/
/
Chemische modificatie van het tryptofaanresidu in een recombinant Ca2 +-ATPase N-domein voor het bestuderen van tryptofaan-ANS FRET
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Chapters
- 00:03Introduction
- 01:15Determination (in silico) of the ANS and SERCA N‐Domain Interaction
- 03:09Expression and Purification of the Recombinant N‐Domain
- 03:39Monitor the Formation of the ANS‐N‐Domain Complex Based on ANS and N‐Domain Fluorescence Intensity Changes
- 07:38N‐Domain Intrinsic Fluorescence Titration by Trp Chemical Modification with NBS
- 08:43Titrate the NBS Modified N‐Domain with ANS by Recording Fluorescence Spectra at 25°C
- 09:37Evidence of ANS Binding to the Chemically Modified N‐Domain by Excitation at λ = 370 nm
- 10:32Results Overview
- 11:30Conclusions
ANS bindt aan het Ca2+-ATPase recombinant N-domein. Fluorescentiespectra vertonen een FRET-achtig patroon bij excitatie bij een golflengte van 295 nm. NBS-gemedieerde chemische modificatie van Trp dooft de fluorescentie van het N-domein, wat leidt tot de afwezigheid van energieoverdracht (FRET) tussen het Trp-residu en ANS.
