Author Produced

Ортотопическая задних конечностей трансплантации у крыс

* These authors contributed equally
Immunology and Infection

Your institution must subscribe to JoVE's Immunology and Infection section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Здесь мы опишем ортотопической крысы задних конечностей трансплантации процедура, которая, кажется, золотой стандарт

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Sucher, R., Oberhuber, R., Margreiter, C., Rumberg, G., Jindal, R., Lee, W. A., Margreiter, R., Pratschke, J., Schneeberger, S., Brandacher, G. Orthotopic Hind-Limb Transplantation in Rats. J. Vis. Exp. (41), e2022, doi:10.3791/2022 (2010).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Композитный аллотрансплантации ткани (CTA) в настоящее время представляет действующий терапевтический выбор после потери кисти, предплечья или цифр и стала новая терапевтическая лица в восстановительной хирургии. Тем не менее, долгосрочные высокие дозы множественной лекарственной иммуносупрессивной терапии требуется для обеспечения выживания трансплантата, учитывая риск серьезных побочных эффектов, которые поводов более широкое применение. Дальнейшее прогрессирование в этой области может зависеть от лучшего понимания фундаментальной иммунологии и ишемии реперфузии в составных трансплантатов тканей.

На сегодняшний день ортотопической задних конечностей трансплантации у крыс была предпочтительной моделью для грызунов реконструктивной пересадки (RT), тем не менее, это чрезвычайно требовательный процедура, которая требует чрезвычайных навыков микрохирургических для прикрепления сосудистой, костей, мышц и нервов.

Мы ввели сосудистой техники анастомоза манжеты к этой модели, что обеспечивает быстрый и надежный подход к крысе задних трансплантации конечностей. Этот метод упрощает и ускоряет хирургические процедуры и позволяет хирургам с основными опыт микрохирургической успешно выполнять работу с высокой выживаемости и низкий уровень осложнений. Техники, кажется, хорошо подходит для иммунологических, а также ишемии реперфузии (ИРИ) исследований.

Protocol

Операция доноров и задних конечностей Harvest

  1. Для оперативного процедуры стерильный набор микрохирургических инструментов используется. Хирург должен носить надлежащую одежду в том числе стерильные перчатки, которые должны быть изменены до начала хирургического вмешательства.
  2. Крыса под наркозом с внутрибрюшинного введения фенобарбиталом (50mg/kg IP) и помещены на спине на нагревают в полевых условиях, что способствует стабильной температуры тела животного в течение всего хирургического вмешательства.
  3. До рассечения кожи подали работы является продезинфицировать три раза с обоими, дезинфицирующих и алкоголя. Для предотвращения животных роговицы от пересыхания, глаза смазываются мазью глазной (Vidisic) до операции.
  4. Разрез кожи производится через правый пах примерно на уровне паховой связки. Бедренных сосудов расчленены бесплатно с биполярным прижиганием и тупой диссекции, глубокие ветви лигировали с 8-0 шелка.
  5. 300 мкл (50 ЕД) гепарина вводят через вены полового члена для анти-коагуляции.
  6. Бедренные кровеносные лигируют на уровне паховой связки и сократить дистальнее лигатуры.
  7. Задние конечности промывается ледяной (4 ° С) HTK решение (5 мл) через бедренную артерию в течение 5 минут.
  8. Все группы мышц резко разделились с ножницами и остеотомия производится с вращающихся электрических увидел на уровне нижней трети бедра.
  9. Собрано конечности, затем погружен в 20 мл ледяной решение HTK для сохранения и холодного хранения до трансплантации.

Получатель Эксплуатация и трансплантации

  1. Крыса под наркозом с внутрибрюшинного введения фенобарбитала и помещены на спине на операции на местах.
  2. Разрез кожи производится через правый пах примерно на уровне паховой связки. Бедренных сосудов расчленены бесплатно с биполярным прижиганием и тупой диссекции.
  3. Бедренные кровеносные лигируют как дистальной насколько возможно, но проксимальнее эпигастральной взлета судна. Сосудистые зажимы находятся на уровне паховой связки на артерии и вены.
  4. Полиэтиленовые манжеты натягивается артерии (внутри манжеты диаметром: 0,912 мм, манжета-Толщина стенки: 0,010 мм, длина манжета: 2,0 мм) и вены (внутри манжеты диаметром 1,151 мм, манжета-Толщина стенки: 0,010 мм, длина манжета : 2,0 мм). Край просвет сосуда, затем вытащил с судна расширитель и бедренную артерию и вены вывернутые по всему телу от манжеты (примерно 2 мм) и фиксируется с окружной 8-0 шелковые лигатуры.
  5. Чтобы освободить место для доноров конечностей получателя конечностей снимается с острыми рассечение мышечных групп и остеотомия выполняется на середине бедра.
  6. Доноров конечности удаляют из раствора HTK и трансплантации начинается с остеосинтез бедренной кости использованием 18-игла (длина 1,5-2,0 см), как интрамедуллярного стержня.
  7. Брюшной групп мышц тесно приближается с 4-0 Викрил или Prolene узловыми швами.
  8. Сосудистые анастомозы выполняются, потянув вену донора и артерии более получателей вены и манжеты комплекса. Окружная 8-0 шелковой лигатурой снова помещен в безопасное анастомоза.
  9. Венозный зажим выпущен следуют артериальной зажим, и реперфузии визуализируется возвращение цвет дистальных конечностей и ног, а также пульсирующий поток через артерии.
  10. Остальные спинной группы мышц повторно аппроксимируются 4-0 Викрил или Prolene узловыми швами.
  11. Кожа закрыта с 4-0 Викрил или проленовой узловыми швами.
  12. Получатель крыса помещается на грелку и тщательно контролировать до выздоровления.
  13. Получатель животные получают профилактическое назначение антибиотиков (Цефазолин, 20 мг / сут, IM) и Buprenex (0,1 мг / кг, Южная Каролина) в течение трех дней после трансплантации.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Десятилетия экспериментального исследования предшествовали и позволили успешную трансплантацию человеческого стороны в недавнем прошлом. В 1978 году Шапиро и др.. разработаны ортотопической задних модель трансплантации конечностей у крыс, хорошо подходит для изучения различных патологических, физиологических и иммунологических аспектов, а также функциональные результаты составных трансплантатов тканей. Мы модифицировали наиболее сложной частью процедуры, а именно сосудистого анастомоза, путем введения не-шовные манжеты техники. По сравнению с обычной техникой шва это упрощает и ускоряет хирургические процедуры и позволяет хирургам с основными опыт микрохирургической проводить процедуры с высокой выживаемости (80-90%).

Без изменчивости зашивается анастомозы, риск кровотечения, тромбоза и перегибов на ножке уменьшаются. Сужение или турбулентности в месте, где кровь сначала сталкивается с просветом, проходящих через манжета нового потенциального риска манжеты технику, хотя это может быть сведено к минимуму с соответствующим выбором размера манжеты. Кроме того, небольшие несоответствия размера могут быть легко обращаться с манжетой анастомоза, опять же снижение риска, связанного с ушиванием судов различного диаметра. Некоторые из наиболее важных соображений для успешного анастомоза манжеты, приведены ниже:

  1. Однократное введение фенобарбитала (50 мг / кг IP) должна быть достаточной для обезболивания животных в течение 90 минут. В случае, если операция длится более 70-80 минут дополнительная доза 15мг/кг IP должен быть применен. Глубина анестезии могут быть проверены во время операции, повторяя ног-пинча рефлекс испытания.
  2. Остеотомия доноров задних конечностей / получателя задние конечности должны быть выполнены на середине бедра, чтобы облегчить остеосинтеза при пересадке.
  3. Тщательный подбор манжеты размеров имеет решающее значение для успешной реваскуляризации.
  4. Чтобы избежать тромбозов, гепарин (50IU) следует назначать доноров 1 минуту до трансплантата перфузии.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Нет конфликта интересов объявлены.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Nembutal® OVATION Pharmaceuticals
Heparin Immuno Ebewe Pharma
Custodiol HTK Solution Essential Pharmaceuticals
Adventitia Scissors ASSI ASSI®SAS-21 R-8T
Forceps ASSI ASSI®JFC-7
Dilator Forceps ASSI ASSI®D-5AZ
Polymide Tubes River Tech Medical #17; #19

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Shapiro, R. I., Cerra, F. B. A model for reimplantation and transplantation of a complex organ: the rat hind limb. J Surg Res. 24, (6), 501-506 (1978).
  2. Petruzzo, P. The international registry on hand and composite tissue transplantation. Transplantation. 86, (4), 487-492 (2008).
  3. Schneeberger, S. First forearm transplantation: outcome at 3 years. Am J Transplant. 7, (7), 1753-1762 (2007).

Comments

1 Comment

  1. I'm a medical Laboratory Scientist, a young graduate of Virology working in Microbiology, National Hospital, Abuja, Nigeria, Africa. My interest is on tissue culture technology, please, how i get your assistance? Please contact me as follows: +²34-8064²²9²75

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 14, 2010 - 3:24 AM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics