Detta protokoll innehåller instruktioner för att genomföra multiphoton litografi att tillverka tredimensionella matriser av fluorescerande relaterat markörer inbäddade i poly (etylenglykol)-baserade hydrogeler för användning som referens-fri, dragkraft mikroskopi Plattformar. Med hjälp av dessa instruktioner, är mätning av 3D-materialstam och beräkning av cellulära Tractions förenklad för att främja hög genomströmning dragkraft mätningar.