Neuroscience
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
פגיעה מוחית כתוצאה בלייזר בקליפת המוח המוטורית של חולדות
Chapters
Summary September 26th, 2020
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
הפרוטוקול המוצג כאן מראה טכניקה ליצירת מודל מכרסם של פגיעה מוחית. השיטה המתוארת כאן משתמשת בהקרן לייזר ותועדת לקליפת המוח המוטורית.
Transcript
הפרוטוקול שלנו מספק מתודולוגיה חדשנית ליצירת פגיעה מוחית טראומטית בחולדות באמצעות הקרנה בלייזר כדי ליצור השפעה ממוקדת בקליפת המוח המוטורית. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא השונות הנמוכה באזור אוטם, שיעורי התמותה הנמוכים, ואת הפשטות היחסית של ההליך שאינו דורש מטפלים מומחים. מי שידגים את ההליך יהיה דמיטרי נתנאל, חוקר מהמעבדה שלנו.
כדי לבצע פגיעה מוחית הנגרמת על ידי לייזר, להקצות תחילה 20, 300 עד 350 גרם חולדות ספראג דאולי לתוך קבוצת הלייזר ו 20 לקבוצה שליטה שאם מופעל. לאחר אישור חוסר תגובה רפלקס נסיגה, מניחים חולדה אחת על כרית חימום מוסדר טמפרטורה רקטלי ולהשתמש מכונת גילוח כדי להסיר מספיק שיער מאתר הפציעה עם מרווח ללא שיער כשני סנטימטרים סביב החתך. לחטא את העור החשוף עם 70% אתנול ולהניח את החולדה במצב נוטה במחזיק ראש סטריאוטוקסי.
בצע חתך של שלושה סנטימטרים כדי לאפשר השתקפות הצדדית של הקרקפת לחשוף את האזור בין ברגמה למדה. החזקת לייזר Nd:YAG עם אורך גל שיא של 1064 ננומטר במרחק של שני מילימטרים מהגולגולת, לנהל 50 joules פעמים 10 נקודות עם משך פולס של שנייה אחת לאזור החשוף של הגולגולת מעל חצי הכדור הימני. לאחר הפציעה בלייזר נמסר, להסיר את החולדה מהמכשיר ולסגור את הקרקפת עם 3-0 תפרים כירורגיים משי.
לאחר מכן, מניחים את החולדה בכלוב שלה עם ניטור עד חקירה מלאה. 24 שעות לאחר ההליך, השתמש במערכת ניקוד של 43 נקודות כדי להעריך את ציון החומרה הנוירולוגית. בדיקת בעלי החיים לגירעונות נוירולוגיים, הפרעות התנהגות, משימת איזון קורות ורספלקסים, והקצאת ציונים גבוהים יותר למוגבלויות חמורות יותר.
לאחר ההערכה, לקצור את המוח מכל חיה ניסיונית ולשלוט על פי פרוטוקולים סטנדרטיים. כדי להעריך את נפח אוטם המוח, לחתוך את המוח שנקטף לתוך שש פרוסות coronal עבה שני מילימטר דגירה כל פרוסה ב 0.05% TTC במשך 30 דקות ב 37 מעלות צלזיוס. לאחר הכתמים, סרוק פרוסות אלה באמצעות סורק אופטי ברזולוציה של 1600 על 1600 נקודות לאינץ'.
האזורים הבלתי נגועים בפרוסות המוח הקבועות מוגדרים כאוטמים. כדי להעריך את השכיחות של שבירת מחסום הדם מוח, 24 שעות לאחר הפציעה הנגרמת על ידי לייזר לטעון מזרק עם 2% אוונס צבע כחול מדולל בארבעה מיליליטר לקילוגרם של תמיסת מלח ולספק את הפתרון דרך הווריד פצועים ושליטה באמצעות וריד הזנב cannulateed. אפשר לפתרון להסתובב במשך שעה אחת לפני השימוש pincets כירורגי ומספריים כדי לפתוח את החזה של החיה הראשונה.
להחדיר את הלב החשוף עם 0.9% מלוחים מקורר דרך החדר השמאלי ב 110 מילימטרים של כספית של לחץ עד נוזל שפע חסר צבע נצפתה מן האולם הימני. לאחר מכן, לקצור את המוח ולקבל שתי פרוסות סיבתיות rostral מילימטר. הפרד את פרוסות המוח השמאליות מפרוסות המוח הימני כדי לאפשר הערכה של ההמיספרות הפצועות והבלתי פצועות בנפרד, ולשקול את הדגימות.
הומוגניזציה של הדגימות באמצעות מרגמה ועלי והדגירה דגימות הרקמה ב 50% חומצה טריכלורואצטית במשך 24 שעות. למחרת, צנטריפוגה דגימות רקמת המוח הומוגני במשך 20 דקות ב 10, 000 פעמים G וטמפרטורת החדר, ומערבבים מיליליטר אחד של supernatant עם 1.5 מיליליטר של 96% אתנול ביחס אחד עד שלושה. לאחר מכן, השתמש בגלאי פלואורסצנטיות בגירוש של 620 ננומטר ובאורך הגל של פליטת 680 ננומטר כדי להעריך את שבירת מחסום הדם.
כפי שנצפה על ידי ניתוח היסטולוגי, כתמים כחולים אוונס יכול לשמש כדי לחשוף את השכיחות של פגיעה מוחית בלייזר ובעלי חיים מודל MCAO. בניתוח מייצג זה לא נרשמו מקרי מוות או דימומים תת-ארגוניים בקבוצות הבקרה או בקבוצות הניסוי, ולקבוצה MCAO היה שיעור של 20% הן של תמותה והן של דימום תת-אנכרנואידי. גם שינויי טמפרטורת הגוף היחסיים בחולדות משתי הקבוצות היו דומים, למרות הבדל השונות של שתי הקבוצות.
ציוני החומרה הנוירולוגית היו גרועים משמעותית הן במודל הלייזר והן במודל MCAO בהשוואה לקבוצת הביקורת המופעלת על ידי Sham. פגיעה מוחית הנגרמת בלייזר גרמה גם לעלייה משמעותית בנפח האוטם בחצי הכדור היעד בהשוואה לקבוצת הביקורת המופעלת על ידי שאם. עם זאת, נפח אוטם של דגם הלייזר היה קטן יותר בהשוואה לבעלי החיים שנפצעו על ידי טכניקת MCAO.
אין הבדל בצקת המוח נצפתה בין מודל פגיעה מוחית הנגרמת על ידי לייזר לבין קבוצת הביקורת המופעלת על ידי שאם. עם זאת, היה הבדל משמעותי בצקת המוח בין מודל לייזר וקבוצות פצועים MCAO. בהשוואה לקבוצת הביקורת המופעלת על ידי שאם, הפגיעה המוחית הנגרמת בלייזר וטכניקות MCAO גרמו שניהם לעלייה משמעותית בשבר מחסום הדם בהמיספרות הלא פצועות והמטרה.
בעת ניסיון דגם זה, זכור למקד במדויק את אזור קליפת המוח המוטורית ולתקנן את האנרגיה, את מספר הנקודות המוקרנות ואת זמן האקספוזיציה הכולל. בעקבות הליך זה, שפע רחב של בדיקות התנהגותיות, כגון הליכה קרן, Froedert, והערכות אחרות ניתן לבצע.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
