एक सतत प्रवाह Microspotter का प्रयोग एक संशोधित सतह पर कोशिकाओं के जलमग्न मुद्रण

Bioengineering

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Davidoff, S. N., Miles, A. R., Romanov, V., Gale, B. K., Eckman, J. W., Brooks, B. D. The Submerged Printing of Cells onto a Modified Surface Using a Continuous Flow Microspotter. J. Vis. Exp. (86), e51273, doi:10.3791/51273 (2014).

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Abstract

Introduction

दवा उद्योग में हाल के अग्रिमों दवा स्क्रीनिंग और cytotoxicological विश्लेषण 1,2,3 के लिए दवा की खोज की प्रक्रिया में सेलुलर प्रोटीन का उपयोग करने में रुचि बढ़ी हुई है. सेल प्रोटीन का उपयोग इन विट्रो उच्च throughput assays और स्क्रीनिंग तरीकों का विकास तेजी से और लागत प्रभावी दवा उम्मीदवारों के विकास के साथ ही अग्रिम सेल 1,4 की बुनियादी समझ में सुविधा होगी. कोशिकाओं के साथ स्क्रीनिंग के लिए परंपरागत दृष्टिकोण पारंपरिक अच्छी तरह से थाली प्लेटफार्मों का उपयोग करता है; हालांकि इस दृष्टिकोण की वजह से उच्च लागत, सीमित throughput, और सेल समारोह 1,5 पर मात्रात्मक जानकारी के लिए सीमित क्षमता तक सीमित है. कारण इन सीमाओं के कारण, सेलुलर माइक्रोएरे प्रौद्योगिकियों में अनुसंधान आणविक जैविक लक्षण, ऊतक इंजीनियरिंग, और दवा स्क्रीनिंग 1,6 के लिए बढ़ती है. सेलुलर प्रोटीन के फायदे छोटे नमूने का उपयोग करें, कम से कम प्रभाव शामिलसेलुलर phenotype विविधता जानकारी मास्किंग, और अधिक उच्च throughput अनुप्रयोगों 1,7,8 के लिए assays स्वचालित करने के लिए सबसे महत्वपूर्ण बात यह क्षमता.

दवा उद्योग वर्तमान में microtiter अच्छी तरह प्लेटें 9 में दवा स्क्रीनिंग के लिए 2 डी सेल monolayer संस्कृतियों के साथ उच्च throughput सेल आधारित assays स्क्रीनिंग का इस्तेमाल करता. Microtiter प्लेट के कुओं में बहुसंकेतन कोशिकाओं अनूठा प्रयोग विकल्पों के साथ उच्च throughput के लिए क्षमता प्रदान करता है. इसके अलावा, सेलुलर प्रोटीन के लिए मौजूदा प्रौद्योगिकियों कोशिकाओं नाटकीय रूप से इन विवो 10,11 में से कोशिकाओं के phenotype बदल सकता है जो सूखे के लिए अनुमति देते हैं. इन समस्याओं को दूर करने के लिए, MFCA इंजीनियर था और चित्रा 1 में दिखाया गया है. MFCA 3D fluidics के डिजाइन एक स्नान में उतारा और एक मुहर के रूप में एक सतह के खिलाफ संकुचित करने की चित्र 1 में printhead टिप सक्षम बनाता है. printhead के नरम सिलिकॉन टिप एक तरह बर्ताव करती हैगैस्केट और एक प्रतिवर्ती मुहर रूपों. MFCA प्रौद्योगिकी विशिष्ट सेल संस्कृतियों और ऊतक टुकड़ा सिस्टम दोनों के लिए आवश्यक है जो जलमग्न सतहों, के साथ इंटरफेस के लिए अनुकूल है, और सबसे अन्य तरीकों के साथ मुश्किल या असंभव है. पिन या स्याही जेट मुद्रण काम नहीं करेगा, और 2 डी microfluidic उपकरणों बयान या असतत धब्बे की बड़ी arrays के साथ interfacing के लिए उपयुक्त नहीं हैं. इसके अलावा, प्रयोग miniaturizing और स्थानीयकृत द्वारा - सेलुलर माइक्रोएरे - MFCA उच्च throughput सेल आधारित assays स्क्रीनिंग के साथ जुड़े प्रमुख समस्याओं पर काबू.

CFM एक सतह 12,13 पर सूक्ष्म मौके स्थानों पर चक्र छोटी मात्रा में तरल पदार्थ के नमूने लिए 3 डी चैनल नेटवर्क का उपयोग करता है. प्रवाह के साथ मुद्रण द्वारा, biomolecules, कोशिकाओं, और अन्य अभिकर्मकों वर्तमान सेल मुद्रण तकनीक hinders हवा है, जो करने के लिए जोखिम के बिना संवेदनशील biomolecules और कोशिकाओं की छपाई सक्षम करने, मुद्रण प्रक्रिया के दौरान एक तरल वातावरण में रखा जाता है. यह सरणी सतह पर एक पर कब्जा व्यवस्था नहीं है ऐसे हाइब्रिडोमा या प्रदान की supernatants के रूप में कच्चे माल से सीधे मुद्रित करने के लिए भी संभव है. इस पांडुलिपि का उद्देश्य एक सतह पर विस्तार से दो प्रकार की कोशिकाओं के जलमग्न मुद्रण समझाने के लिए है.

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Protocol

1. संस्कृति की तैयारी सेल

  1. उपयोग के लिए तैयार है जब तक तरल नाइट्रोजन में NIH/3T3 सेल के शेयरों की दुकान.
  2. 50 माइक्रोग्राम / एमएल स्ट्रेप्टोमाइसिन 10% भ्रूण गोजातीय सीरम, 10 मिमी HEPES बफर, 50 इकाइयों / एमएल पेनिसिलिन, और साथ पूरक Dulbecco संशोधित ईगल मध्यम (DMEM) का उपयोग NIH/3T3 कोशिकाओं के लिए पूरी मीडिया को तैयार है.
  3. 37 डिग्री सेल्सियस पर एक मिलाते हुए पानी के स्नान में 2-3 मिनट के लिए कोशिकाओं पिघलना
  4. 3 मिनट के लिए 1500 XG पर पूरा मीडिया और अपकेंद्रित्र के 5 मिलीलीटर में Resuspend कोशिकाओं.
  5. सेल गोली परेशान बिना सेल सतह पर तैरनेवाला निकालें.
  6. मीडिया की 5 मिलीलीटर में कोशिकाओं Resuspend और एक hemocytometer का उपयोग कोशिकाओं गिनती.
    1. एक 0.5 एमएल microcentrifuge ट्यूब में सेल निलंबन और जगह के 10 μl निकालें.
    2. सेल निलंबन के Trypan ब्लू के 10 μl जोड़ें और पिपेट की नोक से हलचल.
    3. पिपेट एक hemocytometer चेंबर में दाग कोशिकाओं के 10 μl.
    4. 10x पर hemocytometer में कक्षों की गणनाबढ़ाई.
      1. 9 बड़े वर्ग के 4 के लिए जीवित कोशिकाओं (छोटे, सफेद गेंदों) गणना. केवल Trypan ब्लू दाग से गहरे नीले रंग की दिखाई नहीं देते कि जीवित कोशिकाओं गिनती.
      2. कोशिकाओं मूल कोशिकाओं निलंबन में 10 x 4 कोशिकाओं / एमएल की संख्या में जिसके परिणामस्वरूप बड़े वर्ग प्रति कोशिकाओं की औसत संख्या की गणना.
      3. 1 X10 प्रत्येक T25 फ्लास्क में 5 एमएल की कुल के साथ 5 कोशिकाओं / एमएल के एक घनत्व में बीज कोशिकाओं.
    5. शुरुआत प्रयोगों से पहले 70% और 80% confluency के बीच करने के लिए संस्कृति कोशिकाओं. जरूरत के रूप में हर 2-3 दिनों मीडिया ताज़ा करे या.

2. मुद्रण सतह तैयारी

  1. मार्क एक ऊतक संस्कृति इलाज polystyrene (TCTPS) 12 अच्छी तरह से थाली के तल पर मार्कर के साथ एक आयत प्रिंट सिर (x 19 मिमी 7 मिमी) का आकार.
  2. पिपेट 50 आयताकार क्षेत्र में भ्रूण गोजातीय सीरम के μl और टिप के साथ पूरे क्षेत्र में फैला.
  3. पेट्री डिश छोड़ दोएक बाँझ जैव सुरक्षा हुड हे / एन में सीरम स्थान पूरी तरह से सूखे के लिए अनुमति देने के लिए. इन प्लेटों का उपयोग करने के लिए अधिक नहीं 2 दिन पहले तैयार किया जाना चाहिए.

3. जलमग्न मुद्रण

  1. आसुत जल से प्रिंट सिर बाहर कुल्ला.
    1. आसुत जल के साथ एक 60 मिमी पेट्री डिश भरें और सतह पर प्रिंट सिर गोदी.
    2. एक साँस पंप का उपयोग कर 150 μl / मिनट पर 2 मिनट के लिए लाइनों में से प्रत्येक के माध्यम से आसुत जल प्रवाह.
    3. पेट्री डिश से पानी त्यागें और साफ पानी से भरना.
    4. पानी में ऊपर और नीचे 3 बार प्रिंट सिर ले जाएँ.
  2. पूर्व तैयार 12 अच्छी तरह से थाली में सीरम में लिपटे मौके पर प्रिंट सिर केन्द्र डालें.
  3. प्रधानमंत्री पूर्व गर्म पूरा मीडिया, चैनल के अनुसार 300 μl के साथ प्रिंट सिर.
  4. प्रिंट एक सतह पर 50,000 कोशिकाओं / एमएल की एकाग्रता और 60 μl / मिनट, चैनल के अनुसार 100 μl में कोशिकाओं को निलंबित कर दिया.
  5. के खिलाफ डॉक छोड़ दिया प्रिंट सिर, प्लेससतह, और एक सेल कल्चर इनक्यूबेटर में कई गुना 2 घंटे के लिए 5% सीओ 2 और 37 डिग्री सेल्सियस के लिए निर्धारित किया है.
  6. 2 घंटा ऊष्मायन के बाद, प्रिंट सिर को हटाने और संस्कृति डिश पर ढक्कन जगह. प्रिंट सिर हटा दिया है, जिस पर समय 0 घंटा समय बिंदु माना जाता है.

4. मानक सेल संस्कृति

  1. चरण 2 में तैयार सीरम देखा TCTPS 12 अच्छी तरह से थाली में से एक के लिए पूर्व गर्म मीडिया के 1 मिलीलीटर जोड़ें.
  2. 12 अच्छी तरह से TCTPS प्लेट की एक भी कुएं में चरण 2 और पिपेट से शेष सेल निलंबन के 1 मिलीलीटर ले लो. इस डिश में 50,000 कोशिकाओं से युक्त एक संस्कृति का उत्पादन होगा.
  3. 2 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर एक मशीन में सेल संस्कृति प्लेट रखें.
  4. 2 घंटा ऊष्मायन समय आरंभ होने के बाद; मुद्रित और बोने के नमूनों के बीच स्थिरता के लिए, इस 0 घंटा समय बिंदु माना जाता है.

5. संस्कृति विज़ुअलाइज़ेशन

  1. 0, 2, 24, और दो तरीकों में से प्रत्येक से 48 घंटा ले कोशिकाओं डी के बादएक मानक उलटा माइक्रोस्कोप का उपयोग ऊपर और छवि escribed.
    1. Propidium आयोडाइड, केवल मृत कोशिकाओं के नाभिक में शामिल किया है कि एक लाल फ्लोरोसेंट दाग का उपयोग कोशिकाओं दाग.
      1. धीरे कैल्शियम और किसी भी मलबे को हटाने के लिए मैग्नीशियम (पीबीएस + +) के साथ फॉस्फेट बफर खारा के 1 मिलीलीटर के साथ कोशिकाओं 3 बार कुल्ला.
      2. प्रत्येक संस्कृति पोत के लिए पूर्व गर्म पीबीएस + + के 1 मिलीलीटर जोड़ें.
      3. प्रत्येक संस्कृति पोत को propidium आयोडाइड शेयर समाधान (1 मिलीग्राम / एमएल) की 1 μl जोड़ें.
      4. 10 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर propidium आयोडाइड के साथ दाग कोशिकाओं को सेते हैं.
    2. छवि एक औंधा 10x पर माइक्रोस्कोप और 40x बढ़ाई का उपयोग कोशिकाओं.
  2. एक उपयुक्त biohazard कंटेनर में कोशिकाओं त्यागें.

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Representative Results

fibroblast सेल लाइन NIH/3T3 कोशिकाओं एक जलमग्न सतह पर मुद्रित या वरीयता प्राप्त थे. कोशिकाओं मिलीलीटर प्रति 5 x 10 4 कोशिकाओं के घनत्व को बड़े हो रहे थे. कोशिकाओं पारंपरिक सेल कल्चर तकनीक का उपयोग कर वरीयता प्राप्त थे. कोशिकाओं के एक बड़े प्रारूप, चैनल प्रोटीन और अन्य biomolecules के लिए इस्तेमाल किया CFM से (~ 500 माइक्रोन) बड़े होते हैं जहां बारह प्रवाह सेल printhead का उपयोग कर मुद्रित किया गया. कोशिकाओं को एक सीरम लेपित सतह पर मुद्रित या वरीयता प्राप्त थे. मुद्रण प्रक्रिया चित्र 1 में दिखाया गया है.

मुद्रण और बोने के बाद, कोशिकाओं प्रासंगिक समय अंक (0, 2, 24, और 48 घंटे) में घनत्व और आकारिकी का आकलन करने के लिए कल्पना थे. इन बिंदुओं पर समय सेल घनत्व और कोशिकाओं की आकारिकी 10X और microscopically 40X आवर्धन का उपयोग कर मूल्यांकन किया गया था. छवियों कोशिकाओं हर समय बिंदु पर है और प्रत्येक बढ़ाई चित्रा 2 में लगभग समान phenotypes के अधिकारी बताते हैं कि. इन आंकड़ों के प्रभाव पर आधारितमुद्रण न्यूनतम होना निर्धारित किया गया था.

सेल व्यवहार्यता एक गड़बड़ी दाग ​​का उपयोग कर मूल्यांकन किया गया था. 3 चित्र में दिखाया गया है, मुद्रित सेल के लिए सेल व्यवहार्यता हर समय बिंदु के लिए वरीयता प्राप्त कोशिकाओं की तुलना में काफी अलग नहीं था. सतह के लिए कोशिकाओं को संलग्न करने के दो तरीके के बीच मुख्य अंतर यह मुद्रित कोशिकाओं के घनत्व है. सेल घनत्व वरीयता प्राप्त और मुद्रित कोशिकाओं दोनों में 50% से अधिक 2 घंटा समय बिंदु पर कम हो जाती है. आगे के अध्ययन से इस कमी का कारण निर्धारित करने के लिए warranted है; बहरहाल, कुल मिलाकर मुद्रित घनत्व अनुपात वरीयता प्राप्त जब की तुलना में काफी अधिक रहता है. flowcell में मुद्रित सेल घनत्व पर कोशिकाओं बोने के रूप में ही घनत्व में छपी थी वरीयता प्राप्त कोशिकाओं के रूप में हर समय बिंदु पर लगभग दस बार के रूप में घना था, लेकिन एक छोटे क्षेत्र (एक प्रवाह सेल के लिए 0.6 सेमी 2 क्षेत्र, 3.8 सेमी 2 में 24 अच्छी तरह से थाली के एक कुएँ के लिए). अंतिम समय बिंदु पर कोशिकाओं डब्ल्यू उसी घनत्व पर हैंhich कारण सेल गतिशीलता और संसाधन की खपत सीमाओं की संभावना है.

चित्रा 1
CFM की चित्रा 1. (ए) चित्र. (बी) के एक प्रवाह सेल के योजनाबद्ध. (सी) व्यक्तिगत flowcells दिखा printhead के SEM छवि. (डी) टिशू कल्चर संगत सतह के लिए printhead नाव. जहां जलमग्न मुद्रण के योजनाबद्ध क्लिक करें यहाँ यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए.

चित्रा 2
मुद्रित कोशिकाओं की तुलना में वरीयता प्राप्त की आकारिकी की तुलना चित्रा 2. छवियाँ. (ए) 3T3 कोशिकाओं मेंmicrofluidically बीएसए पर मुद्रित और 0, 2, 24, और 48 घंटे में मूल्यांकन किया गया. (बी) में 3T3 कोशिकाओं वरीयता प्राप्त बजाय मुद्रित किया गया. सेल आकारिकी समान नहीं यदि इसी तरह की है. इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें.

चित्रा 3
0, 2, 24, और 48 घंटा सहित विभिन्न बिंदुओं पर समय सेल मुद्रण और सेल बोने के बीच सेल घनत्व और व्यवहार्यता का आंकड़ा 3. तुलना करें. (ए) में 2 मिमी प्रति कोशिकाओं में कोशिका घनत्व मूल्यांकन किया गया था. (बी) कोशिकाओं की व्यवहार्यता निर्धारित की गयी थी. इस figu का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करेंफिर से.

चित्रा 4
चित्रा 4. NIH/3T3 कोशिकाओं के माध्यम से बह गया, जिसमें सेल माइक्रोएरे सतत प्रवाह microspotter के चार प्रवाह कोशिकाओं की 10x बढ़ाई छवि. इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें.

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Discussion

यहाँ वर्णित 3D microfluidic मुद्रण प्रौद्योगिकी, अच्छी तरह से भरा एक तरल में कोशिकाओं की microfluidically मुद्रण सरणियों विशिष्ट सक्षम है एक जलमग्न सतह अर्थात्. जलमग्न सतहों पर मुद्रण द्वारा, सेल प्रोटीन कोशिकाओं की physiologically प्रासंगिक सेलुलर phenotype के साथ ही एक ही अच्छी तरह से 4 चित्र के नीचे में कोशिकाओं मल्टीप्लेक्स करने की क्षमता बनाए रखने के लिए है कि उत्पादन किया जा सकता है. Microfluidically में कोशिकाओं के परिणाम की छपाई कि इस अध्ययन दिखाने का परिणाम तुलनीय सेल आकारिकी और व्यवहार्यता के साथ सेल लगाव; हालांकि, मुद्रित कोशिकाओं को और अधिक घनी कम समग्र अध्ययन के समय में जिसके परिणामस्वरूप एक निर्धारित स्थान में संलग्न किया जा सकता है. छोटा अध्ययन टाइम्स 14 स्क्रीनिंग उच्च throughput दवा के लिए महत्वपूर्ण लागत बचत में परिणाम सकता है.

Microfluidics पहले से सेलुलर प्रोटीन और उच्च throughput दवा स्क्रीनिंग के लिए इस्तेमाल किया गया है. अध्ययन के दर्जनों प्रवाह assays के आधार पर कैसे विस्तृत हैस्थिर प्रवाह मुद्दों को खत्म; 19 - दुर्भाग्य से, इन अध्ययनों घनत्व, बहुसंकेतन, और अत्यधिक समानांतर विश्लेषण 15 के लिए माइक्रोस्कोप एकीकरण सीमा है, जो 2 डी microfluidics (2 डी और 3 डी ऊतक संस्कृतियों के साथ भ्रमित होने की नहीं), का उपयोग करें. डिजिटल microfluidics और छोटी बूंद आधारित microfluidics अनुप्रयोगों के इन प्रकार के लिए प्रस्तावित किया गया है और अत्यधिक समानांतर, मल्टिप्लेक्स विन्यास 15,17,18 में काम कर सकते हैं, लेकिन वे एक या छोटे सेल समूहों तक सीमित है और सभी खो रहे हैं 3 डी, बहु - नमूना तैयार करने के दौरान सेल प्रकार के ऊतक संरचना. उच्च throughput फ्लो तेजी से सेल स्क्रीनिंग के लिए उपयोग किया गया है; हालांकि, cytometry, vivo में, बाह्य मैट्रिक्स 20 को सीमित कर रहे हैं कि पक्षपाती सेल लाइनों स्क्रीनिंग के लिए आदर्श नहीं है, जो निलंबन में रहने के लिए कोशिकाओं की आवश्यकता प्रवाह. सह संस्कृतियों भी सच ऊतक प्रतिनिधित्व 19 की कमी से पीड़ित हैं. इसके विपरीत, 3 डी MFCA प्रौद्योगिकी पूरी तरह से स्वचालित डे सक्षम बनाता हैbiomolecules और एक घनी पैक सरणी में सेल धब्बे या बरकरार ऊतक स्लाइस को अभिकर्मक के वितरण की स्थिति. प्रस्तावित प्रणाली सरणियों उत्पन्न करने में सक्षम हो जाएगा न केवल, लेकिन इन सरणियों पर कतरनी तनाव, विभिन्न यौगिकों के वितरण, और विकास की स्थिति के अध्ययन के लिए अनुमति देता है और अधिक भविष्य कहनेवाला में इन विट्रो दवा को बढ़ावा मिलेगा कि एक "बह" वातावरण में ऐसा करना होगा उपकरण स्क्रीनिंग. आवेदनों की एक किस्म नवाचार अनिश्चित काल तक जारी करने के लिए अनुमति की कल्पना की जा सकती है. इस तरह के एक उपकरण के इस तरह के कैंसर, मधुमेह, सूजन, संक्रमण, और हृदय रोग के रूप में महत्वपूर्ण अनुसंधान क्षेत्रों की एक भीड़ में उपन्यास सेलुलर दवाओं की खोज और cytotoxicological assays के लिए सक्षम बनाता है.

MFCA एक जलमग्न सतह के लिए कोशिकाओं को वितरित करने के लिए पसंदीदा तरीका है, चुनौती है, खासकर गैर पक्षपाती सेल लाइनों के लिए, सतह के लिए सेल संलग्न करने के लिए बनी हुई है. इस तकनीक के लिए भविष्य दिशाओं के लिए सेल लगाव के लिए तरीकों पर ध्यान दिया जाएगासतह. कृत्रिम सतहों पर सेल patterning के लिए तकनीक वर्तमान में मौजूद हैं और शामिल हैं: inkjet मुद्रण, microextrusion या रेशा की साजिश रचने, डीएनए संकरण, और लेजर आगे स्थानांतरण 21. इन तकनीकों में से, डीएनए संकरण प्रौद्योगिकी का उपयोग कोशिकाओं की कुर्की कई अनूठी और महत्वपूर्ण सुविधाओं के पास. सबसे पहले, सेल लगाव की विधि तो दोनों पक्षपाती और nonadherent कोशिकाओं को इस विधि से 22 नमूनों का उपयोग किया जा रहा करने में सक्षम हैं व्यक्ति की कोशिकाओं का साया रिसेप्टर्स पर निर्भर नहीं है. अगला, डीएनए सेलुलर patterning विधि एकाधिक सतह वाली डीएनए दृश्यों 23 के उपयोग के माध्यम से कई प्रकार की कोशिकाओं जिसमें जटिल सेलुलर सरणियों की पीढ़ी के लिए अनुमति देता है. भविष्य अनुप्रयोगों या दिशाओं सेल लगाव 19,24 के लिए डीएनए संकरण प्रौद्योगिकी के प्रयोग पर ध्यान दिया जाएगा

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Disclosures

लेखकों अभिकर्मकों और / या इस पांडुलिपि में प्रयुक्त उपकरणों का उत्पादन है कि Wasatch के microfluidics कर्मचारी और शेयरधारकों हैं.

Acknowledgments

लेखकों तकनीकी सहायता के लिए क्रिस मोरो स्वीकार करना चाहते हैं. अनुदान NIH एसबीआईआर (R43) द्वारा प्रदान किया गया 1R43GM101859-01 (MPI) GRANT10940803 अनुदान.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Continuous flow microspotter Wasatch Microfluidics
NIH/3T3 cells ATCC CRL-1658
Dubbleco's Modified Eagle Medium Invitrogen 11965-092 Base media for cells
HEPES buffer Invitrogen 15630-080 Cell media additive (control pH)
Sodium pyruvate Invitrogen 11360-070 Cell media additive
Penicillin-streptomycin  Invitrogen Cell media additive
Trypan blue Invitrogen 15250-061 Stain cell sfor counting
Hemocytometer Fisher 267110 Cell chamber to count cells
Nikon Eclipse TS100 Nikon Used to check on cells
Nikon Eclipse TE2000-U Nikon Used for collecting images
Phosphate buffered saline (with calcium and magnesium) Invitrogen 14040-133 Rinsing cells before passaging and before staining with PI
TrypLE Express  Invitrogen A12177-01 Used to remove cells from surface

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References

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