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Caractérisation fonctionnelle des ligases d'ubiquitine RING-Type E3 In Vitro et In Planta
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Functional Characterization of RING-Type E3 Ubiquitin Ligases In Vitro and In Planta
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Caractérisation fonctionnelle des ligases d'ubiquitine RING-Type E3 In Vitro et In Planta

DOI:
10.3791/60533-v

•

10:27 min

•

December 05, 2019

•

, , , , , ,
1Department of Entomology, Plant Pathology and Nematology,University of Idaho, 2Department of Plant Sciences,University of Idaho

Chapters

  • 00:04Title
  • 01:04Site-directed Mutagenesis
  • 02:29Recombinant Protein Purification and In Vitro Ubiquitination Assay
  • 03:40Agrobacterium-mediated Transient Protein Expression in Nicotiana benthamiana Leaves and In Planta Ubiquitination Assay
  • 06:36Establishing the Link Between Enzymatic Activity and Function In Planta
  • 07:27Results: In Vitro and In Planta Ubiquitination Assay
  • 09:20Conclusion

Summary

Automatic Translation

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L'objectif de ce manuscrit est de présenter un aperçu des études biochimiques et fonctionnelles complètes des ligases d'ubiquitine E3 de type RING. Ce pipeline en plusieurs étapes, avec des protocoles détaillés, valide une activité enzymatique de la protéine testée et démontre comment lier l'activité à la fonction.

Tags

RING-type E3 Ubiquitin LigasesSite-directed MutagenesisIn Vitro Enzymatic ActivityIn Planta FunctionalityUbiquitination AssayRING DomainCys And His ResiduesPCRDpn1 DigestionPMAL-c2 VectorMBP TagSDS-PAGEPVDF MembraneWestern Blotting

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