Author Produced

ラット同所性後肢移植

* These authors contributed equally
Immunology and Infection

Your institution must subscribe to JoVE's Immunology and Infection section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

ここでは、ゴールドスタンダードと思われる同所性ラット後肢移植の手順を、説明します。

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Sucher, R., Oberhuber, R., Margreiter, C., Rumberg, G., Jindal, R., Lee, W. A., Margreiter, R., Pratschke, J., Schneeberger, S., Brandacher, G. Orthotopic Hind-Limb Transplantation in Rats. J. Vis. Exp. (41), e2022, doi:10.3791/2022 (2010).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

複合組織の同種移植(CTA)は、手、前腕または数字の消失後に有効な治療選択肢を表しており、再建手術における新しい治療のエンティティとなっています。しかし、長期的に高用量の多剤免疫抑制療法は、より広範なアプリケーションをホールター重篤な副作用のリスクに耐える、移植片の生存を保証するために必要です。この分野でのさらなる進行は、基本的な免疫学および複合組織移植における虚血再灌流障害のよりよい理解に依存するかもしれません。

これまでに、ラットの同所後肢移植が再建移植(RT)の優先げっ歯類のモ​​デルをされている、しかし、それは血管、骨、筋肉と神経の再付着のために特別顕微スキルを必要とする過酷な手順です。

我々は、後肢の移植をラットに迅速で信頼性の高いアプローチを提供して、このモデルに血管カフ吻合技術を導入している。この手法では、簡素化と短縮外科手術をして正常に高い生存率と低い合併症率との操作を実行するための基本的な顕微経験を持つ外科医が可能になります。テクニックはよく免疫だけでなく、虚血再灌流障害(IRI)の研究に適しているように見える。

Protocol

ドナーの動作と後肢の収穫

  1. 手術手順については顕微器具の滅菌セットが利用されている。外科医は、外科的処置の開始前に変更する必要が滅菌手袋、を含む、適切な服装を着用してください。
  2. ラットは、ペントバルビタールの腹腔内注射(50mg/kg IP)で麻酔ですし、全体の手術を通して安定した動物の体の温度を容易に加熱された操作のフィールド上に仰臥位に置かれる。
  3. 前の操作から提出された皮膚切開を3回の両方でそれぞれ、消毒剤やアルコールを消毒しています。乾燥から動物の角膜を防ぐために、眼は手術前に眼軟膏(Vidisic)で潤滑されています。
  4. 皮膚切開は約鼠径靭帯のレベルで右脚の付け根を越え行われます。大腿血管はバイポーラ焼灼し、鈍的切開とフリー解剖され、深い枝は8から0絹と連結されています。
  5. ヘパリンの300μl(50 IU)は、抗凝固のための陰茎静脈を介して注入されています。
  6. 大腿血管は鼠径靱帯のレベルで連結し、合字の遠位カットされています。
  7. 後肢は、氷冷(4℃)HTK液(5ml)を5分かけて大腿動脈経由でフラッシュされます。
  8. すべての筋肉群を大幅にはさみで分割され、骨切り術は大腿骨の遠位第三のレベルで見た回転電機で行われます。
  9. 収穫された四肢は、移植までの保存および低温貯蔵のための氷冷HTK液の20mlの中に沈めている。

受信者の動作と移植

  1. ラットでは、操作のフィールド上にペントバルビタールと置か仰臥位の腹腔内注射で麻酔です。
  2. 皮膚切開は約鼠径靭帯のレベルで右脚の付け根を越え行われます。大腿血管はバイポーラ焼灼し、鈍的切開とフリー解剖されています。
  3. 大腿血管は可能ですが、心窩部血管の離陸に近位のような遠位に連結される。血管クランプを動脈と静脈で鼠径靱帯のレベルに配置されます。
  4. ポリエチレンカフは、動脈を介してプルアップされる(カフの内径:0.912ミリメートル、カフ壁の厚さ:0.010ミリメートル、袖口の長さ:2.0 mm)と静脈(カフの内径:1.151ミリメートル、カフ壁の厚さ:0.010ミリメートル、カフの長ささ2.0mm)。血管の内腔の端は、血管拡張剤でプルアップされ、大腿動脈と静脈はカフ(約2mm)の全身にevertedと円周8から0絹糸結紮で固定されています。
  5. ドナーの手足用のスペースを確保するために受信者の手足は、筋肉群の鋭い解剖で削除され、骨切りは半ば大腿骨で行われます。
  6. ドナーの肢は、HTK液から除去し、移植は18ゲージの針を(長さ:1.5〜2.0センチメートル)を使用して大腿骨の骨接合術で開始されます髄内ロッドとして。
  7. 腹側筋群は密接に4から0 VicrylまたはProlene中断縫合糸で近似されています。
  8. 血管吻合はレシピエントの静脈と袖口の複雑な上にドナーの静脈と動脈を引いて実行されます。円周8から0絹糸結紮は再び吻合を確保するために配置されます。
  9. 静脈クランプは、動脈クランプ続いてリリースされ、再灌流は、四肢遠位や足への色のリターンだけでなく、動脈を通る脈動流によって可視化されている。
  10. 残りの背側の筋群は4から0 VicrylまたはProlene中断縫合糸で再近似されています。
  11. 皮膚は4から0 vicrylまたはprolene中断縫合で閉じられます。
  12. レシピエントラットを加熱パッド上に配置され、回復するまで厳重に監視されています。
  13. レシピエント動物は、3つの移植後の日のために予防的抗生物質(セファゾリン、20mg /日、IM)とBuprenex(0.1 mg / kgを、SC)を受け取ります。

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

実験的な研究の十年は前と最近の過去に成功した人間の手の移植が有効になっている。 1978年に、シャピロら。よく、様々な病理学的、生理学的、および免疫学的な側面だけでなく、複合組織移植片の機能的な結果を研究に適したラットにおける同所性後肢移植モデルを、開発した。我々は、非縫合カフ技術を導入することにより、すなわち、血管吻合を手順の最も困難な部分を変更しました。従来の縫合法と比較すると、それは簡素化と短縮外科手術をし、高い生存率(80〜90%)で手続きを行うために基本的な顕微経験を持つ外科医が可能になります。

縫合吻合の変動がなければ、茎の出血のリスク、血栓症、およびねじれが減少する。これは適切なカフのサイズを選択して最小限に抑えることができますが、血液が最初にカフを通過する内腔に衝突部位の収縮や乱流は、カフ技術の新たな潜在的なリスクです。さらに、小さなサイズの不一致は、簡単に再び異なる直径の血管を縫合に内在するリスクを低減する、カフを吻合して処理することができます。成功したカフ吻合のための最も重要な考慮事項のいくつかを以下に示します。

  1. の単回注射は、ペントバルビタール(50 mg / kgのIP)90分間、動物を麻酔するために十分なはずです。操作は以上の70〜80分間続く場合には15mg/kg IPの追加の用量を適用する必要があります。麻酔の深さは、術中つま先ピンチ反射テストを繰り返すことによってテストすることができます。
  2. ドナー後肢/受信者後肢の骨切り術は、移植時の骨接合術を軽減するために半ば大腿骨で行ってください。
  3. カフのサイズの慎重な選択が成功血行再建術のための非常に重要です。
  4. 血栓症を避けるために、ヘパリン(50IU)がグラフト灌流前にドナー1分に投与されるべきである。

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

利害の衝突は宣言されません。

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Nembutal® OVATION Pharmaceuticals
Heparin Immuno Ebewe Pharma
Custodiol HTK Solution Essential Pharmaceuticals
Adventitia Scissors ASSI ASSI®SAS-21 R-8T
Forceps ASSI ASSI®JFC-7
Dilator Forceps ASSI ASSI®D-5AZ
Polymide Tubes River Tech Medical #17; #19

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Shapiro, R. I., Cerra, F. B. A model for reimplantation and transplantation of a complex organ: the rat hind limb. J Surg Res. 24, (6), 501-506 (1978).
  2. Petruzzo, P. The international registry on hand and composite tissue transplantation. Transplantation. 86, (4), 487-492 (2008).
  3. Schneeberger, S. First forearm transplantation: outcome at 3 years. Am J Transplant. 7, (7), 1753-1762 (2007).

Comments

1 Comment

  1. I'm a medical Laboratory Scientist, a young graduate of Virology working in Microbiology, National Hospital, Abuja, Nigeria, Africa. My interest is on tissue culture technology, please, how i get your assistance? Please contact me as follows: +²34-8064²²9²75

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 14, 2010 - 3:24 AM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics