Immunology and Infection
This content is Free Access.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
פלתיסמוגרפיה פשוטה של כל הגוף כדי לאפיין את תפקוד הריאות במהלך מליואידוזיס נשימתי
Chapters
Summary February 24th, 2023
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
פרוטוקול זה מציג את הבנייה והשימוש של מנגנון פלתיסמוגרפיה פשוטה לכל הגוף כדי לעקוב אחר התקדמות מחלות נשימה חיידקיות באופן לא פולשני.
Transcript
השימוש בפלתיסמוגרפיה פשוטה לכל הגוף יכול לעזור לשפוך אור על הקשר בין תפקוד הריאות להתקדמות המחלה בחיות מחקר. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא היכולת לאסוף נתונים נשימתיים מבעלי חיים שאינם מרוסנים. התחל עם הגדרת המערכת על-ידי חיבור תא הדגימה למגבר גשר באמצעות מחבר DIN בן שמונה פינים ומגבר הגשר להתקן איסוף הנתונים.
חבר את התקן איסוף הנתונים לספק כוח ולמחשב באמצעות תוכנה לניתוח נתונים פיזיולוגיים. כאשר אתה מחובר, הפעל את התוכנה כדי להתממשק עם מערכת איסוף הנתונים. הורד את מודול הספירומטריה האופציונלי בתוכנה ועבור לכרטיסייה ספירומטריה כדי לשנות את הגדרות היחידה המוגדרות כברירת מחדל מליטר לשנייה למיקרוליטר לשנייה בחלון ההגדרות.
לכיול המערכת, צור חלון של ארבעה ערוצים בתוך התוכנה. בערוץ הראשון, הגדר נתוני מקור בקצב דגימה של 4, 000 נקודות נתונים לשנייה וטווח של מילי-וולט אחד. ערוץ 2 יהיה המסנן הדיגיטלי של הערוץ הראשון באמצעות מסנן מעבר גבוה, אחד הרץ, התאמה אוטומטית.
צור ערוץ 3 בכרטיסיית ההחלקה של נתוני ערוץ שתיים על-ידי ממוצע של 100 דוגמאות. וליצור ערוץ ארבע בזרימת ספירומטריה של נתוני ערוץ שלוש. לאחר מכן, הגדר ניתוח לוח נתונים של ערוץ ארבע עם שלוש עמודות.
עבור עמודה אחת, עבור אל ערוץ ארבע נתונים והערות כדי לגשת לטקסט הערה מלא. לאחר מכן הגדר נתונים בעמודה שתיים וערוץ ארבע ומדידות מחזוריות כדי לבחור תדר מחזורי ממוצע עבור נתוני עמודה שלוש וערוץ ארבע, בחר מדידות מחזוריות וגובה מחזורי ממוצע. הגדר את קצב הפריימים ל- 100 ל- 1 בפינה השמאלית התחתונה של תצוגת התרשים ושמור את תצורת החלון כתבנית למחקרים עתידיים.
בסיום, סגור את מכסה תא הדגימה והצמד מזרק אטום לגז של 25 מיקרוליטר למחבר ראש הפיתיון. לאחר מכן התאם את המזרק למתאם Chaney כדי להשתמש בעצירת העומק של מתאם Chaney כדי למשוך 20 מיקרוליטרים של אוויר לתוך המזרק. לאחר מכן, כדי לאפס את pleth בתוכנה, גש לכרטיסיית ההתקנה ובחר אפס את כל הקלט לפני תחילת ההקלטה.
בזמן ההקלטה, המתן עד שנקודת ההתחלה תתייצב ולאחר מכן לחץ במהירות ומשך את בוכנת המזרק במשך 10 חזרות כדי לשכפל את נשימת הנושא עם נשימה מדודה של 20 מיקרוליטר. לאחר שתסיים, עצור את ההקלטה על ידי לחיצה ימנית על תחילת הקלטת pleth ממוספרת ותייג את זהות המדגם שנמדד על ידי לחיצה על הוסף הערה. אפס את המזרק ואפס את הקלט, וחזור על מדידות ההקלטה של פולסים של 20 מיקרוליטר פעמיים.
לאחר השלמת כל המדידות בשלושה מפגשי הקלטה, השתמש בעכבר המחשב כדי לבחור חלק מפלטת הנשימה המייצגת במדויק את הנשימות המלאכותיות של 20 מיקרוליטר. לאחר מכן, סקור את העמודה שלוש נתונים עבור גובה מחזורי ממוצע וחשב את נפח הנשימה הממוצע שנמדד משלוש ההקלטות. פתח תבנית אב המתוארת כמתואר קודם לכן.
לאחר מכן, הכניסו לתא הדגימה עכבר 6J שחור נקבה בן 4 עד 12 שבועות, לבקנים C57, ותפסו את המכסה. שחררו לזמן קצר את מכסה הפיתיון כדי להשוות את הלחץ האטמוספרי בתא ולהדק מחדש את המכסה. שים לב שהנושא אינו נע באופן פעיל בתוך תא הדגימה לפני שהוא מאפס את כל הקלטים ויוזם הקלטה.
תייג את זהות הנושא על ידי לחיצה ימנית על תחילת הקלטת pleth הממוספרת ולחיצה על הוסף תגובה. לאחר מכן החזירו את העכבר לכלוב. בחר חלק של pleth הנשימה המייצג במדויק את הנושא נושם.
במודול לוח הנתונים, הנתונים יופיעו בכותרת התצוגה המקדימה המספקת קריאה זמנית של קצב הנשימה ונפח הנשימה. ניתן להקליט את התצוגה המקדימה של הנתונים בלוח הנתונים באמצעות סמל הוספה ללוח הנתונים. המשך למדוד את הפרמטרים עבור עכבר נושא בזה אחר זה, ולרשום חלקים מייצגים של פלטת הנשימה למשטח הנתונים.
לאחר הקלטת הנתונים, ייצא את נתוני לוח הנתונים ל- Excel וחשב את נפח הדקות. בשימוש קליני בפלתיסמוגרפיה של כל הגוף, טמפרטורת הגוף של הנושא וטמפרטורת הסביבה, והלחות משפיעים על חישובי הנשימה המורכבים. במחקר, גישה פשוטה של פלתיסמוגרפיה של כל הגוף או SWBP שולטת בשינויי טמפרטורה ולחות סביבתיים, ונצפתה כי התרומה לטמפרטורה וללחות של המארח עצמו אינה משפיעה באופן משמעותי על דיוק מדידות הנשימה של נפח כיול של 20 מיקרוליטר.
נבדקה השפעת חומרי הרדמה בשאיפה על נשימת עכברים. הנשימה הבסיסית לפני ההרדמה והנשימה בזמן שהעכבר מתאושש מההרדמה מוצגות כאן. הטיפול בחומר ההרדמה המועדף גרם לעכברים להפגין קצב נשימה איטי עם נפח אוויר גדול.
ככל שהעכברים מתאוששים מהרגעה, קצב הנשימה עלה ונפח הנשימה ירד בהדרגה. באופן דומה, קצב הנשימה עלה בהתמדה עד שהנשימה הבסיסית משוחזרת ל-2 עד 2.5 דקות לאחר ההסרה מההרדמה. נפח הדקות עקב מקרוב אחר ההשפעות של קצב הנשימה שהגיע לנפח הדקה הבסיסית ב-2.5 דקות לאחר ההסרה מההרדמה.
שינויי הנשימה במהלך זיהומים מליואידוזיס בדרכי הנשימה היו במעקב בעכברים המארחים. קצב הנשימה והאוויר הכולל של העכברים ירדו במהירות במהלך היום הראשון להדבקה ונותרו נמוכים למשך שארית המחלה. לעומת זאת, נפח הנשימה אינו יורד בתלילות במהלך 24 השעות הראשונות ובמקום זאת יש ירידה מתמדת במהלך שלושת הימים של המחלה.
נתונים אלה מצביעים על כך שנפח הנשימה עשוי לספק קריאה ביומטרית של חומרת מחלות בדרכי הנשימה בעכברים. הדבר החשוב ביותר שיש לזכור בעת ניסיון הליך זה הוא להמתין עד שהעכבר אינו זז לפני שתתחיל להקליט. לפעמים אתה חייב סבלנות בזמן שעכבר סקרן חוקר את תא הדגימה.
טכניקה זו תסלול את הדרך לחקור כיצד מוטנטים חיידקיים מפגינים השפעות שונות על תפקוד הריאות המארחות במהלך תהליך המחלה המשתנה שלהם, וכיצד התערבות טיפולית יכולה להאיץ את שיקום תפקוד הריאות התקין בעכברים נגועים.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.