Immunology and Infection
This content is Free Access.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Forenklet helkropsplethysmografi for at karakterisere lungefunktionen under respiratorisk melioidose
Chapters
Summary February 24th, 2023
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Denne protokol præsenterer konstruktionen og brugen af et forenklet helkropsplethysmografiapparat til overvågning af bakteriel respiratorisk sygdomsprogression ikke-invasivt.
Transcript
Brugen af forenklet helkropsplethysmografi kan hjælpe med at kaste lys over forholdet mellem lungefunktion og sygdomsprogression hos forsøgsdyr. Den største fordel ved denne teknik er evnen til at indsamle åndedrætsdata fra ikke-tilbageholdte dyr. Begynd med systemopsætningen ved at forbinde prøveudtagningskammeret til en broforstærker ved hjælp af et otte-benet DIN-stik og broforstærkeren til dataindsamlingsenheden.
Tilslut dataindsamlingsenheden til en strømforsyning og en computer med fysiologisk dataanalysesoftware. Når du er tilsluttet, skal du starte softwaren til grænsefladen med dataindsamlingssystemet. Download det valgfri spirometrimodul i softwaren, og gå til fanen spirometri for at ændre standardenhedsindstillingerne fra liter pr. sekund til mikroliter pr. sekund i indstillingsvinduet.
Til kalibrering af systemet skal du oprette et firekanalsvindue i softwaren. I kanal et skal du indstille kildedata til 4.000 datapunkter pr. sekund prøvehastighed og et millivoltområde. Kanal to vil være det digitale filter på kanalen en ved hjælp af et high-pass, one-hertz, auto-adjust filter.
Opret kanal tre under fanen Udjævning af kanal to data ved at beregne et gennemsnit på 100 prøver. Og opret kanal fire i spirometri flow af kanal tre data. Opsæt derefter datapudeanalyse af kanal fire med tre kolonner.
For kolonne et skal du gå til kanal fire data og kommentarer for at få adgang til fuld kommentartekst. Indstil derefter kolonne to og kanal fire data og cykliske målinger for at vælge gennemsnitlig cyklisk frekvens For kolonne tre og kanal fire data skal du vælge cykliske målinger og gennemsnitlig cyklisk højde. Indstil billedhastigheden til 100 til 1 i nederste højre hjørne af diagramdisplayet, og gem vindueskonfigurationen som en skabelon til fremtidige undersøgelser.
Når du er færdig, skal du lukke prøvekammerets låg og fastgøre en 25-mikroliter gastæt sprøjte til lokkeskottestikket. Monter derefter sprøjten med en Chaney-adapter for at bruge Chaney-adapterens dybdestop til at trække 20 mikroliter luft ind i sprøjten. For derefter at nulstille pleth i softwaren skal du få adgang til opsætningsfanen og vælge nul al input, før du starter en optagelse.
Under optagelsen skal du vente på, at en baseline stabiliseres, og derefter hurtigt trykke og trække sprøjtestemplet tilbage i 10 gentagelser for at replikere motivets vejrtrækning med en målt 20 mikroliter ånde. Når du er færdig, skal du stoppe optagelsen ved at højreklikke på begyndelsen af nummereret pleth-optagelse og mærke identiteten af den målte prøve ved at klikke på tilføj kommentar. Nulstil sprøjten og nul input, og gentag optagelsesmålingerne på 20 mikroliter impulser to gange.
Når du har gennemført alle målingerne i tre optagelsessessioner, skal du bruge computermusen til at vælge en del af vejrtrækningen, der nøjagtigt repræsenterer de kunstige 20-mikroliter vejrtrækninger. Gennemgå derefter kolonnens tre data for gennemsnitlig cyklisk højde og beregn den gennemsnitlige målte åndedrætsvolumen fra de tre optagelser. Åbn en masterskabelon, der er skitseret som beskrevet tidligere.
Placer derefter en bevidst 4-til-12 ugers, kvindelig, albino C57 sort 6J mus i prøveudtagningskammeret og lås låget. Løsn kort lokkeskottehætten for at udligne det atmosfæriske tryk i kammeret og stram hætten igen. Bemærk, at motivet ikke aktivt bevæger sig i prøveudtagningskammeret, før alle indgange nulstilles og en optagelse startes.
Mærk emnets identitet ved at højreklikke på begyndelsen af den nummererede pleth-optagelse og klikke på tilføj kommentar. Returner derefter musen til buret. Vælg en del af vejrtrækningen, der nøjagtigt repræsenterer motivets vejrtrækning.
I datapudemodulet vises data i preview-overskriften, hvilket giver en midlertidig aflæsning af åndedrætsfrekvensen og åndedrætsvolumenet. Dataeksemplet kan optages i datapad'en ved hjælp af ikonet Føj til datapad. Fortsæt med at måle parametrene for en forsøgsmus en ad gangen, og registrer repræsentative dele af vejrtrækningspletten til datapuden.
Efter dataoptagelse skal du eksportere datapaddataene til Excel og beregne minutvolumen. Ved klinisk brug af helkropsplethysmografi påvirker forsøgspersonens egen kropstemperatur og miljøtemperatur og fugtighed de komplekse respirationsberegninger. I undersøgelsen kontrolleres en forenklet helkropsplethysmografi eller SWBP-tilgang til variation i miljøtemperatur og fugtighed, og det blev observeret, at bidraget til temperatur og fugtighed hos værten selv ikke påvirker nøjagtigheden af åndedrætsmålinger af et kalibreringsvolumen på 20 mikroliter.
Virkningen af inhalerede anæstetika på vejrtrækning af mus blev undersøgt. Den grundlæggende vejrtrækning før anæstesi og vejrtrækningen, mens musen er ved at komme sig efter anæstesi, er vist her. Behandlingen med den foretrukne bedøvelse fik musene til at udvise en langsom vejrtrækning med et stort tidevandsvolumen.
Efterhånden som musene kommer sig efter sedation, steg åndedrætshastigheden, og åndedrætsvolumen faldt gradvist. På samme måde steg åndedrætsfrekvensen støt, indtil den grundlæggende vejrtrækning er genoprettet til 2 til 2,5 minutter efter fjernelse fra anæstesi. Minutvolumenet fulgte nøje virkningerne af åndedrætshastigheden, der nåede baseline minutvolumen med 2,5 minutter efter fjernelse fra anæstesi.
Åndedrætsændringerne under respiratoriske melioidoseinfektioner blev overvåget hos værtsmusene. Musenes åndedrætshastighed og totale inspirerede luft faldt hurtigt i løbet af den første infektionsdag og forblev lav i resten af sygdomsforløbet. I modsætning hertil falder åndedrætsvolumen ikke stejlt i løbet af de første 24 timer og har i stedet et støt fald over til sygdommens tre-dages forløb.
Disse data tyder på, at åndedrætsvolumen kan give en biometrisk aflæsning af sværhedsgraden af luftvejssygdomme hos mus. Den vigtigste ting at huske, mens du prøver denne procedure, er at vente, indtil musen ikke bevæger sig, før du begynder at optage. Nogle gange må du have tålmodighed, mens en nysgerrig mus udforsker prøveudtagningskammeret.
Denne teknik vil bane vejen for at undersøge, hvordan bakterielle mutanter udviser forskellige virkninger på værtslungefunktionen under deres ændrede sygdomsproces, og hvordan terapeutisk intervention kan fremskynde genoprettelsen af normal lungefunktion hos inficerede mus.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
