Farelerde İçSel Kardiyak Pacemaking Kusurlarını Belirlemek için Sinoatrial Düğüm Ateşleme Hızının Mikroelekrod Dizisi Kaydı

İç kalp atış hızının ölçülmesi kalp sağlığının önemli bir göstergesidir. Bu teknik, sinoatriyal düğüm üzerindeki şaşırtıcı etkilerin çoğunu hariç tutarken bu oranı doğru bir şekilde ölçmektedir. mea iç kalp atış hızı kaydı, kapsamlı elektrofizyoloji eğitimi olmadan tek hücreli kayıtlara benzer doğru atış hızı verilerini yakalar.

Bu tekniği kullanan bireyler erken deneylerde sağlıklı doku preparatları elde etmekte zorlanabilirler, bu nedenle diseksiyonu uygulayın ve gerçek veri toplamaya başlamadan önce tamponları ve veri toplama ayarlarını optimize edin. Prosedürü gösteren doktorlar Man Si ve Praveen Kumar, laboratuvarımdaki doktora sonrası araştırmacılar. Ötenazili farenin derisini bir hemostatla tutarak başlayın ve sol costal kemerden sağ costal kemere kadar göğüs kafesinin hemen altındaki deride enine bir kesi yapmak için cerrahi makas kullanın.

Peritonun açılmasını kesmek için cerrahi makas kullanın ve aşırı kanamayı önlemek için karaciğeri kesmeden karaciğeri diyaframdan dikkatlice ayırın. Torasik boşluğu açığa çıkarmak için toraks boyunca diyaframı inkübe edin. Kalbi ortaya çıkarmak için göğüs kafesinin yanal duvarlarını costal kemerlerin kenarlarından köprücük kemiğine kadar kesmek için cerrahi makası kullanın, ardından kaburgayı omuza sabitlemek için 23 kalibrelik bir şırınga iğnesi kullanın.

Nemli tutmak için sıcak heparinize komple Tyrode çözeltisini kalbe bırakmak için bir transfer pipeti kullanın. Akciğerleri ekstra ince Graefe tokmaklarıyla tutun ve akciğerleri çıkarmak için ameliyat makasıyla nefes borusunun kesilmesi. Kalbi çıkarmak için, ekstra ince Graefe forseps ile kalbin tepesini tutun ve cerrahi makasla aort ve alt vena kavayı kesin.

Kalbi kürlenmiş silikon elastomer içeren bir Petri kabına aktarın ve kalbi iki ila üç mililitre sıcak heparinize komple Tyrode çözeltisi ile yıkamak için bir transfer pipet kullanın. Kalbin tepesini bir diseksiyon pimi ile yemeğe takın. Alt vena kavayı Dumont 2 laminektomi asası ile tutun.

Sinoatriyal düğümün yaklaşık konumunu da tanımlayan sağ atriyumdaki konumlarını bulmak için alt ve üstün vena kava içinden 22 kalibrelik bir şırınga iğnesi yerleştirin. Dumont 2 laminektomi tokadı ile doğru atriyal apandisiti tutun ve yerinde tutmak için sağ atriyal ekten bir diseksiyon iğnesi koyun. Sol atriyal ek için aynı prosedürü tekrarlayın, ardından vena cavae’yi kapsayan şırınga iğnesini çıkarın.

Castroviejo makasını kullanarak kalpten kanı serbest bırakmak için ventriküller boyunca enine bir kesi yaparak kalbin tepesini çıkarın, ardından sıcak heparinize komple Tyrode çözeltisi ekleyerek kalbi yıkayın. Attriyot ventriküllerden ayrılana kadar atriyoventriküler septum boyunca kesmek ve kesiyi ventriküle daha yakın tutmak için Castroviejo makasını kullanın. Sol kulakçık çıkarmak için interarterial septum boyunca kesin.

Diseksiyon pimlerini düz hale getirmek için sağ atriyumun çevresine yerleştirin. Castroviejo makasını kullanarak atriyumdan kalan yağları, damarları veya dokuları çıkarın ve sağ atriyumdaki sinoatriyal düğümü bulun. Giriş çözümü modeline Tyrode’un çözümünü ekleyin ve Tırrode’un çözeltisini oksijene almak için karbojen gazı akışını açın.

Peristaltik pompayı dakikada iki mililitre akış hızı veren 25 RPM’ye ayarlayın. Pompayı çalıştırdıktan sonra, tamponun sistemden sızmadığından emin olun ve sıcaklık kontrol cihazını 37 santigrat dereceye ayarlayın. Diseksiyonlu dokuyu diseksiyon Petri kabından mikroelektod dizi ızgarasına aktarmak için Dumont 55 tokadını kullanın.

Elektrot ızgarasının sinoatrial düğüm bölgesini kaplamak için dokuyu yumuşak bir boya fırçasıyla hafifçe yerleştirin. Daha sonra kemik kümeslerini veya kavisli kümesleri kullanarak ağı dokunun üzerine yerleştirin. Kemik tokalarını kullanarak, her şeyi yerinde tutmak için arp çapasını ağ üzerine yerleştirin.

Mikroelekrod dizi çanağını konnektör plakasına yerleştirin. Perfüzyon kapağını arp dilimi ankrajını bozmadan mikroelektoz dizi kabına dikkatlice yerleştirin ve perfüzyon boşluğunun bantla sabitlensin. Amplifikatörü açın ve yazılımdaki kayıt için bir iş akışı ayarlayın.

beat_recording’ı seçin. moflo şablonu. Açın ve istenen kayıt koşullarına göre izleme sayısını, izleme süresini, izleme aralığını, giriş voltajını, örnekleme hızını ve diğer kayıt parametrelerini ayarlayın.

Kaydı başlatmak ve izlemeler arasında iki dakikalık aralıklarla bir dakikalık sürenin 10 izlemesi için veri almak için kaydet ve oynat düğmesini tıklatın. Pompayı duraklatın ve pompa giriş borularını normal kayıt çözümünden Tyrode’un istenen ilacı içeren çözeltisine geçirin. Pompayı yeniden başlatın ve kayda devam edin.

İlaçla aşılanan Tyrode’un çözeltisi dokuya ulaştıktan sonra, temel kayıtlar için daha önce olduğu gibi 10 iz kaydedin. Mikroelekrod dizisindeki dokunun konumunun son bir resmini çekin. Kaydedilen kayıtlı veri dosyasını analiz yazılımının beat frekans analizi şablonunda açın.

Oynat’a tıklayın ve tüm kaydın veri görselleştirme için çalışmasına izin verin ve ardından uygun analiz parametreleri atayın. Analize dahil edilecek kanalları seçin ve otomatik dalga biçimi tepe tanımlaması için istenen genlik maxima veya genlik minima eşik değerlerini ayarlayın. Veri kümesini yeniden yürütmek ve analiz parametrelerinin bir ani ayıklama için uygun olduğunu onaylamak için oynat simgesine tekrar tıklayın.

Analiz için, deneyin temel döneminde çoğu kanalda her iz için kararlı bir dayak oranı gösteren en kararlı üç ardışık izi ve uyuşturucuya maruz kalma süresi boyunca ardışık üç kararlı iz tanımlayın. Analizi başlatmak için oynat ve kaydet simgesini tıklatın. Veriler, sinoatriyal düğüm atım frekans ölçümü için 45 günlük erkek vahşi tip siyah İsviçre faresinden toplandı.

Farklı şekil ve genliklere sahip dalga formları farklı kanallarda gözlendi ve tüm kanallarda aynı ara aralıklar ve ateşleme frekansları görüldü. Bununla birlikte, elektrotla doku temasının derecesi genlik gibi dalga biçimi özelliklerini de etkileyebilir. Kaydedilen 10 izden, daha fazla analiz için kararlı vuruş frekansı ve aralama aralığına sahip ardışık üç kanal seçildi.

Kötü ayıklanmış başak desenleri bulunmamalıdır, ancak varsa gürültüden etkilenir veya kararsızdır. Bireysel kalp atışlarına karşılık gelen dalga şekilleri içsel kardiyak tempo yapma aktivitesini yansıtır. Mikroelektod dizi sistemi, farmakolojik etkileri analiz etmek için ilaç ajanlarının kolay uygulanmasını sağlar.

Örnekleme verilerinde, seçilen üç iz arasında 64 kanalın tamamında iç atış hızı dakikada yaklaşık 320 atım olarak bulunmuştur. 4-aminopyrimidine’in tanıtılması, beklendiği gibi ara aralıkları artırdı ve bu da vuruş sıklığını dakikada 320’den 210 atıma düşürtü. Analiz için güvenilir veri toplamak için, izlerin stabil olduğunu ve standart kriterleri karşıladığını doğrulayarak kayıt sırasında dokunun sağlıklı olduğunu doğrulamak önemlidir.

MEA’lar kalbin diğer bölgelerindeki kardiyak aktiviteyi kaydetmek için kullanılabilir ve genetik ve farmakolojik manipülasyonun etkilerini incelemek için uygun olan bölgeye özgü ayrıntılı karakterizasyona izin verir.