Medicine
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Natrium taurocholaat geïnduceerde ernstige acute pancreatitis bij C57BL/6 muizen
Chapters
Summary June 28th, 2021
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Diermodellen voor ernstige acute pancreatitis maken de studie van pathofysiologische veranderingen in de beginfase mogelijk, waardoor de observatie van de evolutie van ontstekingsgebeurtenissen wordt vergemakkelijkt. Hier bieden we een protocol voor de inductie van ernstige acute gal pancreatitis door retrograde infusie van natrium taurocholaat in het pancreaskanaal van verdoofde C57BL / 6-muizen.
Transcript
Deze methode kan worden gebruikt voor het reproduceren van de ontstekingsgebeurtenissen die optreden bij acute gal pancreatitis. Het is mogelijk om veranderingen in pancreasweefsel in de vroege stadia te bestuderen, wat over het algemeen niet mogelijk is in de kliniek. De belangrijkste voordelen van deze techniek zijn dat het snel en gemakkelijk te reproduceren is voor een getrainde onderzoeker, en het biedt vergelijkbare resultaten als acute pancreatitis bij mensen.
De methode kan worden gebruikt om farmacologische immuunresponsen van geneesmiddelmoleculen en andere therapeutische interventies te bestuderen, omdat het de studie van ontstekingsbemiddelende cellen in de pancreas en aangrenzende organen mogelijk maakt. Bij het proberen van dit protocol is het lokaliseren van de organen en het vaststellen van het cannulatiegebied cruciaal. Onthoud de locatie van de organen en oefen de injectietoepassing eerst uit met behulp van een gekleurde oplossing zoals methyleenblauw.
Na het controleren van de diepte van de anesthesie met een teen knijpen, reinigt u de buikstreek van een verdoofde muis met een 5% povidon jodiumoplossing. Verwijder met behulp van een trimmer het haar tussen de borst en de onderbuik en reinig een chirurgisch gebied van ongeveer twee vierkante centimeter met 70% alcohol. Immobiliseer het dier op de chirurgische plaat en gebruik een schaar om vijf millimeter van de huid horizontaal op het bovenste deel van de buik en één centimeter onder het xiphoid-proces te knippen.
Herhaal de snede op het peritoneum om de laparotomie uit te voeren met minimale blootstelling van de holte. Trek met behulp van een retractor de lever naar het hoofd op ongeveer een centimeter van de darm en lokaliseer het gebied van de pancreas en de twaalfvingerige darm. Til met behulp van een tang de lever op naar de dierenkop.
Door voorzichtig aan het deel van de dunne darm te trekken, bevestigt u de twee laterale uiteinden met een 6-0 polypropyleen hechtdraad voor een beter zicht op het distale deel van de gemeenschappelijke galweg. Sluit met behulp van een microvatclip de proximale gemeenschappelijke galweg tijdelijk af. Stel het orgaan bloot uit de buikholte.
Maak vervolgens een tijdelijke occlusie van de distale gemeenschappelijke galwegen met een 8-0 hechting. Om toegang te krijgen tot het gemeenschappelijke galkanaal, doorprik het periampullaire gebied, dat verschijnt als een witachtig deel van de wand van de dunne darm. Met een naald van 0,4 millimeter aangesloten op een polyethyleenbuis van 0,54 millimeter, start u de infusiepomp voor infusie met 2,5% natrium taurocholaatoplossing met een constante snelheid van 10 microliter per 10 gram lichaamsgewicht gedurende drie minuten.
Verwijder na de infusie de microvatclip, de tijdelijke 8-0 hechting en de injectienaald uit de galwegen van de pancreas. Hecht de buik met een 6-0 niet-absorberende monofilament polypropyleen hechting. De tijd tussen de laparotomie en de eindnaad mag niet meer dan 30 minuten zijn.
Na de operatie huisvest je de dieren in polyethyleen dozen bekleed met houtkrullen en water en voedsel ad libitum. Houd het dier voorzichtig vast met de naar achteren getrokken huid, bevordert een licht uitsteeksel van de oogbol en plaats het dier met het oog naar boven gericht. Breng een druppel oogzalf met lokale verdoving in het oog van het dier.
Plaats het uiteinde van een capillaire buis in de mediale ooghoek en breng deze voorzichtig onder de oogbol in een hoek van ongeveer 30 tot 45 graden. Draai de capillaire buis totdat de bloedstroom begint. Zodra de verzameling voorbij is, zorg dan voor homeostase door de oogleden gesloten te houden met lichte compressie.
Injecteer later met behulp van een naald van 27 gauge vier milliliter ijskoude PBS in de peritoneale holte van de muis. Masseer na de injectie het peritoneum gedurende 10 seconden voorzichtig om aangehechte cellen te verwijderen. Maak met een schaar en pincet een kleine snede van 0,5 centimeter op de binnenhuid en spieren om de buikholte bloot te leggen.
Plaats een bolpipet in het peritoneum en verzamel zoveel mogelijk vocht, zorg ervoor dat vetweefsel niet wordt opgespiratiseerd. Verzamel een deel van de alvleesklier uit het hoofdgebied voor verdere verwerking. Deponeer de verzamelde vloeistof in buizen die op ijs worden bewaard.
Centrifugeer vervolgens de peritoneale vloeistof gedurende vijf minuten op 250 maal G en bewaar het supernatant voor interleukine-6 dosering. Om serum te verkrijgen, centrifugeert u de verzamelde bloedmonsters gedurende 15 minuten op 700 maal G en slaat u het supernatant op voor amylase en interleukine-6 dosering. Analyse van pancreasweefsel 12 uur na inductie van acute pancreatitis toonde intense ontsteking in het aangetaste orgaan in vergelijking met weefselmonsters uit de schijngroep.
Vergelijkbare resultaten werden weergegeven door histologisch onderzoek na hematoxyline eosinekleuring van weefselmonsters van sham en APTA. Analyse van bloedserum toonde een significante toename van de serum amylase en interleukine-6 cytokineconcentratie in de AP-groep in vergelijking met de shamgroep. Tegelijkertijd was de interleukine-6-concentratie significant hoger in peritoneale holtevloeistof in de AP-groep.
De ernst van pancreatitis in dit model is proportioneel afhankelijk van de concentratie, het volume en de druk van de infusie en het tijdstip van acute pancreatitisinductie. Met behulp van deze techniek kunnen de effecten van continue peritoneale lavage op ernstige acute pancreatitis worden bestudeerd.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
