Manuel de retenue et communes voies d'administration composés chez la souris et le rat

Biology
 

Summary

Travailler en toute sécurité et humainement avec les rongeurs de recherche nécessite une compétence de base dans les méthodes de manipulation et de contention. Cet article présente les principes de base nécessaires pour manipuler de façon sécuritaire et efficace administrer des composés à des souris et des rats.

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Machholz, E., Mulder, G., Ruiz, C., Corning, B. F., Pritchett-Corning, K. R. Manual Restraint and Common Compound Administration Routes in Mice and Rats. J. Vis. Exp. (67), e2771, doi:10.3791/2771 (2012).

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Abstract

Etre capable de maîtriser en toute sécurité et efficacement souris et les rats est une partie importante de la recherche. Travailler en toute confiance et humainement, avec souris et les rats nécessite une compétence de base dans les méthodes de manipulation et de contention. Cet article présente les principes de base nécessaires pour manipuler de façon sécuritaire les animaux. D'une seule main, deux mains, et la retenue des objets de retenue spécialement conçus seront illustrés. Souvent, une autre partie de la recherche ou de l'utilisation de contrôle des animaux est l'administration efficace de composés à des souris et des rats. Bien qu'il existe un grand nombre de voies d'administration possibles (limité seulement par la taille et les organes de l'animal), la plupart ne sont pas utilisés régulièrement dans la recherche. Cette vidéo illustre plusieurs des routes les plus courants, y compris par voie intraveineuse, intramusculaire, sous-cutanée et gavage oral. Le but de cet article est d'exposer un spectateur peu familier avec ces techniques à des restrictions de base et des voies d'administration de substances. Cette vidéone remplace pas les mains sur la formation nécessaires à votre installation, mais est destiné à augmenter et compléter cette formation.

Protocol

1. Retenue sûre et une manipulation en douceur des animaux est un élément clé de procédures expérimentales

  1. Cette vidéo est conçu pour être un complément à la formation pratique fournie par votre établissement.
  2. Assurez-vous toujours que IACUC ou l'approbation du comité d'éthique est en place avant de commencer toute procédure expérimentale.
  3. Chaque personne qui travaille sur un protocole devrait connaître les détails de procédures approuvées pour ce protocole, et tous les autres sur lesquels ils travaillent.
  4. Approchez le rongeur avec confiance et manipuler les animaux avec douceur, mais avec fermeté. À la fois trop grossière manipulation et-les approches timides peuvent entraîner des morsures ou des griffures au gestionnaire ou des blessures à l'animal.
  5. Lors de la manipulation des animaux, il ya toujours la possibilité de dissémination accidentelle ou l'animal d'être abandonnée. La plupart de ces manipulations sont mieux exécutées sur une surface de travail de sorte que si l'animal est tombé ou évasions, il n'est pas blessé et ne peut être facilement retrouvé. Suivez votre institutionpolitiques institutionnelles concernant les animaux qui touchent le sol.
  6. Ne jamais manipuler les animaux par le bout de la queue, car cela peut entraîner des blessures dégantage de la queue. Soyez particulièrement prudent avec les gros rats ou des souris enceintes. Toujours utiliser l'autre main pour soutenir le corps que vous soulevez par la queue.
  7. Aiguilles pointues fonctionnent mieux lorsque les injections. Bien que les aiguilles pour les rongeurs de laboratoire sont parfois utilisés pour des injections multiples, ce n'est pas conseillé pour un certain nombre de raisons, dont la moindre est que le petit calibre des moyens souvent utilisés que les aiguilles terne rapidement.
  8. Etre mordu ou griffé est toujours possible lorsque vous travaillez avec des animaux. Si vous travaillez avec une substance ou d'un agent infectieux qui peuvent causer des blessures aux humains, prendre des précautions supplémentaires, telles la manipulation des animaux ou des agents dans des hottes ou des armoires de biosécurité.
  9. Approches douces et d'acclimatation à la manipulation avant de tenter une procédure peut être payante chez les animaux qui sont moins stressés par la manipulation.
  10. Pratique de retenue avant d'essayer de l'administration du composé, et la pratique l'administration de substances à contrôler les animaux avant que les animaux expérimentaux.
  11. La pratique de ces techniques inspire la confiance et les résultats régulièrement confiance à mieux traiter les animaux moins stressés, et de meilleurs résultats scientifiques.
  12. Avec une technique de manipulation, si l'animal est récalcitrante, essayez une technique différente. L'animal (et gestionnaire) peuvent également bénéficier de la mise de l'animal dans la cage et d'essayer à nouveau plus tard.

2. Manuel de retenue

  1. De retenue de la souris d'une seule main
    1. Soulever une souris par la base de la queue et le placer sur le couvercle de la cage, cage métallique haut bar, ou une surface similaire rugueuse.
      1. Un dispositif de retenue de la souris main est généralement effectuée avec la main non-dominante, laissant la main libre pour l'usage dominant.
      2. Une autre méthode permet au technicien d'utiliser leur blouse ou chemise uniforme recouvrant l'avant-bras pour positionner leanimal avant les compressions.
    2. Rentrez la base de la queue entre le 3 ème et 4 ème doigt, tout en tirant doucement en arrière sur la queue. Cela entraînera la souris pour saisir la surface avec les quatre pattes et tirer vers l'avant.
      1. Ne pas saisir la souris par le bout de la queue, surtout si la suspension de leur poids corporel entier en leur queue. Ceci peut provoquer une blessure dégantage dans laquelle la peau de la queue glisse.
    3. Ensuite, saisir fermement la souris par la peau avec la même main qui tient la queue. Saisir avec le pouce et l'index à proximité de la base de la tête et étendre la portée le long du dos de la souris par incorporation du majeur et l'annulaire.
      1. Assurez-vous d'appliquer suffisamment de pression, ou la fermeté à la peau autour du cou pour empêcher la souris de tourner ou tordre hors de la retenue, mais ne tirez pas la peau si étroitement que l'animal ne peut pas respirer.
      2. Le contrôle de la tête est cruciale. Si l'souris peut bouger sa tête, il peut atteindre les doigts du manipulateur et peut mordre. Cela peut se produire quand les gestionnaires débutants saisir la souris trop loin en bas du dos, plutôt que juste derrière le crâne.
  2. Retenue souris à deux mains
    1. Soulever une souris par la base de la queue et le placer sur le couvercle de la cage, couvercle grillagé ou une surface rugueuse.
      1. Une autre méthode permet au technicien d'utiliser leur blouse ou chemise uniforme recouvrant l'avant-bras à la position de l'animal qu'avant les compressions.
    2. Tirez doucement vers l'arrière sur la queue et la souris saisir la surface à quatre pattes et tirer vers l'avant.
    3. Ensuite, avec l'autre main rapidement et saisir fermement la souris par la peau du cou (voir un dispositif de retenue mains ci-dessus).
    4. Avec la queue dans une main et la peau du cou de l'autre, soulevez la souris et glisser la base de la queue entre la paume et le doigt 3 e ou 4 e de la main tenant la nuque.
      1. Comme avec la méthode d'une seule main, saisir fermement la peau du cou pour empêcher la souris de se tordre ou de tourner tout en ne saisissant pas si bien que l'animal ne peut pas respirer.
      2. Si la souris est résistant à gommante, une légère pression sur le dos de la souris peut permettre à la main de se déplacer pour une meilleure compréhension.
  3. Retenue Rat; gommante
    1. Gommante Rat est généralement réalisée à deux mains et seulement dans les petits rats. Ce n'est pas une technique couramment utilisée parce que les rats sont moins prêts à accepter des gommante que les souris, mais il est utile dans certaines situations de collecte de sang.
    2. Saisissez le rat par la queue avec la main non-dominante et tirez-le doucement vers l'arrière sur une surface rugueuse (comme décrit ci-dessus pour les souris).
      1. Attention à saisir près de la base de la queue, comme peau de la queue du rat peut se détacher si saisi près de la pointe.
    3. Tenez fermement la queue dans la main et l'approche de la peau du rat à l'arrière.
      1. Pour example, si la queue du rat est dans la main des manutentionnaires gauche, ne vous approchez pas du rat du nez à l'nuque avec la main droite. Au lieu de cela, atteindre plus de la main gauche, et l'approche de la nuque par derrière.
    4. Appliquez une légère pression sur le dos du rat, sur les omoplates, puis saisissez la nuque à proximité de la base du crâne entre les doigts et la paume de la main.
    5. Le contrôle de la tête est important d'éviter les piqûres. Morsures de rat peut causer des blessures graves.
    6. Les rats peuvent vocaliser quand retenus dans ce mode.
  4. Rat de retenue, plus de la poignée de l'épaule
    1. Saisissez le rat par la queue avec la main dominante et tirez-le doucement vers l'arrière sur une surface rugueuse (comme décrit ci-dessus pour les souris).
      1. Une autre méthode permet au technicien d'utiliser leur blouse ou chemise uniforme recouvrant l'avant-bras à la position de l'animal qu'avant les compressions.
      2. Attention à saisir près de la base de la queue, comme la peau du rat queue can se détacher si saisi près de la pointe.
    2. Placez la main non dominante sur le dos du rat, s'approchant par derrière.
    3. Saisissez le rat autour du thorax avec l'annulaire, auriculaire et le pouce. La tête du rat doit être comprise entre l'index et le majeur.
      1. Ne pas comprimer le thorax.
    4. Le rat peut être tenue de cette manière avec une seule main, si le corps est stabilisé contre le gestionnaire.
  5. Retenue Rat; sous l'emprise des épaules
    1. Saisissez le rat par la queue avec la main dominante et tirez-le doucement vers l'arrière sur une surface rugueuse (comme décrit ci-dessus pour les souris).
      1. Une autre méthode permet au technicien d'utiliser leur blouse ou chemise uniforme recouvrant l'avant-bras à la position de l'animal qu'avant les compressions.
      2. Attention à saisir près de la base de la queue, comme peau de la queue du rat peut se détacher si saisi près de la pointe.
    2. Placez la main non dominante sur le rmoins est de retour, approchant par l'arrière.
    3. Saisissez le rat autour du thorax, juste sous les omoplates. Avant-bras du rat doit être doucement poussé vers le haut avec le pouce et l'index.
      1. Les avant-bras doivent se croiser sous le menton du rat, l'empêchant de mordre.
      2. Ne pas comprimer le thorax.
    4. Le rat peut être tenue de cette manière avec une seule main, si le corps est stabilisé contre le gestionnaire.
  6. Decapicone
    1. Un Decapicone est flexible, en forme de cône morceau de plastique mince avec un trou dans une extrémité. Le trou est suffisamment petit pour la souris ou rat peut obtenir son nez hors du trou, mais pas le reste du corps.
    2. Pour retenir l'animal, placez la souris ou rat dans un Decapicone de la bonne taille.
    3. Pousser vers l'avant de l'animal jusqu'à ce que son nez fait saillie à partir du trou dans le Decapicone.
    4. Soit maintenir le sac fermé autour de la queue, ou d'utiliser une attache pour sceller l'animal dans le cône.
    5. L'avange d'un Decapicone est que la matière plastique mince permet des injections à travers le matériau.
    6. L'inconvénient est que le matériau ne respire pas et les animaux peuvent surchauffer. Ne garder un animal dans un Decapicone pour aussi longtemps qu'il le faudra pour effectuer la procédure.
  7. Acrylique / plastique rigide restrainer
    1. Dispositifs de retenue en plastique sont particulièrement utiles lorsque la queue de l'animal doit être consulté.
    2. Ceux-ci peuvent être achetés dans le commerce ou faite dans le laboratoire.
    3. La taille doit être adaptée à l'animal d'être restreinte - l'animal ne doit pas être en mesure de faire demi-tour dans le dispositif.
    4. Placez l'animal dans le dispositif de retenue d'abord doucement retenue de l'animal, puis en le relâchant, la tête la première, lors de l'ouverture de l'appareil.
      1. Il peut être utile de viser l'appareil vers le haut au-dessus de la cage, comme les rongeurs souvent escalader dans une structure sécurisée, comme un tube.
    5. Placer la fermeture sur l'extrémité de l'dispositif, en faisant attention à ne pas endommager la queue de l'animal, des pieds, ou des testicules.
    6. Minimisez le temps passé dans retardateurs puisque les animaux peuvent surchauffer.
  8. Les animaux peuvent être retenus dans d'autres manières, par exemple en enveloppant dans une petite serviette, ou simplement par ventouses une main sur l'animal. Techniques peuvent être adaptées pour répondre aux besoins de l'animal et des travailleurs. Il faut toujours prendre soin d'éviter les morsures et les égratignures et sécuriser l'animal de libération accidentelle ou chutes de hauteur.

3. Méthodes d'administration composé

  1. Ce n'est en aucun cas une liste exhaustive et d'autres voies sont possibles. Ce protocole vise à illustrer les itinéraires les plus couramment utilisés. D'autres voies peuvent nécessiter une anesthésie de l'animal et soulagement de la douleur post-administration.
  2. Peu importe la méthode d'administration utilisée, s'assurer que tous les matériaux sont préparés avant l'immobilisation des animaux.
  3. Matières aqueuses sont plus faciles à injecter de matériaux plus épais, tels que l'huile de baseComposés d. Toujours injecter plus épais composés très lentement pour ne pas déloger l'aiguille de la seringue.
  4. Considérations générales sur l'utilisation d'aiguilles et de seringues.
    1. Toujours entreposer et éliminer les seringues et les aiguilles correctement.
    2. Si vous êtes nouveau à l'aide de seringues et d'aiguilles, pratique la manipulation de la seringue et injecter avant de tenter d'injecter un animal. Idéalement, vous serez en mesure de confiance manipuler la seringue et l'aiguille d'une main, laissant l'autre à la retenue de l'animal. Une main ferme minimise mouvement de l'aiguille qui minimise les lésions tissulaires.
    3. Aiguilles ont un point, un biseau, un arbre, et un moyeu. Seringues une astuce, un baril, et un piston (figure 1 a et b).
    4. Les aiguilles sont de taille par la jauge et la longueur. Plus le numéro de calibre, plus l'aiguille. Petites aiguilles sont très enclins à ternissement (à partir d'une bavure se forme sur la pointe) et ne doit pas être utilisé pour percer des flacons multi-doses (figure 1 c). Toujours choisir l'plus courte aiguille qui va travailler pour administrer le composé.
    5. L'aiguille est fixée à l'extrémité de la seringue par le moyeu. Certaines seringues ont de verrouillage conseils. Assurez-vous toujours la seringue est solidement attaché à l'aiguille.
    6. Les aiguilles sont insérées dans le meilleur de l'animal avec le biseau vers le haut, en particulier pour des injections intraveineuses.
    7. Ne jamais recapuchonner les aiguilles à la main. Ceci est une cause fréquente de blessures par piqûres d'aiguilles. Jeter les aiguilles et les seringues correctement étiquetés conteneurs pour objets tranchants. Si les aiguilles doivent être recouvertes, les appareils sont disponibles (figure 1 d).
  5. Intranasale (IN)
    1. Retenir l'animal tel que décrit ci-dessus.
    2. À l'aide d'une seringue ou pipette, placer une petite quantité de la matière à inhaler dans les narines de l'animal.
    3. Surveillez le matériau à disparaître dans les narines.
    4. Répéter au besoin jusqu'à ce que le volume désiré a été administré.
  6. Intramusculaire (IM)
    1. Retenez ee des animaux comme décrit ci-dessus. Assurez-vous que l'une des pattes arrière de l'animal est libre et stabilisé pour l'injection. Contrainte peut prendre deux personnes. Si l'animal peut éjecter au cours de l'injection, de lésions musculaires entraîne l'aiguille.
    2. L'aiguille doit être introduite perpendiculairement à la peau de l'animal. En utilisant une seringue de taille appropriée et une aiguille, insérez l'aiguille de biseau d'environ de profondeur et injecter le matériau dans quadriceps de l'animal (à l'avant de la cuisse) ou latérale de masse musculaire à la cuisse.
    3. Ne pas injecter dans la masse musculaire postérieure car il est possible d'endommager le nerf sciatique.
    4. Si les animaux doivent recevoir des injections intramusculaires multiples, les jambes alternatifs.
  7. Intrapéritonéale (IP)
    1. Retenir l'animal tel que décrit ci-dessus.
    2. Basculer le nez de l'animal vers le sol, l'exposition de l'abdomen pour injection.
    3. Localisez la ligne médiane de l'animal et diviser mentalement l'abdomen en quadrants (Figure 2). La partie inférieurequadrants, en particulier de l'animal, quadrant inférieur droit sont les sites appropriés pour les injections intra-péritonéales.
      1. Le quadrant inférieur droit est choisie en raison de l'absence de structures anatomiques importantes.
    4. À l'aide d'une seringue de taille appropriée et d'une aiguille, injecter le matériau dans l'animal.
    5. Si les animaux doivent recevoir des injections répétées de propriété intellectuelle, alterner le site d'injection.
  8. Sous-cutanée (SC, LQ)
    1. Retenir l'animal tel que décrit ci-dessus. L'animal doit être retenu sans serrer suffisamment pour que la peau peut être mobilisé.
    2. Si les animaux doivent être nettoyés normalement après l'injection SC, n'utilisez pas la peau du cou (nuque). Au lieu de cela, utilisez la peau sur la croupe dorsale ou le flanc. Si les animaux doivent recevoir plusieurs injections SC de rechange, des sites d'injection.
    3. Saisissez la peau et tirez-le doucement vers le haut, ce qui rend une "tente".
      1. Si vous effectuez le solo d'injection, insérer l'aiguille et doucement tent de la peau vers le haut avec l'aiguille afin de confirmer que l'aiguille se trouve dans l'espace sous-cutané.
    4. En utilisant une seringue de taille appropriée et une aiguille, insérez l'aiguille à un angle de 30-45 ° dans la peau de tentes, et injecter la matière. Injecter parallèle à et à distance des doigts de retenue vers le haut pour la peau.
    5. Si l'injection est réussie, un petit gonflement sous la peau on le verra.
    6. Après l'injection, appliquer une légère pression pour empêcher le retour de la matière.
  9. Intradermique (ID)
    1. Pour les injections intradermiques, les animaux sont souvent trop longs pour que la peau peut être vu.
    2. Retenue de l'animal pour de multiples injections intradermiques peut être difficile. Dans ce cas, la sédation chimique peut être nécessaire. Les sites des injections d'identification sont les mêmes que celles de SC.
    3. Insérez une aiguille de taille appropriée dans la peau à un angle de 15-30 °. L'aiguille ne sera pas inséré très loin et l'injection doit rencontrer resistance.
      1. Une autre approche consiste à pincer délicatement la peau adjacente au site d'injection et insérer l'aiguille à un angle très peu profond. Ceci est utile chez les souris car elle les empêche de se déplacer pendant le processus d'injection.
    4. Si l'injection est couronnée de succès, une petite papule on le verra. Il sera plus pâle que la peau environnante.
    5. Après l'injection, appliquer une légère pression pour empêcher le retour de la matière.
  10. Intravasculaire (IV)
    1. Les veines gauche et droite arrière latéraux sont la voie d'accès la plus courante utilisée vasculaire chez les souris et les rats.
    2. D'autres voies d'accès vasculaires sont possibles chez les souris et les rats, mais exigent généralement une sédation et soulagement de la douleur post-injection.
    3. Pour une injection dans la veine caudale, retenir l'animal dans un dispositif de retenue ou de rongeur Decapicone plastique.
    4. Placer la queue de l'animal sous une lampe, ou sur un dispositif de réchauffement protégée. Cela permettra de promouvoir la vasodilatation, ce qui facilite l'injection.
      1. Ne pas surchauffer l'animal.
      2. Pour les grands rats mâles, nettoyer les squames de la peau de la queue peut permettre une meilleure visualisation de la veine. Le nettoyage doit être douce pour la peau n'est pas abrasée.
    5. Tenez la queue de l'animal par la pointe avec la main non dominante. Cela redresser la queue.
    6. Tournez la queue ¼ de tour pour placer les veines de la queue dorsale pour faciliter l'injection. L'animal a deux veines de la queue latérales et une artère ventrale de la queue (figure 3).
    7. Approche de la queue de l'aiguille à un angle de 15-20 °. Commencer à la partie distale de la queue.
      1. Les veines sont peu profondes et l'aiguille ne doit pas être insérée bien au-delà du biseau.
      2. Si l'injection est amorcée distalement que possible, il est en bon état veine plus de tenter l'injection, si la première tentative échoue.
    8. Injecter le matériau. Une injection de succès se traduira par la matière entrant dans la veine, sansrésistance et le blanchiment de la veine de la queue de la durée de l'injection.
      1. Ne pas aspirer avant d'injecter, car cela va réduire la veine.
      2. Une légère pression sur le site de ponction après l'injection va prévenir les saignements.
    9. Dans une injection échoue, le matériau ne s'écoule pas facilement. Au lieu de cela, la peau de la queue se blanchir ou le matériel ne peut être injecté à tous.
  11. Intragastrique administration (gavage)
    1. N'effectuez gavage sur sobres, animaux éveillés. Anesthésie ou sédation augmente le risque d'aspiration (matériau entrant par mégarde dans les poumons).
    2. Sélectionnez une aiguille d'alimentation de taille appropriée pour une utilisation par voie orale. Ces aiguilles ont des pointes à billes à la fin pour empêcher leur passage dans la trachée.
    3. Longueur nécessaire peut être déterminé en tenant l'animal retenue et de mesure de l'angle de la bouche. L'extrémité sphérique de l'aiguille d'alimentation doit atteindre pour la dernière côte de l'animal (<strong> Figure 4). Une aiguille de calibre est déterminé par le poids de l'animal.
    4. Retenir l'animal de telle sorte que sa tête et le corps sont dans une ligne droite verticale. Cette redresse l'oesophage, ce qui facilite le passage de l'aiguille d'alimentation.
    5. Insérez la pointe de l'aiguille balle dans la bouche de l'animal, sur la langue. Une fois que l'aiguille est en place, amener l'aiguille et la seringue en place, en appuyant doucement contre le palais, si le nez de l'animal est vers le plafond.
      1. Chez le rat, l'aiguille peut être nécessaire pour être redirigé légèrement quand il passe à l'arrière de la gorge. Toute tension sur l'aiguille indique la nécessité d'ajuster la position de
    6. Continuer à passer de l'aiguille jusqu'à ce que la distance prédéterminée est atteinte. L'aiguille doit passer facilement, et l'animal ne doit pas haleter ou de s'étouffer.
    7. Administrer la substance. Il doit s'écouler dans l'estomac. En cas de résistance ou les halètements des animaux, selfs, ou devient bleu, arrêtez immédiatement et retirez la nécessitéle. Les animaux qui ont aspiré peut exiger l'euthanasie, en fonction du composé administré.

4. Les résultats représentatifs

Lorsque les animaux sont manipulés correctement, il ya un minimum de stress pour l'animal et gestionnaire. Les gestionnaires ne soient pas mordu ou griffé, et les animaux sont traités sans cruauté et avec compétence. Les composés sont administrés par voie correcte avec un minimum de dommages aux tissus et que peu d'inconfort à l'animal que possible.

Si les enquêteurs sont nouvelles pour la manipulation des animaux, en collaboration avec un petit animal en peluche peut être utile. Il ya aussi des simulateurs d'animaux disponibles pour certaines techniques, telles que le rat Koken. Pour de nombreux chercheurs, il ya peu de chance de se familiariser avec des aiguilles et des seringues avant de travailler avec les animaux. Parties représentatives d'une aiguille et d'une seringue sont illustrés dans la Figure 1A et 1B. Avant d'injecter des animaux pour la première fois, ilpeut être utile de pratiquer l'injection avant de travailler avec les animaux. Aiguilles très fines, tels que 28 et 30 g, sont faciles à endommager. Si le retrait de substances à usages multiples flacons, utiliser une aiguille plus grosse à cet effet, puis remplacez-la par l'aiguille d'injection plus petit calibre. Une aiguille ébarbés se voit dans la figure 1C. Précautions de base doivent être prises lorsque l'on travaille avec des aiguilles, comme ne pas recapuchonner les aiguilles utilisées à la main. Figure 1D montre une aiguille dans recapuchonneur utilisation. Cela peut être utile pour les enquêteurs qui ont besoin de retirer les aiguilles, par exemple, le sang expresse d'une seringue sans hémolyse vu lorsque le sang est poussé à travers une aiguille.

Les figures 2 et 3 illustrent points de repère pour l'injection intra-abdominale et la structure typique de la queue, ce qui illustre les objectifs de l'injection. Figure 4 donne des exemples de la taille adéquate des aiguilles gavage. Aiguilles gavage devrait atteindre à partir de l'embouchure de la unenimal à droite en dessous de la dernière côte.

Figure 1
Figure 1. Une aiguille) et des parties seringue B), étiqueté. C) Burr les aiguilles causé par un positionnement répétée de l'aiguille dans un flacon multi-usage. Aiguille recapuchonneur D) en cours d'utilisation.

Figure 2
Figure 2. Quadrants de l'abdomen ventral. Seulement injecter dans les deux quadrants inférieurs, préférentiellement le quadrant inférieur droit.

Figure 3
Figure 3. Schéma de la queue en coupe, illustrant la relation entre les artères et les veines vers les structures osseuses et tendenous.

Figure 4
Figure 4. Aiguille de gavage chez le rat dimensionnement. A) aiguille de gavage trop long. B) aiguille de taille appropriée gavage. C) Mesure aiguille de gavage trop court, D) Palpation pour la dernière côte afin de déterminer la taille appropriée aiguille de gavage.

Souris Rat
Itinéraire Volume recommandé Jauge recommandée et la longueur de l'aiguille Volume recommandé Jauge recommandée et la longueur de l'aiguille
Intranasale 1 5-25 ul N / A 5-25 ul N / A
1,2 intramusculaire 0,00005 ml / g <23 g, de 0,5 à 0,75 en 0,1 ml / kg <21 g, de 0,5 à 0,75 en
1,2 intrapéritonéale 0,02 ml / g <21 g, 0,75 à 1 en 10 ml / kg <21 g, 0,75 à 1 en
Sous-cutanée 1,2 0,01 ml / g <22 g, de 0,5 à 1 en 5 ml / kg <22 g, de 0,5 à 1 en
Intradermique 1 De 0,05 à 0.1 ml <26 g, 0,5 à De 0,05 à 0.1 ml <26 g, 0,5 à
1,2 intraveineuse 0,005 ml / g -0,025 ml / g * <25 g, 0,75 à 1 en 5 ml/kg-20 ml / kg * <23 g, 0,75 à 1 en
Oral 1,2 gavage 0,01 ml / g 20-22 aiguille d'alimentation g 5-10 ml / kg 16-20 aiguille d'alimentation g

* Le premier chiffre est le volume donné en bolus intraveineux pendant environ 1 minute. Le second volume est le volume qui peut être administré en perfusion lente sur 5-10 minutes.

Discussion

Ce protocole doit être considéré comme une introduction à la manipulation des animaux et de l'administration de substances destinées à compléter la formation pratique fournie à l'installation du chercheur. Les moyens de retenue qui seront utilisés et les voies d'administration de la substance doit être pris en compte dans la conception expérimentale et lorsque le protocole de recherche ou comité d'éthique de protocole est écrit.

Formation en liées aux animaux procédures est essentielle à la réussite de la recherche. Pour effectuer la plupart des expériences, les animaux doivent être manipulés par du personnel de recherche, et meilleure est la manipulation des animaux, moins souligné l'animal 3. Habituer les animaux au contact humain douce peut réduire le stress et les animaux sujets de recherche plus traitables 4,5. Gérer le stress a été démontré qu'elle affecte certains types de recherche 6 et il est possible qu'elle peut affecter les autres aussi. De retenue des rongeurs doit être accompli avec soin, mais la manipulation cabinet (une tentativeprise en main est susceptible de causer des blessures à des rongeurs et gestionnaire) et doit être la plus courte durée possible. Méthodes de contention sont généralement choisis en fonction de la taille de l'animal ou l'accès demandé. Par exemple, la manipulation des rats adultes par la peau, bien que possible, est souvent rencontré une forte résistance par le rat, en particulier si le gestionnaire est inexpérimenté. La tenue d'une souris ou rat à la main peuvent rendre l'accès aux veines de la queue difficile et un dispositif de retenue est souvent choisi pour garder l'animal le plus immobile possible.

Lorsque les chercheurs de manipuler les animaux, ils cherchent souvent à administrer un composé ou biologique pour une étude plus approfondie. La voie d'administration de substances peuvent affecter l'absorption, la biodisponibilité et l'aptitude à une expérience particulière. Familiarité avec les différentes voies devraient fournir aux chercheurs la possibilité d'administrer leur substance de la meilleure façon possible pour leurs recherches. Par exemple, un itinéraire qui favorise l'absorption rapide d'une substance, Comme la voie intraveineuse ou intrapéritonéale, ne doit pas être utilisé si le chercheur veut administrer la substance d'une manière plus lente à action prolongée. Commentaires récents de certaines de ces techniques et des considérations de volume, de l'équipement, et de soluté peut être trouvée dans deux articles par Turner et al. 1,7

Chaque fois que les substances doivent être administrées aux rongeurs de laboratoire, il faut tenir compte de la taille de l'équipement et du volume de la substance (présentées dans le tableau 1). Du matériel mal dimensionné ou de grandes quantités peuvent provoquer des malaises, des blessures ou la mort de l'animal. En général, les substances administrées par voie parentérale sont stériles, sauf si les objectifs de recherche rendrait cela impossible (c'est-à-études bactériennes). Composés et produits biologiques doivent être dans un soluté ou d'un véhicule qui aura le moins d'effet sur l'animal. A pH physiologique (7,3 -7,4) est généralement bien accepté, surtout pour les sous-cutanée, intramusculaire et intraperitoneal routes. Niveaux de pH non physiologiques en substances administrées par ces voies peut entraîner des douleurs ou de la nécrose et de lésions tissulaires. Plus larges gammes de pH sont tolérés avec des routes intra-gastrique et intraveineuse 7. Chez les petits rongeurs, une autre considération importante est la possibilité de refroidir si de grandes quantités de liquides à température ambiante sont donnés. Si des liquides sont administrés par voie intraveineuse ou intrapéritonéale, en particulier à l'appui d'un animal malade, ils doivent être chauffés à la température du corps (37 ° C).

Les voies d'administration abordées dans ce protocole sont ceux couramment utilisés dans de nombreux programmes de recherche, sont simples à maîtriser, et ne nécessitent généralement pas d'anesthésie. Une variété presque infinie de voies d'administration sont possibles, cependant, y compris intracrânienne, intrathécale, épidurale, intra-trachéale, intra-osseuse, et intra-articulaire pour n'en citer que quelques-uns. La formation à ces itinéraires spécialisés de l'administration devraient être recherchés auprès des gens WHo ont une vaste expérience de la route et de bons résultats.

Chez les rongeurs, la voie intranasale est généralement utilisée pour étudier les substances introduites dans les poumons par l'intermédiaire d'un plus «naturelle»; méthode que l'instillation intratrachéale. Les souris et les rats sont obligatoires nez respirent, afin de les inciter à inhaler de très petites quantités de liquide n'est pas difficile, même chez des animaux conscients. Depuis la muqueuse nasale est bien fourni avec des vaisseaux sanguins, l'administration intranasale de certaines substances peut être similaire à l'administration intraveineuse. Cette route n'est pas recommandé chez les animaux atteints de rhinite, cependant, que cela puisse compromettre l'absorption. Les tentatives pour administrer de grandes quantités par voie intranasale peut entraîner une dyspnée ou la noyade de l'animal.

Les injections intramusculaires assurer une absorption rapide des substances. Les injections intramusculaires peut être difficile chez les rats et les souris en raison de leur petite taille et de muscles en conséquence petites. Ils sont réalisés dans la patte arrières. En raison de la possibilité de dommages du nerf sciatique, le quadriceps femoris est le muscle de choix.

Bien que les deux sous-cutanée et intradermique impliquer la peau, il existe des différences entre la biodisponibilité des substances placées dans la peau vs l'hypoderme. Administration sous-cutanée est souvent considéré comme un "dépôt" de route, avec une absorption plus lente que d'autres voies, comme par voie intraveineuse ou intrapéritonéale. L'administration intradermique est utilisé pour de très petits volumes de substances, généralement des substances immunostimulantes comme adjuvant d'antigène mélanges. Dans les deux cas, les substances administrées doivent avoir un pH physiologique et non irritant. Intradermique ou sous-cutanée ne doit pas être effectuée dans la nuque, car il s'agit d'un site souvent utilisé pour empêcher les rongeurs.

L'administration intraveineuse et intrapéritonéale sont souvent considérés comme équivalents chez les rongeurs. Intraveineuse de dosage fournir plus rAudioPID absorption de composés, cependant, alors que l'administration intrapéritonéale doit être considéré comme à peu près équivalent à une administration orale 8. Des précautions doivent être prises par voie intrapéritonéale avec des composés administrés, car ils peuvent causer de la douleur si elle est mal tamponnée. La voie courante d'administration en bolus intraveineux chez les rongeurs se fait par les veines de la queue. Si l'administration chronique par voie intraveineuse d'une substance est souhaitée, l'implantation des canules veineuse ou artérielle doit être envisagée. Substances administrées par voie intraveineuse doit être livré de manière aseptique et doit être montré pour être sûr d'administrer par voie intraveineuse. Par exemple, les substances qui peuvent induire une hémolyse, la thrombose, vasculite ou ne sont pas appropriées pour une administration intraveineuse.

La route gavage intragastrique ou orale est souvent utilisé pour imiter une voie de dosage fréquente chez l'homme. Il permet également le dosage précis de substances par rapport à une administration orale dans la nourriture ou l'eau. Biodisponibilité des composésadministré par gavage varie en fonction de l'état nourri / jeun de l'animal, ainsi que le soluté ou d'un véhicule du composé ou biologique. Aiguilles gavage ou alimentation doit être de la taille appropriée pour l'animal qui est utilisé, et doit être nettoyé entre les animaux, si aiguilles jetables gavage ne sont pas pratiques. Les blessures causées par gavage ne sont pas rares et incluent le dépôt de la substance dans le poumon ou la rupture de l'estomac ou de l'œsophage. La formation devrait être supervisé par un parti expérimenté et engagé sur les animaux euthanasiés en premier, puis les animaux anesthésiés (qui seront euthanasiés) avant gavage sur des animaux éveillés est tentée. Premières tentatives de gavage sur des animaux éveillés devrait impliquer les animaux de taille moyenne et de petits volumes d'une substance, telle qu'une solution saline, qui ne sera pas causer des blessures si la procédure se passe mal. Les animaux doivent être soigneusement évaluée pour des signes de détresse, comme haletant, virant au bleu, des saignements ou une salivation excessive, après le gavage et euthanasiés si nécessaire. Si euthAnasia est nécessaire, l'animal doit être soumis à une autopsie pour déterminer la cause de la procédure de gavage a échoué.

Disclosures

Les auteurs sont des employés de Charles River.

Acknowledgments

La recherche présentée ici a été soutenu par Charles River.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Needles Various Various Needles are sold by both gauge and length. Check both before ordering.
Syringes Various Various Always choose an appropriate size for the volume to be administered.
DecapiCones Braintree Scientific DC-200, DCL-120, MDC-200 Available in mouse and rat sizes.
Rodent restrainer Harvard Apparatus, Braintree Scientific, Plas-Labs, others Available in clear Plexiglas, adjustable plastic, and sized for mice and rats.
50 ml conical tube Various
Feeding needles VWR, Popper and Sons Various Fit the needle gauge and length to the animals as described above. Both disposable and reusable feeding needles are available.

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References

  1. Turner, P. V., Brabb, T., Pekow, C., Vasbinder, M. A. Administration of substances to laboratory animals: routes of administration and factors to consider. JAALAS. 50, 600-613 (2011).
  2. Diehl, K. H. A good practice guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes. J. Appl. Toxicol. 21, 15-23 (2001).
  3. Hurst, J. L., West, R. S. Taming anxiety in laboratory mice. Nat. Methods. 7, 825-826 (2010).
  4. Maurer, B. M., Döring, D., Scheipl, F., Küchenhoff, H., Erhard, M. H. Effects of a gentling programme on the behaviour of laboratory rats towards humans. Appl. Anim. Behav. Sci. 111, 329-341 (2008).
  5. Cloutier, S., Newberry, R. C. Use of a conditioning technique to reduce stress associated with repeated intra-peritoneal injections in laboratory rats. Appl. Anim. Behav. Sci. 112, 158-173 (2008).
  6. Romanovsky, A. A., Kulchitsky, V. A., Simons, C. T., Sugimoto, N. Methodology of fever research: why are polyphasic fevers often thought to be biphasic. Am. J. Physiol. 275, 332-338 (1998).
  7. Turner, P. V., Pekow, C., Vasbinder, M. A., Brabb, T. Administration of substances to laboratory animals: equipment considerations, vehicle selection, and solute preparation. JAALAS. 50, 614-627 (2011).
  8. Lukas, G., Brindle, S. D., Greengard, P. The route of absorption of intraperitoneally administered compounds. J. Pharmacol. Exp. Ther. 178, 562-564 (1971).
  9. AALAS. Laboratory Mouse Handbook. AALAS. (2009).
  10. AALAS. LAT Training Manual. AALAS. (2009).
  11. AALAS. LATg Training Manual. AALAS. (2009).
  12. Barnett, S. W. Manual of Animal Technology. Wiley-Blackwell. 440 (2007).
  13. Baumans, V., Pekow, C. A. Handbook of Laboratory Animal Science. Hau, J., Schapiro, S. J. 1, CRC Press. 401-446 (2010).
  14. Bogdanske, J. J., Hubbard-Van Stelle, S., Riley, M. R., Schiffman, B. M. Laboratory Mouse Procedural Techniques. CRC Press. (2011).
  15. Danneman, P., Suckow, M. A., Brayton, C. The Laboratory Mouse. CRC Press. (2000).
  16. Sharp, P. E., La Regina, M. C. The Laboratory Rat. CRC Press. (1998).

Comments

7 Comments

  1. Hi,
    What is the possibility that I could request a DVD of the mouse handling training video. I will use it for training purposes at uconn.
    Thank you
    Janet

    Reply
    Posted by: Janet T.
    October 25, 2012 - 8:17 AM
  2. Hello Janet,

    Thank for viewing the video article and we're delighted to hear you found it to be helpful.

    Our goal is to provide the video via joVE so it can be accessed from any site as needed. You can certainly link directly to the article for your internal trianing needs, but at this time we are not offering the video in other formats including DVD/CD. If that changes, I have your contact inforamation and will follow up with you.

    Regards

    Elton

    Reply
    Posted by: Elton M.
    October 26, 2012 - 12:35 PM
  3. This video is a great tool for the training of technicians and graduate students. It is accessible and easy to follow for people that are more comfortable with visual training.

    Reply
    Posted by: Rana S.
    January 30, 2014 - 1:25 PM
  4. I can not download this video what is the problem ?

    Reply
    Posted by: maryam s.
    June 10, 2014 - 1:28 AM
  5. please send me this video to my email .i can not download it

    Reply
    Posted by: maryam s.
    June 10, 2014 - 1:29 AM
  6. How do i download the video?It is great for teaching purposes.

    Reply
    Posted by: Dotte Chegu A.
    September 12, 2014 - 3:39 AM
  7. Hi,
    I have seen your video administration in rodents by different routes and handling. Really, I found it very useful in my work and thanks a lot. In the video you have shown administration for all the routes except Intra-articular route. Intra-articular drug injection is very important for my studies could you please update that video also. It would be very helpful for me.

    Thanks and regards
    Mukesh Dhanka

    Reply
    Posted by: Mukesh D.
    September 9, 2016 - 10:21 AM

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