الإرواء داخل الأوعية من الحبر أسود الكربون تسمح برؤية موثوق من الأوعية الدماغية

Neuroscience

Your institution must subscribe to JoVE's Neuroscience section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

تحليل التشريح القوارض الدماغية تلعب دورا مهما في مجال البحوث التجريبية السكتة الدماغية. وفي هذا السياق، فقد اعتبر نضح داخل الأوعية الملونة مع اللاتكس كأداة قياسية لعدة سنوات. ومع ذلك، هذه التقنية يعني القيود التقنية المتميزة، التي تقوض استنساخ لها. هنا، نحن تصف طريقة بسيطة لتصور الأوعية الدماغية بطريقة استنساخه. حقن مزيج من اثنين من الأحبار السوداء الكربون المتاحة تجاريا من خلال نتائج البطين الأيسر في عضلة القلب ملء الأوعية الدماغية كافية من التصور مع التباين العالي. لقد طبقنا بنجاح هذه التقنية لتحديد نقاط تفاغري بين الأراضي الأوعية الدموية الدماغية من الفئران مع خلفيات وراثية مختلفة. وأخيرا نقدم أدلة على أن يمكن الجمع بين هذه الطريقة ورواية بسيطة لتلطيخ السفينة مع كلوريد triphenyltetrazolium (TTC) تلوين - أداة تستخدم على نطاق واسع لمراقبة وتحليل كميات احتشاء في الفئران.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Hasan, M. R., Herz, J., Hermann, D. M., Doeppner, T. R. Intravascular Perfusion of Carbon Black Ink Allows Reliable Visualization of Cerebral Vessels. J. Vis. Exp. (71), e4374, doi:10.3791/4374 (2013).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

التركيب التشريحي للسفن الدماغي هو أحد المحددات الرئيسية لديناميكا الدم في الدماغ وكذلك شدة الاصابة بعد الشتائم الدماغية. الأوعية الدموية الدماغية بشكل حيوي يستجيب لمختلف الدول المرضية في جسم المريض ويجعلها تظهر اختلافات كبيرة بين السلالات وتحت ظروف من التلاعب الجيني. أساسا، وهي تقنية يمكن الاعتماد عليها لتلطيخ السفينة داخل الجمجمة أمر ضروري من أجل دراسة التسبب في السكتة الدماغية. حتى وقت قريب، واستخدمت مجموعة من التقنيات المختلفة لتصور الأوعية الدموية الدماغية بما في ذلك حقن الراتنج اللزوجة المنخفضة، araldite F، مختلطة مع الجيلاتين الأصباغ المختلفة 1 (أي كارمين الأحمر، الهند الحبر) أو اللاتكس مع 2 أو 3 دون أسود الكربون. وقد نضح من مجمع المطاط الأبيض من خلال الأبهر الصاعد لاول مرة من قبل كويل وJokelainen 3. عدلت مايدا وآخرون (2) وذلك بإضافة بروتوكول كاربون الحبر الأسود إلى مجمع اللاتكس لتحسين التصور المقابل من السفن بعد نضح المياه المالحة من الدماغ. ومع ذلك، من ذوي الخبرة في كثير من الأحيان غير فعالة نضح وشغل كافية من السفن بسبب اللزوجة العالية للمجمع المطاط 4. لذلك، وقد وصفت لنا تقنية بسيطة وفعالة من حيث التكلفة باستخدام مزيج من اثنين من الأحبار السوداء الكربون المتاحة تجاريا (CB1 CB2 و) لتصور الأوعية الدموية الدماغية بطريقة استنساخه 5. وقد أظهرت لنا أن نضح مع CB2 + CB1 في نتائج الفئران في تلطيخ من الأوعية الدماغية أقل بكثير في أعلى كثافة بالمقارنة مع اللاتكس نضح 5. هنا، نحن تصف بروتوكول لدينا للتعرف على نقاط تفاغري بين الأمامي (ACA) والشرايين الدماغية الأوسط (MCA) لدراسة التغيرات في الفئران السفينة مع خلفيات وراثية مختلفة. وأخيرا، فإننا بيان جدوى أسلوبنا في اتصال عابر نموذج نقص التروية الدماغية في الفئران من خلال الجمع بين CB1 +CB2 بوساطة السفينة تلطيخ مع تلطيخ TTC بدرجات مختلفة من الإصابات الدماغية.

Protocol

1. الحيوانات

  1. وأجريت التجارب وفقا للمبادئ التوجيهية NIH لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية والتي وافقت عليها السلطات المحلية. لجميع التجارب، C57Bl6 / J الفئران البرية نوع، ApolipoproteinE - استخدمت (ApoE KO) وSV129 الفئران (12-16 أسابيع من العمر، 26-30 غرام من وزن الجسم، 5-6 في المجموعة التجريبية الحيوانات) - /.

2. تلطيخ من الأوعية الدماغية مع اللثي الملونة

  1. إعداد خليط من 25 ميكرولتر الحبر الكربون الأسود (Herlitz، ألمانيا) مع 0.5 مل من مجمع المطاط (Pebeo، فرنسا) بنسبة 1:20 في أنبوب EP والاحماء الخليط في C ° 37 في حمام مائي. جمع الخليط في حقنة 2 مل مع إبرة 30G-28 من قبل تخدير الحيوان.
  2. حل 50 ملغ من مسحوق هيدروكلوريد papavarine في 1 مل من محلول ملحي معقم طبيعي. جمع المحلول في حقنة الأنسولين. قطع الإبرة من آخر حقنة الأنسولين العقيمة. وضع هذه الإبرة في نهاية C 20PE10 أنبوب مترا. الآن نعلق على هذا الأنبوب PE10 الإبرة من الحقنة تحتوي على الأنسولين papavarine حل هيدروكلوريد ليتم حقنه عن طريق الوريد الفخذي لضمان توسع الأوعية وملء السليم للسفن.
  3. إعداد آخر المحاقن الأنسولين كل منهما يحتوي على 1 مل من محلول ملحي. المحاقن الأنسولين تسمح التسليم السلس لحقن السوائل في مكان محدد. ومع ذلك، ينبغي استخدام بسبب اللزوجة العالية من مادة اللاتكس، البديل 1 مل المحاقن مع الإبر أوسع القابلة للإزالة.
  4. اتخاذ جميع المحاقن المعقمة وأدوات تشريح قريبة من مرحلة التشغيل. نشر ورقة حول درابر الجراحية المرحلة العملية. وينبغي أن المرحلة العملية مضيئة بما فيه الكفاية ويمكن استخدام مجهر التشغيل إذا لزم الأمر.
  5. قياس وزن الجسم الآن على فأرة الحاسوب C57Bl6 / J ثم حمل التخدير مع 5٪ isoflurane يتبخر في 70٪ N 2 O و 30٪ O 2. تواصل مع التخدير 1٪ من isoflurane تبخيرها. بعد positionin السليمز من الفأرة على ظهرها وتثبيت من أطرافه، وتقييم عمق التخدير. ثم قص الجلد فوق الفخذ الأيسر الوريد والوريد تحديد موقع. إدراج غيض من إبرة حادة وضعت على PE10 أنبوب وحقن ببطء papavarine حل هيدروكلوريد بمعدل من 100 ميكرولتر لكل دقيقة (50 وزن الجسم ملغ / كلغ).
  6. بعد الحقن، وقطع تجويف البطن والحجاب الحاجز بيرس. قطع الأضلاع لفضح القلب دون الإضرار أو كدمات عليه. مقطع الشريان الأورطي الصدري النازل مع ملقط الشريان. اجراء خفض حاد خلال الأذين الأيمن للسماح للتجفيف الدم الوريدي. حقن 2 مل من المياه المالحة إلى البطين الأيسر، تليها حقن المطاط الملونة يدويا مع ضغط طفيف على ثوانى 18-20. استخدام المحاقن المعبأة سلفا واحدا تلو الآخر. تجنب أي فقاعات عن طريق الحقن.
  7. بعد حقن المطاط، وترك الحيوان لمدة 5 دقائق. قطع رأس الحيوان وإزالة بعناية الدماغ كله. رعاية جيدة لا تجرح بنية السفينة وكورتيX أثناء إزالة العظم الجمجمة والسحايا. وضع الدماغ في طبق خلية تحتوي على 60 مم الثقافة 6-8 مل من PFA 4٪ لالتقاط صورة. وضع مسطرة القياس تحت طبق شفافة. التقاط الصور في التكبير 25X من ظهري وبطني من سطح الدماغ مع كاميرا ملحقة المجهر التشغيل. ينبغي أن تؤخذ الصور في زاوية 90 درجة بين طبق بتري والهدف المجهر من أجل تحديد المسافة الأصلي.
  8. كرر الإجراء في آخر الحيوانات 4-5.

3. تلطيخ من الأوعية الدماغية مع خليط من أحبار الكربون الأسود

  1. لمقارنة نتائج تلطيخ اللاتكس القائمة على بروتوكول مع الأوعية الدموية الدماغية لدينا، وإعداد خليط من 100 ميكرولتر من Herlitz Stempelfarbe الحبر (CB1) مع 900 ميكرولتر من شوارز البجع الحبر Scribtol (CB2) في أنبوب 1.5 مل EP. إعداد أنابيب EP اثنين إلى جعل الحجم الكلي للخليط مل 2 من CB1 CB2 وبنسبة 1:9. جمع الخليط في اثنين من محاقن الأنسولين منفصلة (1مل لكل منهما). تتويج للمحاقن ووضعها في حمام مائي في عملية الاحماء إلى 37 ° C. جمع 2 مل من محلول ملحي في آخر المحاقن الأنسولين اثنين، ووضعها في حمام مائي أيضا.
  2. تخدير الحيوان وكرر نفس الإجراء كما هو موضح أعلاه باستثناء الحقن من هيدروكلوريد papavarine. بعد حقن salaine مل 2 في البطين الأيسر، وضخ مزيج مل 2 من أحبار الكربون الأسود بدلا من اللون اللاتكس. أداء الحقن باليد مع ضغط طفيف على 18-20 ثانية لكل مل. مقطع الشريان الأورطي الصدري النازل قبل الحقن.
  3. التضحية الحيوانية، وإزالة المخ والتقاط الصور.
  4. على المدى الطويل الحفاظ على الدماغ، وطرح في الدماغ PFA 4٪ ثم بين عشية وضحاها من الحضانة مع زيادة تركيز السكروز مع تدريجيا حتى الدماغ العائمة يغطس تماما (5٪ ثم بنسبة 15٪ ثم 30٪). ويمكن أيضا أدمغة الحيوانات perfused مع اللاتكس ملونة يتم الاحتفاظ في نفس الطريق.
  5. أداءالإجراء في آخر الحيوانات 4-5. لمقارنة الفرق في علم التشريح الدماغي الوعائي بسبب الخلفية الجينية المختلفة أو سلالات، كرر ذلك البروتوكول وعدد متساو من KO ApoE والفئران SV129، على التوالي.
  6. لدراسة علم التشريح الأوعية الدموية تحت ظروف الدماغية، لحث عابرة نقص التروية الدماغية البؤرية لمدة 45 دقيقة أو 90 دقيقة وفقا لبروتوكول قياسي من انسداد داخل اللمعة من تحت التخدير العميق MCA (وصفا مفصلا لعملية جراحية خارج نطاق هذه المقالة، و ويشار إلى القارئ Doeppner وآخرون، 2010). في نهاية فترة المخطط ضخه (1 يوم أو 5 أيام)، نفذ تلطيخ الأوعية الدموية مع CB1 CB2 + الأحبار وصمة عار فقط الدماغ كله مع الحل TTC ​​2٪ في C ° 37 لمدة 5-10 دقيقة لتحديد حجم احتشاء . يتم تقليل TTC ​​لformazan الملونة الحمراء من الانزيمات الميتوكوندريا (نازعة سكسينات خاصة). بعد تلطيخ TTC، وعملية الأيض الأنسجة النشطة البقع الحمراء العميقة في حين أن الأنسجة احتشاء يبقى unstaiNED ويظهر الأبيض بسبب انزيم الميتوكوندريا المختلة وظيفيا والتشويه والتحريف. جمع الصور بنفس الطريقة كما هو موضح أعلاه.

4. دراسة الأقاليم الوعائية الدماغية

  1. لتحليل التشريح الإجمالي للسفن الدماغي والصور من السطح الظهري من الدماغ إما الملون مع اللاتكس أو الملونة CB1 يمكن تحليل + CB2 الأحبار مع برنامج يماغيج (مقرها جافا البرمجيات المستخدمة في المجال العام ومعالجة الصور وتحليلها). قد أدمغة perfused مع اللاتكس ملونة تظهر درجات متفاوتة من تلطيخ السفينة الموجودة على السطح الظهري، في حين CB1 CB2 + نضح وصمة عار جميع السفن على أسطح كل من بطني وظهري.
  2. فتح ملف صورة مع برنامج يماغيج. تحديد جميع النقاط تفاغري بين ACA وMCA و. يتم تعريف نقطة تفاغري كموقع حيث القطر السفينة هو أضيق أو المسافة النصف بين أقرب نقطة المتفرعة من ACA وفروع MCA، على التوالي 2.
  3. تعيين النطاق في مم. قياس المسافة بين خط وتفاغري خط الوسط في 4 مم الذيلية إلى القطب الجبهي من الدماغ باستخدام أداة رسم خط مستقيم و "التدبير" الأداة. أن تفعل الشيء نفسه في نحو caudally 6 مم من القطب الجبهي. تحليل الصور 3-4 في الحيوان وحساب القيمة المتوسطة. مقارنة القيم بين مجموعات مختلفة من الحيوانات للتعرف على الاختلاف من التشريح الدماغية. في C57Bl6 / J الحيوانات، ويمكن تتبع خط تفاغري بين ACA وMCA كلما اقتربنا من خط الوسط في 4 مم 6 مم مما كان عليه في نحو caudally من القطب الجبهي. سوف ApoE الفئران KO تقديم هناك اختلاف كبير في هذا الصدد. على العكس من ذلك، سوف الفئران في SV129 خط تفاغري تكمن مم وأخرى موازية لخط الوسط سواء في 4 مم و 6 من القطب نحو caudally الأمامية.
  4. لتحليل التشريح الأوعية الدموية طن ظروف الدماغية، نفذ نفس الحسابات المذكورة أعلاه. تحديد الحدود احتشاء الأنسجة والهامش باللون الأحمر والأبيض تمثل الأنسجة النشطة أيضي والأنسجة نخرية غير ملوثين، على التوالي. قياس المسافة من الحدود احتشاء من خط الوسط في 4 مم 6 مم والذيلية في من القطب الجبهي من الدماغ. جمع القيمة المتوسطة من الصور 3-4 في الحيوان. مقارنة النتائج بين نقص التروية مختلفة وفترات ضخه.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

بروتوكول الموصوفة هنا يتغلب على القيود التقنية من المطاط التصور التقليدي القائم على الأوعية الدموية الدماغية القوارض. الشكل 1A يدل على أن نضح التالية من اللاتكس الملونة، فقط السفن الكبيرة على السطح البطني هي الملون، وترك كامل سطح ظهري غير ملوثين. نتائج شديدة التفاوت. واحد فقط من أصل ستة الحيوان يظهر تلطيخ الجزئي للACA وMCA الظاهر على السطح الظهري للدماغ (المعطيات غير معروضة). وعلى العكس، CB1 CB2 + نتائج نضح في ملء كاف من السفن الصغيرة والكبيرة على حد سواء بطريقة متساوية (1B الشكل). وتلطيخ مستقرة حتى 7 أيام دون أي تغيير في النوعية. باستخدام برنامج يماغيج، ونحن كميا المسافة من نقطة تفاغري بين ACA وMCA في خط الوسط من النوع البري في C57Bl6 / J الفئران (الشكل 1C). قارنا هذه القيم مع الفئران KO ApoE لمراقبة ما إذا كان أو لم يكن modificati الوراثيةكان على أي تأثير على الأوعية الدموية وتشريح الإقليمية (1D الشكل). وعلى الرغم من يطرق ApoE لم يؤثر على التركيب التشريحي للسفن الدماغي في C57Bl6 / J الفئران، وقد لوحظ فرق كبير بين سلالات C57bl/6J وSV129 (الشكل 1E، F). وهكذا، ونحن قادرون على إظهار جدوى من هذا البروتوكول تلطيخ لتقييم الاختلافات التشريحية للالأوعية الدموية الدماغية بسبب الاختلافات الجينية أو سلالة في الفئران.

في النماذج التجريبية السكتة الدماغية القوارض، ويستخدم على نطاق TTC تلطيخ لمراقبة حجم احتشاء. التصور في وقت واحد من الأوعية الدماغية واحتشاء حجم تعطينا الفرصة لتحليل التغيرات المورفولوجية بعد ضخه-نقص التروية. لذلك، يكون التحقق من وجود أو عدم ونحن CB1 CB2 + بوساطة الأوعية الدموية تلطيخ مستقر مع تلطيخ TTC بدرجات مختلفة من الإصابات الدماغية-ضخه (الشكل 2A-H). لقد قمنا بتحليل كذلك تفاغري نقطة بين ACA وMCA على بعد 45 دقيقة أو 90 دقيقة من نقص التروية المتطابقة مع إما 1 أو 5 أيام ضخه فترات يوما (الشكل I، J). كما هو متوقع، أظهرت متوسط ​​المسافة بين خط الوسط ونقطة تفاغري لا يوجد فرق كبير بين المجموعات (الشكل 2I، J) وكان في نفس النطاق مع المنظمات غير الدماغية الحيوانات (الشكل 1F). ومع ذلك، تختلف المسافة من خط الوسط الى الحدود احتشاء بشكل كبير، مما يعكس زيادة حجم احتشاء مع درجة أعلى من نقص التروية-ضخه إصابة (الشكل 2k، L). هذه البيانات تظهر أن يمكن استنساخها CB1 CB2 + تلطيخ في الحيوانات تعرض لدرجات مختلفة من نقص التروية، وإصابة إعادة إشباع الخلايا استقرار تلطيخ عندما يقترن تلطيخ TTC.

374/4374fig1.jpg "/>
الشكل 1. ملاحظة تشريح الأوعية الدموية الدماغية في الفئران مع وجود اختلافات وراثية والتوتر. الشكل 1A يدل على أن نضح داخل الأوعية من البقع الملونة فقط اللاتكس السفن الكبيرة على السطح البطني، في حين السطح الظهري يبقى غير ملوثين. وعلى العكس، CB1 CB2 + نتائج نضح في تلطيخ الدائم لكلا السفن الصغيرة والكبيرة على بطني وظهري السطوح من الدماغ (1B الشكل). القياس الكمي لمسافة النقاط تفاغري بين الشريان المخي الأمامي (ACA) والشريان الدماغي الأوسط (MCA) من خط الوسط في نوع البرية C57Bl6 / J الفئران (الشكل 1C) لا تظهر أي اختلاف مع نظرائهم من متحولة وراثيا KO ApoE (الشكل 1D). ومع ذلك، لاحظت فرق كبير بين J / C57Bl6 وSV129 سلالات (الشكل 1E، F). مقياس بار = 2mm و. * تختلف اختلافا كبيرا عن كل نوع البرية C57BL6 / J والفئران KO ApoE في 4MM، ص p <0.01.

الشكل 2
الشكل 2. تحليل التشريح الأوعية الدموية في أدمغة الدماغية. الصور الشكل 2A-H عرض للأسطح بطني وظهري من العقول التعرض للنقص التروية 45 دقيقة أو 90 دقيقة تليها 1 يوم أو 5 أيام ضخه مرة. تعرض اللوحة اليمنى CB1 CB2 + تلطيخ الأوعية الدموية بوساطة، في حين أن اللوحة اليمنى يظهر مزيج من تلطيخ كل من الأوعية الدموية وتلطيخ TTC، مما يدل على استقرار تلطيخ الأوعية الدموية في درجات مختلفة من الإصابات الدماغية-ضخه (الشكل 2A-H). تحليل نقاط تفاغري بين الشريان المخي الأمامي (ACA) والشريان الدماغي الأوسط (MCA) بعد نقص التروية دقيقة 45 دقيقة أو 90 المتطابقة مع الفترة 1 يوم إما أو 5 أيام ضخه ديبيكتس لا يوجد فرق كبير بين المجموعات (الشكل 2I، J). ومع ذلك، يمكن ملاحظة اختلاف كبير في المسافة من خط الوسط الى الحدود احتشاء، مما يدل على زيادة حجم احتشاء مع ارتفاع درجة نقص التروية-ضخه إصابة (الشكل 2k، L). شريط مقياس = 2 مم. * تختلف بشكل جوهري عن نقص التروية 45 دقيقة مع ضخه يوم 1، ص <0.05، و** ضخه 5 أيام، p <0.01. اضغط هنا لمشاهدتها بشكل اكبر شخصية .

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

يمكن أن يتم نضح من CB2 + CB1 عن طريق الحقن اليدوي بنجاح من دون التدريب المكثف لأنها لا تنطوي على أي جهاز معين يعني أن ضغط معينة 2،3. عدم تجانس النتائج نضح في بروتوكول لدينا هو أيضا لا تذكر. فقط 1 الحيوانية من الحيوانات غير الدماغية 16 و 3 من الحيوانات من 20 الدماغية أظهرت نضح غير مكتملة. في هذه الحالات، كان إدراج فقاعات خلال نضح المياه المالحة مما يؤدي إلى انسداد الأوعية الأرجح السبب نتائج ناجحة.

على الرغم من الأصل تم نضح من اللاتكس التي تتم من خلال الأبهر الصاعد 2،3، كما تم الإبلاغ عن طرق بديلة للنضح بما في ذلك البطين الأيسر أو 7،8 الشريان السباتي المشترك 9. لم نعثر على أي اختلاف كبير في نتائج التروية بعد من خلال الشريان الأورطي إما تصاعدي أو البطين الأيسر (الملاحظات غير منشورة). على هذا النحو، كان هذا الأخيراختيار أسهل بسبب سهولة الوصول لها.

قبل اختيار أحبار الكربون محددة الأسود المذكورين في هذه الدراسة، لدينا تقييم نتائج نضح داخل الأوعية مع مجموعة من الأحبار السوداء الكربون المتاحة تجاريا. ويتم اختيار CB1 CB2 والكفاءة لنضح واستقرار تلطيخ. CB1 لديه لزوجة منخفضة جدا (1.1 ميجا باسكال / ثانية) تحتوي على 2.1٪ بينما CB2 أسود الكربون - صنعت أصلا حبر الخط - يحتوي على الكربون الأسود 2.5٪ مع ارتفاع اللزوجة (10-50 ميجا باسكال / ثانية). وقد وجد طلب فردي من هذه الأحبار غير كافية فيما يتعلق بكل كفاءة واستقرار تلطيخ. وبالتالي، جمعنا بين الأحبار ومعاير نسب الجمع. نضح مع CB1: CB2 في نتائج نسبة 1:09 في تلطيخ الدائم لكلا السفن الكبيرة والصغيرة. ولذلك، يمكن تتبع الشرايين نقاط تفاغري بسهولة لتحديد تقاطع بين منطقتين الأوعية الدموية، أي. هيئة مكافحة الفساد وMCA و. هذه وindings تتفق مع التقارير السابقة 2،10،11.

ApoE الفئران KO تقديم 5-8 مرات أعلى الكولسترول البلازما مستوى وعرضة للغاية لتطوير تصلب الشرايين عندما وضعت على نظام غذائي غني الكولسترول 12. ما إذا كان التعديل الوراثي يؤثر أيضا على تشريح الأوعية الدماغية لم تبلغ بعد. من ناحية أخرى، ذكرت وبالفعل SV129 الفئران إلى تقديم أكبر حجم احتشاء بالمقارنة مع الفئران C57Bl6 / J بسبب التشريح على الأوعية الدموية المختلفة 2. نحن لدينا بروتوكول التحقق في هذه المجموعات الثلاث من الحيوانات لمقارنة الفرق في علم التشريح الأوعية الدموية.

بروتوكول للتحقق من صحة تلطيخ في أدمغة الدماغية، ماضون نقص التروية الدماغية العابرة التنسيق ليشمل آثار ضخه على عكس الدراسات السابقة التي ركزت أساسا على انسداد دائم في MCA 2-4، 10،13. كما هو متوقع، لم نكن نلاحظ أي فروق ذات دلالة إحصائية في نمط Lالمعهد الوطني للإحصاء من مفاغرة بعد فترات مختلفة الدماغية وضخه في C57BL6 الفئران J /. لم يلاحظ أي تغيرات في أقطار السفينة بين نصفي الكرة الدماغية الإقفارية، وغير، ويفترض، هذه التغييرات تحدث في أوقات أطول ضخه، أي 2-3 أسابيع بعد السكتة الدماغية 14. وفي الختام، وبروتوكول أبداه لنا هو أقل تعقيدا، فعالة من حيث التكلفة التقنية، التي يمكن استنساخها بسهولة بالمقارنة مع التقليدية القائمة على نضح اللاتكس لتصور الأوعية الدموية الدماغية. ويمكن اعتبار أنها أداة فعالة لتحليل التشريح الدماغي الإجمالي للسفن والأوعية الدموية الأراضي في مختلف الظروف الفسيولوجية والمرضية. من خلال الجمع بين TTC تلطيخ مع هذه التقنية تتيح فرصة جديدة للتعرف على مدى إهانة الدماغية في سياق مناطق العرض الأوعية الدموية في الدماغ.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Acknowledgements

نود أن نشكر بريتا Kaltwasser للحصول على المساعدة التقنية لها ممتازة وماهيش كومار تيلي لتنظيم إعداد تصوير الفيديو.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Scribtol Schwarz (CB2) Pelican, Germany 221 135
Stempelfarbe (CB1) Herlitz PBS AG, Germany 10417202
Gedeo Latex Pebeo, France 13042B

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Meng, H., Peng, Y., et al. Nuclear contrast angiography: A simple method for morphological characterization of cerebral arteries. Brain Research. 1261, 75-81 (2009).
  2. Maeda, K., Hata, R., et al. Differences in the cerebrovascular anatomy of C57black/6 and SV129 mice. Neuroreport. 9, (7), 1317-1319 (1998).
  3. Coyle, P., Jokelainen, P. T. Dorsal cerebral arterial collaterals of the rat. The Anatomical Record. 203, 397-404 (1982).
  4. Coyle, P. Dorsal cerebral collaterals of stroke-prone spontaneously hypertensive rats (SHRSP) and Wistar Kyoto rats (WKY). The Anatomical Record. 218, 40-44 (1987).
  5. Hasan, M. R., Herz, J., et al. Visualization of macroscopic cerebral vessel anatomy—A new and reliable technique in mice. Journal of Neuroscience Methods. 204, 249-253 (2012).
  6. Doeppner, T. R., Nagel, F., et al. TAT-Hsp70-mediated neuroprotection and increased survival of neuronal precursor cells after focal cerebral ischemia in mice. Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 29, 1187-1196 (2009).
  7. Todo, K., Kitagawa, K., et al. Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor enhances leptomeningeal collateral growth induced by common carotid artery occlusion. Stroke. 39, (6), 1875-1882 (2008).
  8. Sugiyama, Y., Yagita, Y., et al. Granulocyte colony-stimulating factor enhances arteriogenesis and ameliorates cerebral damage in a mouse model of ischemic stroke. Stroke. 42, (3), 770-775 (2011).
  9. Busch, H. J., Buschmann, I. R., et al. Arteriogenesis in hypoperfused rat brain. Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 23, (5), 621-628 (2003).
  10. Maeda, K., Hata, R., et al. Regional metabolic disturbances and cerebrovascular anatomy after permanent middle cerebral artery occlusion. in C57black/6 and SV129 mice. Neurobiology of Diseases. 6, 101-108 (1999).
  11. Wang, Y., Kilic, E., et al. VEGF overexpression induces post-ischaemic neuroprotection, but facilitates haemodynamic steal phenomena. Brain. 128, (1), 52-63 (2005).
  12. ElAli, A., Doeppner, T. R., et al. Increased blood-brain barrier permeability and brain edema after focal cerebral ischemia induced by hyperlipidemia: Role of lipid peroxidation and calpain 1/2, matrix metalloproteinase-2/9, and RhoA overoxidation. Stroke. 42, (2011).
  13. Coyle, P., Jokelainen, P. T. Differential outcome to middle cerebral artery occlusion in spontaneously hypertensive stroke-prone rats (SHRSP) and Wistar Kyoto (WKY) rats. Stroke. 14, 605-611 (1983).
  14. Coyle, P. Diameter and length changes in cerebral collaterals after middle cerebral artery occlusion in the young rat. The Anatomical Record. 210, (2), 357-364 (1984).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics