-renal murino através de ambas as paredes na veia inferior oca e foi seguida pela criação de um stenosis em seu saída através da ligadura parcial da veia inferior oca. Este modelo reprodutível pode ser usado para estudar a estenose venosa central.
Transcript
Estenose venosa central pode causar tanto fístula aortocaval, ou AVF, falha primária de maturação, bem como falha posterior em uma fístula de trabalho. Esta técnica usa uma versão modificada de um modelo AVF murine estabelecido que recapitula o curso clínico do AVF humano e é facilmente dominado através de várias etapas críticas. Antes de iniciar o procedimento, confirme a falta de resposta ao beliscão do dedo do pé em um rato C57-Black/6 de nove a 11 semanas de idade e coloque o rato na posição supina na área cirúrgica.
Aplique pomada nos olhos do animal e remova a pele do lado ventral do pescoço para o abdômen inferior. Em seguida, limpe e desinfete o local cirúrgico com três esfregões sequenciais de 10% de povidona e 70% isopropanol, e coloque uma cortina cirúrgica sobre o animal. Para a exposição ao local do grampo e punção, coloque o rato sob um microscópio dissecando e, usando técnica estéril e um bisturi, faça uma incisão abdominal profunda, midline, da borda do fígado inferior até um pouco acima do púbis.
Corte a musculatura com uma tesoura para abrir a cavidade abdominal e insira um retrátil no abdômen. Mova as entranhas para o lado direito, e enrole-as em uma gaze salina encharcada. Mova a bexiga e as vesículas seminais para o lado caudal do animal, e use um suporte de microaguléce para dissecar o mesentery entre o reto e o retroperitoneum para garantir uma visão completa da aorta e da veia cava inferior, ou IVC.
Em seguida, use o suporte de microaréde para dissecar a aorta infrarenal e iVC em bloco a partir dos tecidos retroperitoneais laterais e dorsais ao redor para cruzar os tecidos juntos, e dissecar os tecidos circundantes para expor o local de punção aórtica a aproximadamente três quartos da distância da veia renal esquerda à bifurcação aórtica. Para o isolamento do IVC, dissecar entre o IVC infrarenal e a aorta imediatamente distal à veia renal esquerda e estender a dissecção distally para a metade entre a veia renal esquerda e a bifurcação aórtica para observação de IVC infra-operatório pós-operatório. Faça uma janela para separar o IVC da aorta e dissecar o IVC do tecido circundante.
Em seguida, cuidadosamente colocar um 8-0 sutura de monofilamento de poliamida sob o IVC e a aorta antes de puxar a extremidade da sutura através da janela para posicionar a sutura abaixo apenas do IVC. Para criar o AVF, primeiro dobre uma agulha de calibre 25 para um ângulo de 45 a 60 graus a quatro milímetros da ponta da agulha e aperte a aorta infrarenal e o IVC com um clipe microcirúrgico. Agarrando o tecido conjuntivo ao redor da bifurcação, gire a aorta mediada e caudalmente para expor o local de punção da aorta esticada ligeiramente para o lado ventral, e use a agulha de calibre 25 para perfurar através da aorta no IVC.
Quando o tecido for perfurado, solte a aorta e puxe para cima do lado esquerdo da aorta para cobrir o local da punção com o tecido circundante. Em seguida, remova a agulha e pressione o local da punção suavemente com um cotonete com ponta de algodão para hemostasia. Para a criação de estenose IVC, coloque a ponta de um cateter intravenoso de 22 bitolas longitudinalmente sobre o IVC e liga o cateter para o IVC com um 8-0 Sutura.
Quando a sutura tiver sido colocada, remova o cateter e confirme a hemostasia primária antes de desordenar a aorta e o IVC. Cubra o local da punção por mais um minuto para garantir a hemostasia, e devolva os órgãos à cavidade abdominal antes de fechar o abdômen com suturas de 6-0. Em seguida, coloque o mouse em uma gaiola individual livre de cama em um dispositivo de suporte térmico com monitoramento até a recuperação completa, e use ultrassom Doppler para confirmar a patência da fístula.
No sétimo dia após o procedimento cirúrgico, as áreas de fístula e estenose do IVC são facilmente detectadas na visão longitudinal. Em camundongos com estenose sem AVF, o segmento de estenose exibe uma forma de onda venosa com mais ampliação espectral do que ratos operados por vergonha, mas sem muita pulsatilidade. Em camundongos com um AVF, bem como uma estenose, o segmento de estenose mostra uma forma de onda pulsante, além da ampliação espectral, e a velocidade máxima média de tempo do fluxo na estenose em camundongos com um AVF com estenose é significativamente maior do que em camundongos com estenose apenas.
O diâmetro médio de IVC na estenose em camundongos apenas com estenose é semelhante ao observado em camundongos com um AVF e estenose. Além disso, usando o segmento upstream ou downstream como referência, a estenose percentual é significativamente maior em camundongos com um AVF, além de uma estenose. Quando você liga o cateter IV e o IVC juntos, é importante amarrá-los firmemente para criar uma estenose reprodutível.
A aplicação deste procedimento ao modelo de implantação de enxerto venoso murine poderia responder como superar a oclusão da estenose venosa do enxerto.
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