In vivo Imaging metode til at skelne akut og kronisk inflammation

Immunology and Infection

Your institution must subscribe to JoVE's Immunology and Infection section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Vi beskriver en ikke-invasiv billeddannelse fremgangsmåde til at skelne inflammatoriske stadier. Systemisk levering af luminol afbilder områder med akut betændelse afhængige MPO aktivitet i neutrofiler. I modsætning hertil muliggør injektion af lucigenin til visualisering af kronisk inflammation afhængig PHOX aktivitet i makrofager.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Tseng, J. C., Kung, A. L. In vivo Imaging Method to Distinguish Acute and Chronic Inflammation. J. Vis. Exp. (78), e50690, doi:10.3791/50690 (2013).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Inflammation er et grundlæggende aspekt af mange menneskelige sygdomme. I denne video rapporter, viser vi non-invasive bioluminescens imaging teknikker, der skelner akut og kronisk inflammation i musemodeller. Med vævsskader eller patogen invasion, er neutrofile den første linje i forsvaret, spiller en stor rolle i formidlingen af ​​den akutte inflammatoriske respons. Som den inflammatoriske reaktion skrider frem, cirkulerende monocytter gradvist migrerer ind i læsionsstedet og differentiere til modne makrofager, som medierer kronisk inflammation og fremme vævsreparation ved at fjerne vævsrester og producere anti-inflammatoriske cytokiner. Intraperitoneal injektion af luminol (5-amino-2 ,3-dihydro-1 ,4-phthalazinedione, natriumsalt) muliggør påvisning af akut betændelse i vid udstrækning medieres af væv-infiltrerende neutrofiler. Luminol reagerer specifikt med superoxid dannes inden for de phagosomes af neutrofiler siden bioluminescens resultater fra en myeloperoxidase (MPO) medieret reaktion. Lucigenin (bis-N-methylacridinium nitrat) også reagerer med superoxid for at generere bioluminescens. Men lucigenin bioluminescens er uafhængig af MPO og det udelukkende er afhængig af fagocyt NADPH oxidase (PHOX) i makrofager under kronisk inflammation. Sammen luminol og lucigenin tillade ikke-invasiv visualisering og langsgående vurdering af forskellige fagocyt populationer på tværs af både akutte og kroniske inflammatoriske faser. Grund af den vigtige rolle af inflammation i en række humane sygdomme, mener vi denne ikke-invasiv billeddannelse metode kan hjælpe undersøge differentielle roller neutrofiler og makrofager i en række patologiske tilstande.

Introduction

Inflammation er en stærkt reguleret biologisk respons involveret i en række humane sygdomme, herunder mikrobiel infektion 1, sårheling 2, diabetes 3, kræft 4, hjerte 5 neurodegenerativ 6, og autoimmune sygdomme 7. Vævsinflammation kræver ordentlig koordinering af de forskellige immunceller for at opnå patogen clearance, væv reparation, og sygdom opløsning. Neutrofiler og makrofager er vigtige immune mediatorer af vævsinflammation. I den akutte fase af inflammation, er neutrofile de første respondenter til forskellige skadelige stimuli og vævsskader 8.. De neutrofile hurtigt ekstravasere fra cirkulation til stedet for skaden, hvor cellerne inaktivere invaderende mikrober ved at frigive antimikrobielle granulater og fagocytose. Under fagocytose opsluge neutrofiler invaderer mikrober i phagosomes, inden for hvilke celler producerer høje niveauer af Superoxide (O 2 · -). Phagosomal superoxid er den primære kilde til mange downstream reaktive ilt arter (ROS). For eksempel kan superoxid kan dismutated til hydrogenperoxid (H 2 O 2) ved spontan spaltning eller ved superoxiddismutase (SOD) 9, 10. Neutrofiler, yderligere myeloperoxidase (MPO) konverterer hydrogenperoxid til antimikrobiel chlorundersyrling (HOCI) 11. Da de inflammatoriske responser fortsætter, cirkulerende monocytter gradvist migrerer ind i læsionsstedet og differentiere til modne makrofager 2, hvis fagocytotisk funktion hjælpe med at fjerne inaktiverede patogener og cellerester. Hertil kommer, som en central regulator i den senere fase af inflammation makrofag fremmer væv reparation ved at producere anti-inflammatoriske cytokiner 12 og ved at skabe ekstracellulære ROS på et lavere niveau 9.. Den ROS genereret på dette senere tidspunkt regulerer vævsremodellering, nye fartøj dannelse, og reepitheliasering 13..

Fagocyt NADPH oxidase (phOx) er den primære kilde til superoxid produktion i både neutrofile og makrofager 9.. Phox er en multi-subunit kompleks hvis samling er stramt reguleret 9. Holoenzymet indeholder flere cytosoliske regulatoriske underenheder (P67 phox, P47 phox, P40 phox, og RAC) samt en membranbundet heterodimer cytochrom b 558 (bestå af underenhed CYBA og CYBB). Cytochrom bs 558 er reaktionen kerne, inden for hvilken CYBB underenhed (også kendt som P91 phox og NOX2) foretager den primære redox kædereaktion 9.. Interessant, dens montage sites er forskellige mellem neutrofile og makrofager. I hvilende neutrofiler, er cytochrom bs 558 meste til stede i membranen af intracellulære opbevaring granulat 14. Under fagocytose samle neutrofiler holoenzymes på phagosomes 9, hvor høje niveauer af MPO-aktivitet er også til stede. Neutrofil phOx hurtigt forbruger ilt og udøver sin mikrobicid magt ved ROS produktion, et fænomen kaldet respiratorisk burst 11.. I modsætning hertil har makrofager et lavere niveau af MPO udtryk og cytochrom b 558 er for det meste findes i plasmamembranen 15, 16. Således neutrofiler producerer høje niveauer af superoxid for anti-mikrobielle aktivitet, mens makrofager genererer mindre superoxid for regulerende funktioner 15.

Da inflammation er en indviklet in vivo-processen, vil non-invasive billeddiagnostiske metoder er specifikke for de forskellige faser af inflammation tillade kvantitative og langsgående vurdering af sygdomsmodeller. Brug mekanistiske undersøgelser har vi tidligere vist anvendelsen af ​​to kemiluminescerende midler, luminol (5-amino-2 ,3-dihydro-1 ,4-phthalazinedione) og lucigenin (bis-N-methylacridinium nitrat)For ikke-invasiv billeddannelse af akutte og sene (kroniske) stadier af inflammation, henholdsvis 17. Luminol muliggør visualisering af neutrofil MPO aktivitet i den akutte fase af inflammation 18-20, hvorimod lucigenin bioluminescens kan anvendes til at vurdere makrofag aktivitet i forbindelse med den sene fase eller kronisk betændelse 17.. I dette manuskript, brugte vi to eksperimentelle betændelse modeller (sc PMA og SC LPS) til at vise disse billeddannende teknikker.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Bemærk: Alle dyreforsøg blev udført under godkendte institutionelle protokoller og dyrepleje retningslinjer.

1.. Reagenser og løsninger

  1. PMA løsning til sc podning: Forbered en stamopløsning af phorbol 12-myristat-13-acetat (PMA) ved 5 mg / ml i DMSO. Opbevar stamopløsningen ved -20 ° C. Før podning, tø stamopløsningen og fortyndes til 1 mg / ml PMA i PBS.
  2. LPS løsning til sc podning: Opløs lipopolysaccharid (LPS fra Salmonella enterica serotype enteritidis) i sterilt PBS ved 1 mg / ml før SC inokulering.
  3. Luminol løsning for akut fase billeddannelse: Opløs luminol (5-amino-2 ,3-dihydro-1 ,4-phthalazinedione, natriumsalt) i sterilt normalt saltvand (0,9% NaCl) ved 10 mg / ml. Opløsningen kan opbevares ved -20 ° C før brug.
  4. Lucigenin løsning til kronisk fase imaging: Opløs lucigenin (bis-N-methylacridinium nitrat) i sterilt saltvandved 2,5 mg / ml. Opløsningen kan opbevares ved -20 ° C før brug.

2.. Subkutan PMA Inflammation Model

  1. Bedøve nCr nøgne mus i en induktion kammer med 1-2% isofluran. Bekræft generel anæstesi ved tab af bevægelse og en konstant respirationsfrekvens. Overfør et dyr til en næse kegle forsynet med isofluran-blandet gas og holde dyret under anæstesi.
  2. Brug et isopropyl spritserviet til at rense og desinficere injektionsstedet på venstre flanke.
  3. Anvendelse af steril teknik, 50 ul af PMA podning opløsning (indeholdende 50 ug PMA) injiceres ind i det subkutane plads på venstre flanke. Fjern overskydende væske fra injektionsstedet ved hjælp af en isopropylalkohol. Undgå brug af analgesi da det kan påvirke inflammatoriske reaktioner.
  4. Flyt dyret tilbage til huset bur og nøje overvåge dets nyttiggørelse fra anæstesi. For at hjælpe i inddrivelse, skal du bruge en varmepude til at holde dyret varmt.

3.. Subkutan LPS Inflammation Model

  1. Bedøve C57BL/6J-mus med 1-2% isofluran i en induktion kammer. Når oprettelse generel anæstesi, overføre et dyr til en næse kegle forsynet med isofluran gas og holde dyret under anæstesi.
  2. Brug et isopropyl spritserviet til at rense injektionsstedet på venstre trædepude.
  3. Anvendelse af steril teknik, 50 ul af LPS podning opløsning (indeholdende 50 ug LPS) injiceres ind i den venstre trædepude. Fjern overskydende væske fra injektionsstedet ved hjælp af en isopropylalkohol. Undgå brug af analgesi da det kan påvirke inflammatoriske reaktioner.
  4. Flyt dyret tilbage til huset bur og nøje overvåge dets nyttiggørelse fra anæstesi. Brug en varmepude til at holde dyret varm under opsving.

4.. Bioluminescens Imaging for Inflammation

  1. Bedøve dyret i en induktion kammer med 1-2% isofluran blandet gas. Confirm generel anæstesi ved tab af bevægelse og en konstant respirationsfrekvens.
  2. Mens dyret stadig er under anæstesi, intraperitonealt (ip) injicere luminol opløsning (10 mg / ml), eller lucigenin opløsning (2,5 mg / ml) i akut eller kronisk betændelse billeddannelse, hhv. Den endelige dosis er 100 mg / kg for luminol og 25 mg / kg for lucigenin. En lavere dosis af lucigenin (10-15 mg / kg) kan anvendes til at undgå eventuelle toksicitet for nogle musestammer. Tegn på toksicitet omfatter åndenød og åndedrætsbesvær. Den C57BL/6J stammen har lavere lucigenin tolerabilitet end NCR nøgen stamme.
  3. Overfør dyret ind i imaging kammer i et bioluminescens imaging system.
  4. Udføre sekventiel bioluminescens billeddannelse intervaller på 1 min. Hvert imaging trin består af 1 min erhvervelse tid f / stop-= 1, Binning = 16 og 0 sek forsinkelse.
  5. Inden for billede erhvervelse panelet for at muliggøre sekventiel multi-step imaging klik på sekvensen indstilling button. Give tilstrækkelige imaging trin i købet profil til at bestemme maksimal luminescens output (normalt 15 et minuts skridt vil være tilstrækkeligt). Den 15-min imaging sektion tillader tilstrækkelig tid til substrat absorption og systemisk cirkulation.
  6. Fjern dyret fra billeddannelse kammeret og flytte den tilbage til huset bur. For at hjælpe i inddrivelse, skal du bruge en varmepude til at holde dyret varmt.
  7. Under post-erhvervelse analysen bruge imaging software-pakke til at beregne peak total bioluminiscerende signal gennem standardiserede områder af interesse (ROI). Billederne er til stede som udstråling i fotoner / s / cm 2 / bh med minimal og maksimal tærskel angivet. Kvantitative data præsenteres som den samlede flux i fotoner per sekund per ROI.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Vi udførte langsgående bioluminescence imaging at vurdere akut og kronisk inflammation i eksperimentelle inflammation modeller. Phorbol 12-myristat-13-acetat (PMA) er et potent protein kinase C (PKC)-agonist, der aktiverer PHOX til superoxidanion produktion og udløser intense akutte inflammatoriske reaktioner 21.. SC injektion af 50 mg af PMA i NCR nøgne mus forårsagede hurtig hudirritation og akut inflammation ved injektionsstedet 18, 22, 23.. Vi udførte daglige billeddannelse i 4 dage med de første billeder opnået så tidligt som 3 timer efter PMA injektion. Figur 1 viste langsgående bioluminescens billeddannelse med luminol og lucigenin som substrater. Ved tidlige stadier af inflammation (3 timer), observerede vi signifikant luminol bioluminescens angiver høje niveauer af neutrofil MPO aktivitet på websteder af PMA injektion. Ingen signifikant lucigenin bioluminescence blev observeret i disse tidlige stadier af inflammation. Start pådag 2, vi observerede sårskorpedannelse og derfor reducerede luminescensintensitet. Som sårheling blev klart (figur 1A, dag 3 og 4), vi observerede støt stigning i lucigenin bioluminescens (figur 1B). Disse resultater illustrerer, at luminol bioluminescens er forbundet med den akutte fase af inflammation, hvorimod lucigenin bioluminescens tæt forbundet med vævsreparation i de sene faser af inflammation.

Uafhængigt, vi sc injiceret 50 ug lipopolysaccharid (LPS) i trædepuderne af vildtype C57BL/6J-mus, og udførte langsgående bioluminescens billeddannelse i op til 10 dage (figur 2A). LPS er en membran komponent af gramnegative bakterier. SC inokulering af LPS er i stand til at udløse kraftige inflammatoriske reaktioner ved TLR4 receptor aktivering og efterfølgende inflammatorisk kemokin / cytokinproduktion 24. I modsætning til PMA, som direkte aktiverer phOx for superoxid Production, LPS kræver en længere tid til fuldt ud at aktivere væv infiltrerende fagocytter 18. Da neutrofiler er de tidlige respons på mikrobe infektion, observerede vi forhøjet luminol bioluminescens i de første 4 dage af akut inflammation, som faldt efter dag 5 (figur 2B). I modsætning gradvist lucigenin bioluminescens steg i den sene og kroniske fase af inflammation (figur 2B dage 5-10).

Tilsammen viser disse resultater evnen til at anvende differential substrat specificitet at skelne akutte og kroniske inflammatoriske stadier. Vigtigst er billeddannelse medieret af de endogene enzymatiske aktiviteter immunceller, og der er ikke behov for ektopisk ekspression af reportere.

Figur 1
Fig. 1. In vivo langsgående bioluminescens billeddannelse af akutte og sene faser af inflammation. strong> (A) Vi inducerede lokal vævsinflammation ved sc injektion af 50 ug PMA, og udføres dagligt luminol (100 mg / kg, ip) og lucigenin (25 mg / kg, ip) bioluminescens billeddannelse starter ved 3 timer efter PMA injektion. Ingen signifikant baggrund auto-luminescens blev observeret ved inflammationssteder uden chemiluminescerende midler. (B) Kvantitativ repræsentation af luminol og lucigenin bioluminescens ved injektionsstedet. I den akutte fase af inflammation, domineret luminol signaler bioluminescence udgang (3 timer). I de senere faser af inflammation, havde injektionsstederne højere lucigenin bioluminescence sammenligning med luminol (dag 4). Fejlsøjler repræsenterer standardafvigelser af bioluminescens målinger på hver imaging tidspunkt. Klik her for at se større figur .

690fig2.jpg "/>
Figur 2. (A) 50 ug LPS blev injiceret sc i trædepuderne af C57BL/6J-mus. Langsgående bioluminescens billeddannelse med luminol og lucigenin blev udført dagligt i 10 dage. (B) Kvantitativ repræsentation af luminol og lucigenin bioluminescens på LPS injektionssteder. Luminol bioluminescens steg i de første 4 dage af akut inflammation. Men i de sene / kronisk faser af inflammation, luminol signaler faldet hurtigt og lucigenin bioluminescens gradvist øges. Fejlsøjler repræsenterer standardafvigelser af bioluminescens målinger på hver imaging tidspunkt. Klik her for at se større figur .

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

I denne rapport, viser vi en bioluminescence metode til ikke-invasiv billeddannelse af betændelse i levende dyr. At drage fordel af to selvlysende substrater, luminol og lucigenin kan fremgangsmåden skelne mellem forskellige faser af inflammation. Luminol bioluminescens er forbundet med neutrofiler i den akutte fase af inflammation, hvorimod lucigenin bioluminescens medieres af makrofager i den kroniske fase. Relativt lille (MW = 177,16 g / mol) og elektrisk ladet, kan luminol hurtigt ind både plasma og phagosomal membran 25-29. Desuden er luminol luminescens specifik til det intracellulære MPO aktivitet i neutrofiler 9. På den anden side, er lucigenin hovedsagelig membran uigennemtrængelig grund af sin større størrelse (MW = 510,5 g / mol) og to positive ladninger 25, 27-30.

Neutrofiler og makrofager samle PHOX holoenzym på forskellige subcellulære steder. Skønt begge reagenserafhænge phOx at give superoxidanion (O 2 · -), forskellen i celle permeabilitet og MPO-afhængighed gør det muligt for substrater til at differentiere inflammatoriske fagocytter i sygdomsmodeller. Neutrofiler udtrykker det meste af PHOX i membranen af intracellulære vesikler (phagosomes) 14, hvor høje niveauer af MPO er også til stede. Som en følge heraf er luminol bioluminescens specifikt forbundet med aktiverede neutrofiler under akut inflammation. I modsætning hertil samle makrofager PHOX i plasmamembranen som de infiltrerer og modnes under kronisk betændelse 15.. Lufttæt lucigenin kan interagere direkte med den ekstracellulære superoxid genereret af makrofager til at producere kronisk inflammatorisk bioluminescens.

Inflammation er en kompliceret in vivo proces, der kræver ordentlig koordinering af mange celletyper og forskellige ekstracellulære signalmolekyler. I denne video rapporter, viser visynergistisk anvendelse af både luminol og lucigenin, at overvågning af akut og sen (kronisk) fase betændelse i dyremodeller. Da disse substrater er kommercielt tilgængelige og relativt billige, vi mener, at dette relativt simpel og robust imaging metode nemt kan oversættes til in vivo anvendelse på mange sygdomsområder. Af note, sammenlignet med PET, MRI og nær-infrarødt (NIR) fluorescerende billeddiagnostiske teknikker kemiluminescent metode er ikke ideel til dyb væv billeddannelse på grund af substrater "blå emissionsspektre. For at forbedre vævsgennemtrængningen, er det for nylig blevet påvist, at den blå kemiluminescens emission kan overføres til co-administrerede nanopartikler NIR emission 31.. Yderligere ændring af deres kemiske strukturer kan potentielt øge deres quantum effektivitet for stærkere lyseffekt og forfine deres udledning spektre for dybere væv penetration.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne erklærer nogen interessekonflikt i denne undersøgelse.

Acknowledgements

Dette arbejde blev støttet af Nancy Lurie Marks Foundation. Vi takker Dr. Nancy E. Kohl for kritisk læsning af manuskriptet. Vi takker Kin K. Wong for hans assistance i udarbejdelsen af ​​denne video rapport.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO P8139  
Lipopolysaccharide from Salmonella enterica serotype enteritidis Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO L2012  
Luminol (5-amino-2,3-dihydro-1,4-phthalazinedione, sodium salt) Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO A4685  
Lucigenin (bis-N-methylacridinium nitrate) Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO M8010  
IVIS Spectrum imaging system with Living Imaging 4.2 software package Caliper LS/Perkin Elmer, Hopkinton, MA  

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Premack, B. A., Schall, T. J. Chemokine receptors: gateways to inflammation and infection. Nat. Med. 2, 1174-1178 (1996).
  2. Singer, A. J., Clark, R. A. Cutaneous wound healing. N. Engl. J. Med. 341, 738-746 (1999).
  3. Wellen, K. E., Hotamisligil, G. S. Inflammation, stress, and diabetes. J. Clin. Invest. 115, 1111-1119 (2005).
  4. Weitzman, S. A., Gordon, L. I. Inflammation and cancer: role of phagocyte-generated oxidants in carcinogenesis. Blood. 76, 655-663 (1990).
  5. Ridker, P. M., Cushman, M., et al. Inflammation, aspirin, and the risk of cardiovascular disease in apparently healthy men. N. Engl. J. Med. 336, 973-979 (1997).
  6. Wyss-Coray, T., Mucke, L. Inflammation in neurodegenerative disease--a double-edged sword. Neuron. 35, 419-432 (2002).
  7. Hamilton, J. A. Colony-stimulating factors in inflammation and autoimmunity. Nat. Rev. Immunol. 8, 533-544 (2008).
  8. Harlan, J. M. Leukocyte-endothelial interactions. Blood. 65, 513-525 (1985).
  9. Bedard, K., Krause, K. H. The NOX family of ROS-generating NADPH oxidases: physiology and pathophysiology. Physiol. Rev. 87, 245-313 (2007).
  10. Rest, R. F., Spitznagel, J. K. Subcellular distribution of superoxide dismutases in human neutrophils. Influence of myeloperoxidase on the measurement of superoxide dismutase activity. Biochem. J. 166, 145-153 (1977).
  11. Hampton, M. B., Kettle, A. J., et al. Inside the neutrophil phagosome: oxidants, myeloperoxidase, and bacterial killing. Blood. 92, 3007-3017 (1998).
  12. Serhan, C. N., Savill, J. Resolution of inflammation: the beginning programs the end. Nat. Immunol. 6, 1191-1197 (2005).
  13. Jiang, F., Zhang, Y., et al. NADPH oxidase-mediated redox signaling: roles in cellular stress response, stress tolerance, and tissue repair. Pharmacol. Rev. 63, 218-242 (2011).
  14. Calafat, J., Kuijpers, T. W., et al. Evidence for small intracellular vesicles in human blood phagocytes containing cytochrome b558 and the adhesion molecule CD11b/CD18. Blood. 81, 3122-3129 (1993).
  15. Johansson, A., Jesaitis, A. J., et al. Different subcellular localization of cytochrome b and the dormant NADPH-oxidase in neutrophils and macrophages: effect on the production of reactive oxygen species during phagocytosis. Cell. Immunol. 161, 61-71 (1995).
  16. Kumar, A. P., Piedrafita, F. J., et al. Peroxisome proliferator-activated receptor gamma ligands regulate myeloperoxidase expression in macrophages by an estrogen-dependent mechanism involving the -463GA promoter polymorphism. J. Biol. Chem. 279, 8300-8315 (2004).
  17. Tseng, J. C., Kung, A. L. In vivo imaging of inflammatory phagocytes. Chem Biol. 19, 1199-1209 (2012).
  18. Gross, S., Gammon, S. T., et al. Bioluminescence imaging of myeloperoxidase activity in vivo. Nat. Med. 15, 455-461 (2009).
  19. Kielland, A., Blom, T., et al. In vivo imaging of reactive oxygen and nitrogen species in inflammation using the luminescent probe L-012. Free Radic. Biol. Med. 47, 760-766 (2009).
  20. Zhou, J., Tsai, Y. T., et al. Noninvasive assessment of localized inflammatory responses. Free Radic. Biol. Med. 52, 218-226 (2012).
  21. Karlsson, A., Nixon, J. B., et al. Phorbol myristate acetate induces neutrophil NADPH-oxidase activity by two separate signal transduction pathways: dependent or independent of phosphatidylinositol 3-kinase. J. Leukoc. Biol. 67, 396-404 (2000).
  22. Taylor, R. G., McCall, C. E., et al. Histopathologic features of phorbol myristate acetate-induced lung injury. Lab Invest. 52, 61-70 (1985).
  23. Fukaya, S., Matsui, Y., et al. Overexpression of TNF-alpha-converting enzyme in fibroblasts augments dermal fibrosis after inflammation. Lab Invest. 93, 72-80 (2013).
  24. Lu, Y. C., Yeh, W. C., et al. LPS/TLR4 signal transduction pathway. Cytokine. 42, 145-151 (2008).
  25. Aitken, R. J., Buckingham, D. W., et al. Reactive oxygen species and human spermatozoa: analysis of the cellular mechanisms involved in luminol- and lucigenin-dependent chemiluminescence. J. Cell. Physiol. 151, 466-477 (1992).
  26. Allen, R. C., Loose, L. D. Phagocytic activation of a luminol-dependent chemiluminescence in rabbit alveolar and peritoneal macrophages. Biochem. Biophys. Res. Commun. 69, 245-252 (1976).
  27. Caldefie-Chezet, F., Walrand, S., et al. Is the neutrophil reactive oxygen species production measured by luminol and lucigenin chemiluminescence intra or extracellular? Comparison with DCFH-DA flow cytometry and cytochrome c reduction. Clin. Chim. Acta. 319, 9-17 (2002).
  28. Dahlgren, C., Aniansson, H., et al. Pattern of formylmethionyl-leucyl-phenylalanine-induced luminol- and lucigenin-dependent chemiluminescence in human neutrophils. Infect. Immun. 47, 326-328 (1985).
  29. Dahlgren, C., Karlsson, A. Respiratory burst in human neutrophils. J. Immunol. Methods. 232, 3-14 (1999).
  30. Aerts, C., Wallaert, B., et al. Release of superoxide anion by alveolar macrophages in pulmonary sarcoidosis. Ann. N.Y. Acad. Sci. 465, 193-200 (1986).
  31. Zhang, N., Francis, K. P., et al. Enhanced detection of myeloperoxidase activity in deep tissues through luminescent excitation of near-infrared nanoparticles. Nat Med. (2013).

Comments

1 Comment

  1. Hi there,

    I am Hussain from Germany and working on similar research topic. Please give me a chance to watch this video, at least for one time.
    Sincerely
    Hussain

    Reply
    Posted by: Hussain A.
    September 11, 2013 - 9:07 AM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics