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Ortotópico patas traseras trasplante en ratas

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Immunology and Infection

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Summary

A continuación se describe la rata ortotópico patas traseras procedimiento de trasplante, lo que parece ser el estándar de oro

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Sucher, R., Oberhuber, R., Margreiter, C., Rumberg, G., Jindal, R., Lee, W. A., Margreiter, R., Pratschke, J., Schneeberger, S., Brandacher, G. Orthotopic Hind-Limb Transplantation in Rats. J. Vis. Exp. (41), e2022, doi:10.3791/2022 (2010).

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Abstract

Alotrasplante de tejido compuesto (CTA) representa una opción terapéutica válida después de la pérdida de una mano, el antebrazo o dígitos y se ha convertido en una entidad terapéutica novedosa en cirugía reconstructiva. Sin embargo, a largo plazo de dosis altas a múltiples fármacos inmunosupresores es necesaria para garantizar la supervivencia del injerto, que asumen el riesgo de efectos secundarios graves que cabestros una aplicación más amplia. Progresión en este campo puede depender de una mejor comprensión de la inmunología básica y la lesión por isquemia reperfusión en injertos de tejido compuesto.

Hasta la fecha, el trasplante ortotópico de las extremidades posteriores en ratas ha sido el modelo de preferencia entre los roedores de reconstrucción del trasplante (TR), sin embargo, es un procedimiento muy exigente que requiere habilidades extraordinarias de microcirugía para la reinserción de los vasos, huesos, músculos y nervios.

Hemos introducido la técnica del manguito de anastomosis vascular de este modelo, proporciona un enfoque rápido y fiable para el trasplante de las extremidades posteriores de ratas. Esta técnica simplifica y acorta el procedimiento quirúrgico y permite a los cirujanos con experiencia en microcirugía básica para llevar a cabo con éxito la operación con la supervivencia y bajas tasas de complicación. La técnica parece ser muy adecuado para inmunológica, así como estudios de isquemia reperfusión (IRI).

Protocol

Operación de los donantes y los miembros traseros cosecha

  1. Para el procedimiento quirúrgico estéril de un conjunto de instrumentos de microcirugía se utiliza. El cirujano debe usar ropa adecuada, guantes estériles, lo que tiene que ser cambiado antes del inicio del procedimiento quirúrgico.
  2. La rata se anestesiaron con una inyección intraperitoneal de pentobarbital (50mg/kg IP) y se coloca en posición supina sobre un campo de operación de calefacción, lo que facilita una temperatura corporal del animal estable a lo largo de todo el procedimiento quirúrgico.
  3. Antes de la incisión en la piel el campo de la operación es desinfectado tres veces cada uno con dos, un desinfectante y alcohol. Para evitar que las córneas animales de la desecación, los ojos están lubricados con un ungüento oftálmico (Vidisic) antes de la cirugía.
  4. Una incisión en la piel se realiza a través de la ingle derecha aproximadamente a nivel del ligamento inguinal. Los vasos femorales se disecan con cauterio bipolar y disección roma, ramas profundas se ligan con seda 8-0.
  5. 300μl (50 UI) de heparina se inyecta a través de la vena del pene para la anticoagulación.
  6. Vasos femorales se ligan a nivel del ligamento inguinal y corte distal a la ligadura.
  7. La extremidad posterior se lava con helado (4 ° C) solución HTK (5 ml) a través de la arteria femoral durante 5 minutos.
  8. Todos los grupos musculares están muy divididos con unas tijeras y la osteotomía se realiza con una rotación eléctrica vio a nivel del tercio distal del fémur.
  9. El miembro cosecha se sumerge en 20 ml de helado de solución HTK para la preservación y almacenamiento en frío hasta el trasplante.

Receptor de operación y Trasplante

  1. La rata se anestesiaron con una inyección intraperitoneal de pentobarbital en posición supina y se coloca en el campo de operación.
  2. Una incisión en la piel se realiza a través de la ingle derecha aproximadamente a nivel del ligamento inguinal. Los vasos femorales se disecan con cauterio bipolar y disección roma.
  3. Vasos femorales se ligan como distal como sea posible, pero próximo al despegue los vasos epigástricos. Clamps vasculares se colocan a nivel del ligamento inguinal en la arteria y la vena.
  4. Un manguito de polietileno se coloca sobre la arteria (diámetro interior del manguito: 0.912 mm, espesor de la pared del manguito: 0.010 mm, la longitud del manguito: 2.0 mm) y la vena (diámetro interior del manguito: 1.151 mm, espesor de la pared del manguito: 0.010 mm, la longitud del manguito : 2,0 mm). El borde de la luz del vaso se tira con un dilatador buque y de la arteria femoral y la vena se eversión en todo el cuerpo de la banda (de aproximadamente 2 mm) y se fija con una ligadura de seda 8-0 circunferencial.
  5. Para dejar espacio a la extremidad del miembro donante receptor se elimina con disección aguda de los grupos musculares y la osteotomía se realiza a mediados de fémur.
  6. La extremidad de los donantes se retiran de la solución HTK y el trasplante comienza con la osteosíntesis de fémur con una aguja de calibre 18 (longitud: 1,5 a 2,0 cm) como una varilla intramedular.
  7. Grupos de músculos ventrales son muy aproximados con Vicryl 4-0 o Prolene suturas interrumpidas.
  8. Anastomosis vasculares se realizan tirando de la vena y la arteria de los donantes sobre la vena destinatarios y complejas del manguito. Una circunferencia 8-0 ligadura de seda se coloca de nuevo para asegurar la anastomosis.
  9. La pinza venosa es lanzado, seguido de la pinza arterial, y la reperfusión se visualiza por el regreso de color en la extremidad distal de pies y manos, así como el flujo pulsátil a través de la arteria.
  10. El resto de los grupos musculares dorsales se vuelven a aproximarse con Vicryl 4-0 o Prolene suturas interrumpidas.
  11. La piel se cierra con Vicryl 4-0 o prolene suturas interrumpidas.
  12. La rata receptor se coloca en una almohadilla eléctrica y vigilarse estrechamente hasta su recuperación.
  13. Los animales receptores que reciban antibióticos profilácticos (cefazolina, 20 mg / día, IM) y Buprenex (0,1 mg / kg, SC) durante tres días después del trasplante.

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Discussion

Décadas de investigaciones experimentales han precedido y ha permitido el éxito del trasplante mano humana en el pasado reciente. En 1978, Shapiro et al. desarrollado un modelo ortotópico de trasplante de extremidades traseras de las ratas, muy adecuado para estudiar diversos aspectos patológicos, fisiológicos e inmunológicos, así como el resultado funcional de los injertos de tejidos compuestos. Hemos modificado la parte más difícil del procedimiento, a saber, la anastomosis vascular, mediante la introducción de una técnica de puño no sutura. Cuando se compara con la técnica de sutura convencional simplifica y acorta el procedimiento quirúrgico y permite a los cirujanos con experiencia microquirúrgica básica para llevar a cabo el procedimiento con una alta tasa de supervivencia (80-90%).

Sin la variabilidad de las anastomosis suturada, el riesgo de hemorragia, trombosis y torceduras del pedículo se ven disminuidos. La constricción o la turbulencia en el sitio donde la sangre al principio choca con la luz pasa a través del manguito es un nuevo riesgo potencial de la técnica de puño, aunque esto puede ser minimizado con la selección del tamaño adecuado del manguito. Por otra parte, los desajustes de tamaño pequeño se pueden manejar fácilmente con una anastomosis del manguito, una vez más la reducción del riesgo inherente a la sutura de los vasos de diferentes diámetros. Algunas de las consideraciones más importantes para una anastomosis exitosa del manguito son los siguientes:

  1. Una sola inyección de pentobarbital (50 mg / kg IP) debería ser suficiente para anestesiar a los animales durante 90 minutos. En el caso de la operación dura más de 70-80 minutos una dosis adicional de IP 15mg/kg se debe aplicar. Profundidad de la anestesia durante la cirugía se puede probar mediante la repetición de la prueba dedo-pinch reflejo.
  2. La osteotomía del donante extremidades posteriores / receptor miembro posterior debe realizarse a mediados de fémur para aliviar la osteosíntesis durante el trasplante.
  3. Una cuidada selección de tamaños de manguito es de crucial importancia para la revascularización exitosa.
  4. Para evitar la trombosis, la heparina (50IU) se debe administrar a los donantes un minuto antes de la perfusión del injerto.

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Disclosures

No hay conflictos de interés declarado.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Nembutal® OVATION Pharmaceuticals
Heparin Immuno Ebewe Pharma
Custodiol HTK Solution Essential Pharmaceuticals
Adventitia Scissors ASSI ASSI®SAS-21 R-8T
Forceps ASSI ASSI®JFC-7
Dilator Forceps ASSI ASSI®D-5AZ
Polymide Tubes River Tech Medical #17; #19

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References

  1. Shapiro, R. I., Cerra, F. B. A model for reimplantation and transplantation of a complex organ: the rat hind limb. J Surg Res. 24, (6), 501-506 (1978).
  2. Petruzzo, P. The international registry on hand and composite tissue transplantation. Transplantation. 86, (4), 487-492 (2008).
  3. Schneeberger, S. First forearm transplantation: outcome at 3 years. Am J Transplant. 7, (7), 1753-1762 (2007).

Comments

1 Comment

  1. I'm a medical Laboratory Scientist, a young graduate of Virology working in Microbiology, National Hospital, Abuja, Nigeria, Africa. My interest is on tissue culture technology, please, how i get your assistance? Please contact me as follows: +²34-8064²²9²75

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 14, 2010 - 3:24 AM

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