Author Produced

השתלת orthotopic לימב הינד-בחולדות

* These authors contributed equally
Immunology and Infection

Your institution must subscribe to JoVE's Immunology and Infection section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

כאן אנו מתארים את העכברוש orthotopic איבר האחוריות, הליך ההשתלה, אשר נראה כי תקן הזהב

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Sucher, R., Oberhuber, R., Margreiter, C., Rumberg, G., Jindal, R., Lee, W. A., Margreiter, R., Pratschke, J., Schneeberger, S., Brandacher, G. Orthotopic Hind-Limb Transplantation in Rats. J. Vis. Exp. (41), e2022, doi:10.3791/2022 (2010).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Allotransplantation רקמות Composite (CTA) עכשיו מהווה אופציה טיפולית תקף לאחר אובדן של האמה ביד, או ספרות הפכה לישות טיפולית חדשנית של ניתוח שיקומי. עם זאת, לטווח ארוך במינון גבוה סמים רב טיפול לדיכוי המערכת החיסונית נדרשת כדי להבטיח הישרדות השתל, הנושאת את הסיכון של תופעות לוואי חמורות אשר קולר יישום רחב יותר. התקדמות נוספת בתחום זה תלויה הבנה טובה יותר של בסיסי אימונולוגיה reperfusion איסכמיה פגיעה ברקמות שתלי מרוכבים.

נכון להיום, השתלת איבר orthotopic האחוריות של חולדות כבר מכרסם את המודל המועדף שחזור השתלה (RT), לעומת זאת, הוא הליך מאוד תובעני שדורש מיומנויות microsurgical יוצאת דופן וחיבור מחדש של כלי הדם, העצמות, השרירים והעצבים.

יש לנו הציג את הטכניקה וסקולרית השקה השרוול מודל זה, מתן גישה מהירה ואמינה עכברוש השתלת איבר האחוריות. טכניקה זו מפשטת ומקצרת את הליך כירורגי ומאפשרת למנתחים בעלי ניסיון בסיסי microsurgical בהצלחה לבצע את הפעולה עם הישרדות גבוהים שיעורי סיבוכים נמוך. הטכניקה נראית גם מתאים החיסונית, כמו גם פגיעה reperfusion איסכמיה (IRI) מחקרים.

Protocol

מבצע התורם הינד ו-Harvest לימב

  1. במשך ההליך האופרטיבי להגדיר סטרילית של microsurgical מכשירים מנוצל. המנתח צריך ללבוש לבוש הולם, כולל כפפות סטריליות, אשר צריך להיות שונה לפני תחילת ההליך הכירורגי.
  2. חולדה הוא הרדים עם זריקה intraperitoneal של pentobarbital (IP 50mg/kg) והניח פרקדן על שדה הניתוח מחוממת, המאפשר טמפרטורת גוף יציבה החיה לאורך כל ההליך הכירורגי.
  3. לפני חתך עור הגישה של המבצע הוא מחוטא שלוש פעמים כל אחד עם שני, חיטוי ואלכוהול. כדי למנוע את קרניות חיות מהתייבשות, העיניים משומנים עם משחת עיניים (Vidisic) לפני הניתוח.
  4. החתך בעור הוא עשה פני במפשעה ימין בערך ברמה של הרצועה מפשעתי. כלי הירך הם גזור חופשי עם הפרעה דו כויה ו דיסקציה קהה; ענפים עמוק הם ligated עם משי 8-0.
  5. 300μl (50 IU) של הפרין מוזרקים דרך הווריד הפין עבור אנטי קרישה.
  6. כלי עצם הירך הם ligated ברמה של הרצועה מפשעתי וחותכים דיסטלי אל המיתר.
  7. איבר האחוריות היא הסמיקה קר כקרח (4 ° C) פתרון HTK (5 מ"ל) דרך עורק הירך מעל 5 דקות.
  8. כל קבוצות השרירים נחלקים באופן חד עם מספריים osteotomy מבוצע עם חשמלי מסתובב ראה ברמה של בשליש דיסטלי של עצם הירך.
  9. איבר שנקטפו הוא שקוע אז 20mL של פתרון קרים כקרח HTK לשימור בקירור עד להשתלה.

נמען מבצע והשתלות

  1. חולדה הוא הרדים עם זריקה intraperitoneal של פרקדן pentobarbital והניחה על שדה הניתוח.
  2. החתך בעור הוא עשה פני במפשעה ימין בערך ברמה של הרצועה מפשעתי. כלי הירך הם גזור חופשי עם הפרעה דו כויה ו דיסקציה קהה.
  3. כלי עצם הירך הם ligated כמו דיסטלי ככל האפשר, אך בקרבה ההמראה כלי ברום הבטן. מהדק דם ממוקמים ברמה של הרצועה מפשעתי על העורק לווריד.
  4. שרוול פוליאתילן הוא עצר העורק (קוטר בתוך השרוול: 0.912, מ"מ השרוול קיר עובי: 0.010 מ"מ, אורך השרוול: 2.0 מ"מ) וריד (בקוטר בתוך השרוול: 1.151 מ"מ; השרוול קיר עובי: 0.010 מ"מ, אורך השרוול : 2.0 מ"מ). בקצה לומן כלי נמשך אז עם המרחיב כלי ואת עורק וריד הירך הם everted על הגוף של השרוול (כ 2 מ"מ) ו קבוע עם ליגטורה 8-0 ההיקפי משי.
  5. כדי לפנות מקום איבר איבר התורם למקבל יוסר עם דיסקציה חריפה של קבוצות שרירים osteotomy מבוצעת אמצע הירך.
  6. איבר התורם יוסר הפתרון HTK והשתלות מתחיל osteosynthesis של עצם הירך באמצעות מחט 18-מד (אורך: 1.5-2.0 ס"מ) כמו מוט intramedullary.
  7. קבוצות שרירים הגחון הם מקורב באופן הדוק עם Vicryl 4-0 או תפרים Prolene.
  8. Anastomoses כלי הדם מבוצעות על ידי משיכת וריד התורם מעל עורק לווריד הנמענים ומורכב השרוול. ליגטורה ההיקפי 8-0 משי ממוקמת שוב כדי לאבטח את השקה.
  9. מהדק ורידי הוא שוחרר לאחר מכן תפס העורקים, ו reperfusion הוא מדמיין על ידי החזרת צבע האיבר הדיסטלי רגל ו, כמו גם תזרים pulsatile דרך העורק.
  10. הקבוצות הנותרות שריר הגב הם מחדש עם מקורב Vicryl 4-0 או תפרים Prolene.
  11. העור הוא סגור עם vicryl 4-0 או תפרים prolene.
  12. החולדה הנמען מושם על כרית חימום פיקוח הדוק עד להחלמה.
  13. בעלי חיים הנמען לקבל אנטיביוטיקה מניעתית (Cefazolin, 20 מ"ג / יום, IM) ו Buprenex (0.1 מ"ג / ק"ג, SC) במשך שלושה ימים posttransplant.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

עשרות שנים של מחקר ניסיוני יש שקדמה ואפשרה יד השתלה מוצלחת האדם בתקופה האחרונה. בשנת 1978, שפירא ואח'. פיתחו השתלת orthotopic האחוריות איבר מודל בחולדות, מתאים גם ללמוד היבטים פתולוגיים, פיזיולוגיים, ואת מערכת החיסון שונים, כמו גם התוצאה התפקודית של שתלי רקמה מרוכבים. אנחנו צריכים לשנות את החלק המאתגר ביותר של ההליך, דהיינו השקה של כלי הדם, על ידי החדרת טכניקה לא תפר השרוול. כאשר לעומת הטכניקה המקובלת תפר אותה מפשטת ומקצרת את הליך כירורגי ומאפשרת למנתחים בעלי ניסיון בסיסי microsurgical לבצע את ההליך עם שיעור הישרדות גבוה (80-90%).

ללא השתנות של anastomoses sutured, את הסיכון לדימום, פקקת, ו מסתלסל של pedicle הם פחתה. התכווצות או התפרעות במקום בו דם בתחילה מתנגש עם לומן עובר דרך השרוול הוא סיכון פוטנציאלי חדש של הטכניקה השרוול, אם כי זה ניתן למזער עם מבחר השרוול המתאים לגודל. יתר על כן, חוסר התאמה בגודל קטן יכול בקלות להיות מטופלים עם השקה השרוול, שוב להקטין את הסיכון הגלום תפירת כלי של קטרים ​​שונים. חלק מן השיקולים המשמעותיים ביותר עבור השקה מוצלחת השרוול הם כדלקמן:

  1. זריקה אחת של Pentobarbital (50 מ"ג / ק"ג IP) צריך להיות מספיק כדי להרדים את החיה במשך 90 דקות. במקרה המבצע נמשך יותר מ 70-80 דקות מנה נוספת של ה-IP 15mg/kg צריך להיות מיושם. עומק ההרדמה ניתן לבדוק intraoperatively על ידי חזרה על הבדיקה הבוהן קמצוץ רפלקס.
  2. Osteotomy של הגפיים האחוריות תורם איבר / הנמען האחוריות צריך להתבצע בכל אמצע הירך כדי להקל osteosynthesis במהלך ההשתלה.
  3. בחירה זהירה של גדלים השרוול היא בעלת חשיבות מכרעת עבור revascularization מוצלח.
  4. כדי להימנע thromboses, הפרין (50IU) צריכה להינתן עד לרגע התורם 1 לפני זלוף השתל.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Nembutal® OVATION Pharmaceuticals
Heparin Immuno Ebewe Pharma
Custodiol HTK Solution Essential Pharmaceuticals
Adventitia Scissors ASSI ASSI®SAS-21 R-8T
Forceps ASSI ASSI®JFC-7
Dilator Forceps ASSI ASSI®D-5AZ
Polymide Tubes River Tech Medical #17; #19

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Shapiro, R. I., Cerra, F. B. A model for reimplantation and transplantation of a complex organ: the rat hind limb. J Surg Res. 24, (6), 501-506 (1978).
  2. Petruzzo, P. The international registry on hand and composite tissue transplantation. Transplantation. 86, (4), 487-492 (2008).
  3. Schneeberger, S. First forearm transplantation: outcome at 3 years. Am J Transplant. 7, (7), 1753-1762 (2007).

Comments

1 Comment

  1. I'm a medical Laboratory Scientist, a young graduate of Virology working in Microbiology, National Hospital, Abuja, Nigeria, Africa. My interest is on tissue culture technology, please, how i get your assistance? Please contact me as follows: +²34-8064²²9²75

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 14, 2010 - 3:24 AM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics