Immunology and Infection
This content is Free Access.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Vereenvoudigde plethysmografie van het hele lichaam om de longfunctie tijdens respiratoire melioïdose te karakteriseren
Chapters
Summary February 24th, 2023
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Dit protocol presenteert de constructie en het gebruik van een vereenvoudigd plethysmografie-apparaat voor het hele lichaam om de progressie van bacteriële respiratoire aandoeningen niet-invasief te volgen.
Transcript
Het gebruik van Simplified Whole Body Plethysmography kan helpen licht te werpen op de relatie tussen longfunctie en ziekteprogressie bij onderzoeksdieren. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is de mogelijkheid om ademhalingsgegevens van niet-ingehouden dieren te verzamelen. Begin met de systeemconfiguratie door de bemonsteringskamer aan te sluiten op een brugversterker met behulp van een achtpolige DIN-connector en de brugversterker op het gegevensacquisitieapparaat.
Sluit het data-acquisitieapparaat aan op een voeding en een computer met fysiologische data-analysesoftware. Wanneer de verbinding tot stand is gebracht, start u de software om te communiceren met het gegevensverzamelingssysteem. Download de optionele spirometriemodule in de software en ga naar het tabblad spirometrie om de standaardinstellingen van de eenheid te wijzigen van liter per seconde naar microliter per seconde in het instellingenvenster.
Voor de kalibratie van het systeem maakt u een vierkanaalsvenster in de software. Stel in kanaal één de brongegevens in op 4.000 gegevenspunten per seconde steekproeffrequentie en één millivoltbereik. Kanaal twee zal het digitale filter van het kanaal één zijn met behulp van een high-pass, one-hertz, auto-adjust filter.
Maak kanaal drie op het tabblad vloeiend maken van kanaal twee-gegevens door gemiddeld 100 voorbeelden te gebruiken. En maak kanaal vier in spirometriestroom van kanaal drie gegevens. Stel vervolgens datapadanalyse van kanaal vier in met drie kolommen.
Ga voor kolom één naar kanaal vier gegevens en opmerkingen om toegang te krijgen tot de volledige commentaartekst. Stel vervolgens kolom twee in en kanaal vier gegevens en cyclische metingen om gemiddelde cyclische frequentie te selecteren Voor kolom drie en kanaal vier gegevens, selecteer cyclische metingen en gemiddelde cyclische hoogte. Stel de framesnelheid in op 100 tot 1 in de rechterbenedenhoek van het grafiekscherm en sla de vensterconfiguratie op als sjabloon voor toekomstige studies.
Als u klaar bent, sluit u het deksel van de monsterkamer en bevestigt u een gasdichte spuit van 25 microliter aan de connector van het kunstaasschot. Monteer vervolgens de spuit met een Chaney-adapter om de dieptestop van de Chaney-adapter te gebruiken om 20 microliter lucht in de spuit te trekken. Vervolgens, om de pleth in de software op nul te zetten, opent u het tabblad Setup en selecteert u nul alle invoer voordat u een opname start.
Wacht tijdens het opnemen tot een basislijn is gestabiliseerd en druk vervolgens snel de zuiger van de spuit in en trek deze op gedurende 10 herhalingen om de ademhaling van de proefpersoon te repliceren met een gemeten adem van 20 microliter. Als u klaar bent, stopt u de opname door met de rechtermuisknop op het begin van de genummerde pleth-opname te klikken en labelt u de identiteit van het gemeten monster door op Opmerking toevoegen te klikken. Reset de spuit en nul de invoer en herhaal de opnamemetingen van pulsen van 20 microliter tweemaal.
Nadat u alle metingen in drie opnamesessies hebt voltooid, gebruikt u de computermuis om een deel van het ademhalingsplet te selecteren dat nauwkeurig de kunstmatige ademhalingen van 20 microliter vertegenwoordigt. Bekijk vervolgens de kolom drie gegevens voor de gemiddelde cyclische lengte en bereken het gemiddelde gemeten ademvolume van de drie opnames. Open een hoofdsjabloon die is beschreven zoals eerder beschreven.
Plaats vervolgens een bewuste 4-tot-12 weken, vrouwelijke, albino C57 zwarte 6J muis in de bemonsteringskamer en sluit het deksel. Maak de kunstaasschotdop kort los om de atmosferische druk in de kamer gelijk te trekken en draai de dop opnieuw aan. Merk op dat het onderwerp niet actief beweegt in de bemonsteringskamer voordat alle ingangen op nul worden gezet en een opname wordt gestart.
Label de identiteit van het onderwerp door met de rechtermuisknop op het begin van de genummerde pleth-opname te klikken en op Opmerking toevoegen te klikken. Breng de muis vervolgens terug naar de kooi. Selecteer een deel van het ademhalingsplet dat de ademhaling van het onderwerp nauwkeurig weergeeft.
In de datapadmodule verschijnen gegevens in de voorbeeldkoptekst die een tijdelijke uitlezing van de ademfrequentie en het ademvolume bieden. Het gegevensvoorbeeld kan worden opgenomen in het gegevenspad met behulp van het pictogram Toevoegen aan gegevenspad. Ga door met het één voor één meten van de parameters voor een muis en registreer representatieve delen van de ademhalingsplet op het gegevenskussen.
Exporteer na het vastleggen van de gegevens de gegevensblokgegevens naar Excel en bereken het minuutvolume. Bij klinisch gebruik van plethysmografie van het hele lichaam beïnvloeden de eigen lichaamstemperatuur en omgevingstemperatuur en vochtigheid van het onderwerp de complexe ademhalingsberekeningen. In de studie controleert een Vereenvoudigde Whole-Body plethysmografie of SWBP-benadering voor omgevingstemperatuur en vochtigheidsvariatie, en er werd waargenomen dat de bijdrage aan temperatuur en vochtigheid van de gastheer zelf geen significante invloed heeft op de nauwkeurigheid van ademmetingen van een kalibratievolume van 20 microliter.
Het effect van geïnhaleerde anesthetica op de ademhaling van muizen werd onderzocht. De basisademhaling vóór anesthesie en de ademhaling terwijl de muis herstelt van de anesthesie worden hier weergegeven. De behandeling met de voorkeursanesie zorgde ervoor dat de muizen een langzame ademfrequentie vertoonden met een groot getijdenvolume lucht.
Naarmate de muizen herstellen van sedatie, nam de ademfrequentie toe en nam het ademvolume geleidelijk af. Evenzo nam de ademfrequentie gestaag toe totdat de basisademhaling is hersteld tot 2 tot 2,5 minuten na verwijdering uit de anesthesie. Het minuutvolume volgde nauwgezet de effecten van de ademfrequentie die het baseline minuutvolume bereikte 2,5 minuten na verwijdering uit de anesthesie.
De ademveranderingen tijdens respiratoire melioidose-infecties werden gecontroleerd bij de gastheermuizen. De ademfrequentie en totale geïnspireerde lucht van de muizen daalden snel tijdens de eerste dag van infectie en bleven laag voor de rest van het verloop van de ziekte. Daarentegen daalt het ademvolume niet steil tijdens de eerste 24 uur en heeft het in plaats daarvan een gestage afname tot het driedaagse verloop van de ziekte.
Deze gegevens suggereren dat ademvolume een biometrische uitlezing van de ernst van de ademhalingsziekte bij muizen kan bieden. Het belangrijkste om te onthouden tijdens het proberen van deze procedure is om te wachten tot de muis niet beweegt voordat u begint met opnemen. Soms moet je geduld hebben terwijl een nieuwsgierige muis de bemonsteringskamer verkent.
Deze techniek zal de weg vrijmaken om te onderzoeken hoe bacteriële mutanten verschillende effecten vertonen op de longfunctie van de gastheer tijdens hun veranderde ziekteproces, en hoe therapeutische interventie het herstel van de normale longfunctie bij geïnfecteerde muizen kan versnellen.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
