الطباعة المغمورة من خلايا على سطح معدلة باستخدام التدفق المستمر Microspotter

Bioengineering

Your institution must subscribe to JoVE's Bioengineering section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations | Reprints and Permissions

Davidoff, S. N., Miles, A. R., Romanov, V., Gale, B. K., Eckman, J. W., Brooks, B. D. The Submerged Printing of Cells onto a Modified Surface Using a Continuous Flow Microspotter. J. Vis. Exp. (86), e51273, doi:10.3791/51273 (2014).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Introduction

وقد أدت التطورات الحديثة في مجال الصناعات الدوائية لزيادة الاهتمام باستخدام ميكروأرس الخلوية في عملية اكتشاف العقاقير لفحص المخدرات وتحليل cytotoxicological 1،2،3. ان تطوير في المختبر فحوصات عالية الإنتاجية وأساليب الفحص باستخدام ميكروأرس خلية تسهيل التنمية السريعة والفعالة من حيث التكلفة من المرشحين المخدرات فضلا عن تعزيز فهم الأساسية للخلية 1،4. النهج التقليدي لفحص مع الخلايا التقليدية يستخدم منصات جيدا لوحة؛ ولكن هذا النهج محدودة بسبب التكلفة العالية، الإنتاجية محدودة، وقدرة محدودة للحصول على معلومات كمية عن وظيفة الخلية 1،5. بسبب هذه القيود، والبحوث في مجال تكنولوجيات ميكروأري الخلوية المتزايد على التوصيف الجزيئي البيولوجي، هندسة الأنسجة، والفحص 1،6 المخدرات. وتشمل مزايا ميكروأرس الخلوية أصغر استخدام عينة، وآثار ضئيلة منالنمط الظاهري الخلوية التجانس اخفاء المعلومات، والأهم من ذلك القدرة على أتمتة المقايسات لمزيد من التطبيقات الإنتاجية العالية 1،7،8.

يستخدم حاليا صناعة الأدوية عالية الإنتاجية المستندة إلى الخلايا فحوصات الفرز مع 2D الثقافات أحادي الطبقة خلية لفحص المخدرات في لوحات عيار مكروي جيدا 9. الخلايا المتنوعة في آبار وحات microtiter يوفر إمكانية إنتاجية أعلى مع خيارات التجريب فريدة من نوعها. علاوة على ذلك، التقنيات الحالية لميكروأرس الخلوية تسمح للخلايا لتجف الذي يمكن أن يغير بشكل كبير من النمط الظاهري للخلايا في الجسم الحي من 10،11. من أجل التغلب على هذه المشاكل، تم هندستها لMFCA ويظهر في الشكل 1. تصميم FLUIDICS MFCA 3D تمكن غيض رأس الطباعة في الشكل 1 أن يكون خفضت في حمام وضغطها على سطح على شكل خاتم. غيض السيليكون لينة من رأس الطباعة يتصرف مثلوتشكل طوقا ختم عكسها. هي مناسبة التكنولوجيا MFCA فريد على التفاعل مع الأسطح المغمورة، وهو مطلوب لكلا مزارع الخلايا والأنسجة أنظمة شريحة، ومن الصعب أو المستحيل مع معظم المناهج الأخرى. سوف دبابيس أو الطباعة بالحبر النفاث لا تعمل، وعدم تناسب الأجهزة ميكروفلويديك 2D لترسب أو التواصل مع صفائف كبيرة من بقع منفصلة. علاوة على ذلك، عن طريق التصغير وإضفاء الطابع المحلي على التجربة - ميكروأري الخلوية - وMFCA يتغلب على المشاكل الرئيسية المرتبطة عالية الإنتاجية المستندة إلى الخلايا فحوصات الفرز.

يستخدم CFM شبكات قناة 3D لدورة صغيرة عينات السائل حجم البقعة على مواقع المجهرية على سطح 12،13. عن طريق طباعة مع التدفق، ويتم الاحتفاظ الجزيئات الحيوية، والخلايا، والكواشف الأخرى في البيئة السائلة في جميع مراحل عملية الطباعة، وتمكن من الطباعة من الجزيئات الحيوية الحساسة والخلايا دون التعرض للهواء، مما يعوق تقنيات الطباعة الخلية الحالية. ومن الممكن أيضا لطباعة مباشرة من المواد الخام مثل هجين أو supernatants المقدمة هناك آلية القبض على السطح مجموعة. الهدف من هذا المخطوط هو شرح بالتفصيل الطباعة المغمور من أنواع الخلايا اثنين على سطح.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. الخلية تحضير الثقافة

  1. تخزين مخزون الخلية NIH/3T3 في النيتروجين السائل حتى جاهزة للاستخدام.
  2. إعداد وسائل الإعلام كاملة للخلايا باستخدام NIH/3T3 Dulbecco لتعديل النسر متوسطة (DMEM) تستكمل مع 10٪ مصل بقري جنيني، 10 ملي HEPES العازلة، 50 وحدة / مل البنسلين، و 50 ميكروغرام / مل الستربتوميسين.
  3. ذوبان الجليد الخلايا لمدة 2-3 دقيقة في حمام مائي تهتز عند 37 درجة مئوية.
  4. خلايا resuspend في 5 مل من وسائل الإعلام كاملة وأجهزة الطرد المركزي في 1500 x ج لمدة 3 دقائق.
  5. إزالة طاف الخلية دون الإخلال بيليه الخلية.
  6. resuspend الخلايا في 5 مل من وسائل الإعلام وعدد الخلايا باستخدام عدادة الكريات.
    1. إزالة 10 ميكرولتر من تعليق خلية ووضعه في أنبوب microcentrifuge 0.5 مل.
    2. إضافة 10 ميكرولتر من التريبان الأزرق لتعليق الخلية ويحرك مع غيض من ماصة.
    3. ماصة 10 ميكرولتر من الخلايا الملون في غرفة عدادة الكريات.
    4. عد الخلايا في عدادة الكريات في 10Xالتكبير.
      1. عد الخلايا الحية (وكرات بيضاء صغيرة) لمدة 4 من 9 مربعات كبيرة. الاعتماد فقط على الخلايا الحية التي لا تظهر زرقاء داكنة من وصمة عار التريبان الأزرق.
      2. حساب متوسط ​​عدد الخلايا في مربع كبير، مما أدى إلى عدد من الخلايا × 10 4 خلية / مل في خلايا التعليق الأصلي.
      3. خلايا البذور في مناطق ذات كثافة من 1 X10 5 خلية / مل مع ما مجموعه 5 مل في كل قارورة T25.
    5. خلايا الثقافة إلى ما بين 70٪ و 80٪ confluency قبل بداية التجارب. تحديث وسائل الاعلام كل 2-3 أيام أو حسب الحاجة.

2. الطباعة تحضير السطح

  1. علامة مستطيل مع علامة على الجزء السفلي من على بعد المعالجة زراعة الأنسجة البوليسترين (TCTPS) 12 لوحة جيدا حجم رأس الطباعة (7 ملم × 19 ملم).
  2. ماصة 50 ميكرولتر من مصل بقري جنيني في منطقة مستطيلة وانتشاره على كامل المنطقة مع طرف.
  3. يترك طبق بيتريفي العقيمة السلامة الأحيائية هود O / N للسماح للبقعة الدم لتجف تماما. وينبغي إعداد هذه اللوحات لا يزيد عن 2 أيام قبل الاستخدام.

3. الطباعة الغارقة

  1. شطف رأس الطباعة بالماء المقطر.
    1. ملء 60 مم طبق بيتري مع الماء المقطر وإرساء رأس الطباعة على السطح.
    2. تدفق الماء المقطر من خلال كل من خطوط لمدة 2 دقيقة في 150 ميكرولتر / دقيقة باستخدام مضخة تعمل بالهواء المضغوط.
    3. تجاهل المياه من طبق بيتري وملئه بالماء النظيف.
    4. تحريك رأس الطباعة صعودا وهبوطا في الماء 3 مرات.
  2. إرساء مركز رأس الطباعة على الفور المغلفة المصل في معدة سلفا 12 لوحة جيدا.
  3. رئيس رأس الطباعة مع وسائل الإعلام كاملة قبل تحسنت، 300 ميكرولتر لكل قناة.
  4. طباعة الخلايا علقت في تركيز 50،000 خلية / مل على سطح و 60 ميكرولتر / دقيقة، و 100 ميكرولتر لكل قناة.
  5. وضع رأس الطباعة، غادر رست ضدالسطح، ومتعددة في حاضنة الثقافة خلية لتعيين 5٪ CO 2 و 37 درجة مئوية لمدة 2 ساعة.
  6. بعد حضانة 2 ساعة، وإزالة رأس الطباعة ووضع غطاء على طبق الثقافة. ويعتبر الوقت الذي رأس الطباعة إزالة نقطة زمنية 0 ساعة.

4. الثقافة الخلية القياسية

  1. إضافة 1 مل من وسائل الاعلام قبل تحسنت إلى واحد من لوحة TCTPS 12 جيدا المصل رصدت أعدت في الخطوة 2.
  2. تأخذ 1 مل من تعليق خلية المتبقية من الخطوة 2 وماصة في بئر واحدة من 12 لوحة جيدا TCTPS. هذا وسوف تنتج الثقافة التي تحتوي على 50،000 الخلايا في الطبق.
  3. وضع لوحة الثقافة خلية في حاضنة عند 37 درجة مئوية لمدة 2 ساعة.
  4. بعد حضانة 2 ساعة توقيت البدء؛ من أجل التناسق بين العينات المطبوعة والبذر، ويعتبر هذا نقطة الوقت 0 ساعة.

5. التصور الثقافة

  1. بعد 0، 2، 24، و 48 ساعة من الخلايا تأخذ كل واحدة من طريقتين دescribed أعلاه والصورة باستخدام مجهر مقلوب القياسية.
    1. وصمة عار على الخلايا باستخدام يوديد propidium، وصمة عار أحمر فلوري أن يتم تضمينها فقط في نواة الخلايا الميتة.
      1. شطف بلطف الخلايا 3 مرات مع 1 مل من الفوسفات مخزنة المالحة مع الكالسيوم والمغنيسيوم (PBS + +) لإزالة أي حطام.
      2. إضافة 1 مل من برنامج تلفزيوني قبل تحسنت + + إلى كل سفينة الثقافة.
      3. إضافة 1 ميكرولتر من محلول يوديد propidium الأسهم (1 ملغ / مل) لكل سفينة الثقافة.
      4. احتضان الخلايا ملطخة يوديد propidium عند 37 درجة مئوية لمدة 10 دقيقة.
    2. صورة الخلايا باستخدام مجهر مقلوب في 10X 40X والتكبير.
  2. تجاهل الخلايا في وعاء واقية مناسبة.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

طبعت الخلايا NIH/3T3 خط الخلية الليفية أو المصنفة على سطح المغمورة. وقد نمت الخلايا إلى كثافة 5 X 10 4 خلية لكل مل. وكانت المصنفة الخلايا باستخدام تقنيات زراعة الخلايا التقليدية. طبعت الخلايا باستخدام-شكل كبير، واثني عشر تدفق رأس الطباعة الخلية حيث القنوات هي أكبر (~ 500 ميكرون) من CFM المستخدمة للبروتينات والجزيئات الحيوية الأخرى. طبعت الخلايا أو المصنفة على سطح المصل المغلفة. يظهر عملية الطباعة في الشكل 1.

بعد الطباعة والبذر، وتصور الخلايا لتقييم كثافة والتشكل في النقاط ذات الصلة الوقت (0، 2، 24، و 48 ساعة). وجرى تقييم كثافة الخلية ومورفولوجيا الخلايا في هذه النقاط الوقت باستخدام 10X 40X وتكبير المجهر. وتظهر الصور التي تمتلك خلايا الظواهر متطابقة تقريبا في كل نقطة زمنية والتكبير في كل الشكل 2. وبناء على هذه الأرقام، وتأثيرتقرر أن يكون الحد الأدنى الطباعة.

تم تقييم بقاء الخلية باستخدام صمة عار PI. كما هو مبين في الشكل (3)، وكان بقاء الخلية للخلية المطبوعة لا تختلف كثيرا من الخلايا المصنفة لكل نقطة زمنية. الفرق الرئيسي بين الطريقتين من ربط الخلايا إلى السطح هو كثافة الخلايا المطبوعة. يقلل كثافة الخلية عند نقطة زمنية ساعة 2 بنسبة تزيد على 50٪ في كل من الخلايا المصنفة وطباعتها. هناك ما يبرر إجراء مزيد من الدراسة لتحديد سبب هذا الانخفاض؛ ومع ذلك، ونسب الكثافة المطبوعة عموما بالمقارنة مع المصنف لا يزال أعلى بكثير. كانت كثافة الخلية المطبوعة في flowcell ما يقرب من عشر مرات كثيفة كما في كل نقطة زمنية مثل خلايا المصنف طبعت خلايا النظر في نفس الكثافة كما البذر، ولكن في منطقة صغيرة (0.6 سم 2 منطقة لخلية تدفق، 3.8 سم 2 لبئر من لوحة 24 أيضا). في نقطة زمنية النهائي الخلايا هي في نفس الكثافة ثومن المرجح نظرا للقيود استهلاك حركية الخلية والموارد hich.

الشكل 1
الشكل 1 (أ) صورة من CFM. (B) تخطيطي للخلية التدفق. (C) صورة ووزارة شؤون المرأة من رأس الطباعة تظهر flowcells الفردية. (D) تخطيطي للطباعة المغمورة حيث الاحواض رأس الطباعة لسطح متوافق زراعة الأنسجة. الرجاء النقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.

الرقم 2
الشكل 2. صور مقارنة مورفولوجية المصنفة مقابل الخلايا المطبوعة. في (أ) 3T3 الخلاياوطبعت على microfluidically BSA وتقييمها في 0، 2، 24، و 48 ساعة. في (B) وكانت المصنفة 3T3 الخلايا بدلا من المطبوعة. مورفولوجيا الخلايا مشابه إن لم تكن متطابقة. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.

الرقم 3
الشكل 3 مقارنة بين كثافة الخلايا وقدرتها على البقاء بين الطباعة الخلية والخلية البذر في نقاط مختلفة بما في ذلك الوقت 0، 2، 24، و 48 ساعة. وفي (A) وجرى تقييم كثافة الخلية في الخلايا لكل مم 2. في (B) تم تحديد الجدوى من الخلايا. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا فيقوإعادة.

الرقم 4
الشكل 4. صورة 10X التكبير من أربع خلايا تدفق ميكروأري الخلية مستمرة في التدفق microspotter التي تدفقت من خلال خلايا NIH/3T3. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

تكنولوجيا الطباعة 3D ميكروفلويديك الموصوفة هنا هو قادر فريد من صفائف الطباعة microfluidically من الخلايا في السائل شغلها جيدا، أي سطح المغمورة. عن طريق طباعة على الأسطح المغمورة، ميكروأرس الخلية يمكن أن تنتج التي تحافظ على النمط الظاهري الخلوية ذات الصلة من الناحية الفسيولوجية للخلايا وكذلك القدرة على معدد الخلايا في الجزء السفلي من بئر واحدة الشكل 4. نتائج هذه الدراسة تظهر أن microfluidically طباعة النتائج في الخلايا مرفق الخلية مع خلية التشكل للمقارنة والجدوى؛ ومع ذلك، فإن الخلايا المطبوعة يمكن تركيبها أكثر كثافة في موقع محدد مما أدى إلى أقصر الأوقات الدراسة الشاملة. أوقات الدراسة أقصر يمكن أن يؤدي إلى وفورات كبيرة للإنتاجية عالية المخدرات فحص 14 التكلفة.

قد سبق استخدامها على microfluidics لميكروأرس الخلوية والإنتاجية العالية فحص المخدرات. وقد مفصل عشرات الدراسات كيف تدفق المقايسات مقرهاالقضاء على مشاكل تدفق ثابت؛ للأسف، هذه الدراسات على microfluidics استخدام 2D (وينبغي عدم الخلط بينه وبين 2D و 3D مزارع الأنسجة)، مما يحد من الكثافة، مضاعفة، والتكامل المجهر للتحليلات موازية غاية 15-19. وقد اقترحت على microfluidics الرقمية وعلى microfluidics القائم على الحبرية لهذه الأنواع من التطبيقات ويمكن أن تعمل في درجة عالية من موازية، تكوينات المضاعفة 15،17،18، لكنها تقتصر على مجموعات صغيرة أو خلية واحدة وتخسر ​​كل 3-D، متعددة نوع من الخلايا بنية الأنسجة أثناء إعداد العينات. وقد استخدمت عالية الإنتاجية التدفق الخلوي لفحص الخلايا السريع؛ ومع ذلك، يتطلب تدفق الخلوي الخلايا على البقاء في التعليق، وهي ليست مثالية لفحص خطوط الخلايا الملتصقة ذلك، في الجسم الحي، والمربوطة إلى المصفوفة خارج الخلية 20. تعاني الثقافات المشارك أيضا من عدم وجود تمثيل حقيقي الأنسجة 19. في المقابل، فإن تقنية 3D MFCA تمكن مؤتمتة بالكامل ديموقف الجزيئات الحيوية وتسليم كاشف للبقع الخلية أو شرائح الأنسجة سليمة في مجموعة والمزدحمة بالسكان. ان النظام المقترح لا تكون فقط قادرة على توليد المصفوفات، ولكن القيام بذلك في "تدفق" بيئة تسمح للدراسات اجهادات القص، والتسليم من مركبات مختلفة، وظروف النمو على هذه المصفوفات وسوف يؤدي إلى مزيد من التنبؤية المخدرات في المختبر أدوات الفرز. مجموعة متنوعة من التطبيقات يمكن تصور السماح لمواصلة الابتكار لأجل غير مسمى. هذه الأداة تمكن رواية الخلوية اكتشاف المخدرات والمقايسات cytotoxicological في العديد من المجالات البحثية الهامة مثل السرطان والسكري والالتهابات، والالتهابات، وأمراض القلب والأوعية الدموية.

في حين أن MFCA هو الأسلوب المفضل لتقديم خلايا على سطح المغمورة، يظل التحدي إرفاق الخلية إلى السطح، وخاصة بالنسبة للخطوط الخلايا غير ملتصقة. والتوجهات المستقبلية لهذه التكنولوجيا التركيز على أساليب لمرفق الخلية لالسطح. تقنيات الزخرفة على الأسطح الخلية الاصطناعية الموجودة حاليا وتشمل: الطباعة النافثة للحبر، microextrusion أو خيوط التآمر، تهجين الحمض النووي، والليزر قدما نقل 21. من هذه التقنيات، المرفق من الخلايا باستخدام تقنية تهجين الحمض النووي تمتلك العديد من المزايا الفريدة والهامة. أولا، طريقة مرفق الخلية لا تعتمد على مستقبلات الخلايا الفردية التي يمتلكها لذلك كل الخلايا الملتصقة وغير ملتصق هي قادرة على أن نمط استخدام هذه الطريقة 22. المقبل، بما يسمح للDNA طريقة الزخرفة الخلوية لتوليد المصفوفات الخلوية المعقدة التي تضم العديد من أنواع الخلايا من خلال استخدام متعددة تسلسل الحمض النووي محددة السطح 23. سوف التطبيقات أو الاتجاهات المستقبلية التركيز على استخدام تقنية تهجين الحمض النووي لمرفق الخلية 19،24

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

المؤلفين والموظفين والمساهمين وستش الموائع الدقيقة التي تنتج الكواشف و / أو الأدوات المستخدمة في هذه المخطوطة.

Acknowledgments

فإن الكتاب أود أن أنوه كريس مورو للحصول على المساعدة الفنية. تم توفير التمويل من قبل المعاهد الوطنية للصحة SBIR (R43) منح 1R43GM101859-01 (MPI) GRANT10940803.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Continuous flow microspotter Wasatch Microfluidics
NIH/3T3 cells ATCC CRL-1658
Dubbleco's Modified Eagle Medium Invitrogen 11965-092 Base media for cells
HEPES buffer Invitrogen 15630-080 Cell media additive (control pH)
Sodium pyruvate Invitrogen 11360-070 Cell media additive
Penicillin-streptomycin  Invitrogen Cell media additive
Trypan blue Invitrogen 15250-061 Stain cell sfor counting
Hemocytometer Fisher 267110 Cell chamber to count cells
Nikon Eclipse TS100 Nikon Used to check on cells
Nikon Eclipse TE2000-U Nikon Used for collecting images
Phosphate buffered saline (with calcium and magnesium) Invitrogen 14040-133 Rinsing cells before passaging and before staining with PI
TrypLE Express  Invitrogen A12177-01 Used to remove cells from surface

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Fernandes, T. G., Diogo, M. M., Clark, D. S., Dordick, J. S., Cabral, J. High-throughput cellular microarray platforms: applications in drug discovery, toxicology and stem cell research. Trends in Biotechnology. 27, 342-349 (2009).
  2. Michelini, E., Cevenini, L., Mezzanotte, L., Coppa, A., Roda, A. Cell-based assays: fuelling drug discovery. Anal Bioanal Chem. 398, 227-238 (2010).
  3. Gao, D., et al. Recent developments in microfluidic devices for in vitro cell culture for cell-biology research. TrAC Trends in Analytical Chemistry. 35, 150-164 (2012).
  4. Geysen, H. M., Schoenen, F., Wagner, D., Wagner, R. Combinatorial compound libraries for drug discovery: an ongoing challenge. Nature Reviews Drug Discovery. 2, 222-230 (2003).
  5. Xu, Y., Shi, Y., Ding, S. A chemical approach to stem-cell biology and regenerative medicine. Nature. 453, 338-344 (2008).
  6. Khademhosseini, A., Langer, R., Borenstein, J., Vacanti, J. P. Microscale technologies for tissue engineering and biology. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103, 2480-2487 (2006).
  7. Bhadriraju, K., Chen, C. S. Engineering cellular microenvironments to improve cell-based drug testing. Drug Discovery Today. 7, 612-620 (2002).
  8. Castel, D., Pitaval, A., Debily, M. -A., Gidrol, X. Cell microarrays in drug discovery. Drug Discov. Today. 11, 616-622 (2006).
  9. Tsui, J. H., Lee, W., Pun, S. H., Kim, J., Kim, D. -H. Microfluidics-assisted in vitro drug screening and carrier production. Advanced Drug Delivery Reviews. (2013).
  10. Gottwald, E., et al. A chip-based platform for the in vitro generation of tissues in three-dimensional organization. Lab on a Chip. 7, 777-785 (2007).
  11. Liu, R., Lee, A. P. Integrated Biochips for DNA Analysis. Springer. (2008).
  12. Natarajan, S., et al. Continuous-flow microfluidic printing of proteins for array-based applications including surface plasmon resonance imaging. Analytical Biochemistry. 373, 141-146 (2008).
  13. Natarajan, S., Hatch, A., Myszka, D. G., Gale, B. K. Optimal Conditions for Protein Array Deposition Using Continuous Flow. Anal. Chem. 80, 8561-8567 (2008).
  14. Keighley, W. The need for high throughput kinetics early in the drug discovery process. Summer 2011. Drug Discovery World Online at: http://www.ddw-online.com/p-149288 (2011).
  15. Xu, F., et al. A three-dimensional in vitro ovarian cancer coculture model using a high-throughput cell patterning platform. Biotechnol J. 6, 204-212 (2011).
  16. Tuckwell, D. S., Weston, S. A., Humphries, M. J. Integrins: a review of their structure and mechanisms of ligand binding. Symposia of the Society for Experimental Biology. 47, 107 (1993).
  17. Roberts, C., et al. Using mixed self-assembled monolayers presenting RGD and (EG) 3OH groups to characterize long-term attachment of bovine capillary endothelial cells to surfaces. Journal of the American Chemical Society. 120, 6548-6555 (1998).
  18. Chandra, R. A., Douglas, E. S., Mathies, R. A., Bertozzi, C. R., Francis, M. B. Programmable cell adhesion encoded by DNA hybridization. Angewandte Chemie. 118, 910-915 (2006).
  19. Hsiao, S. C., et al. Direct cell surface modification with DNA for the capture of primary cells and the investigation of myotube formation on defined patterns. Langmuir. 25, 6985-6991 (2009).
  20. Black, C. B., Duensing, T. D., Trinkle, L. S., Dunlay, R. T. Cell-Based Screening Using High-Throughput Flow Cytometry. ASSAY and Drug Development Technologies. 9, 13-20 (2011).
  21. Derby, B. Bioprinting: inkjet printing proteins and hybrid cell-containing materials and structures. J. Mater. Chem. 18, 5717-5721 (2008).
  22. Onoe, H., et al. Cellular Microfabrication: Observing Intercellular Interactions Using Lithographically-Defined DNA Capture Sequences. Langmuir. 28, 8120-8126 (2012).
  23. Hsiao, S. C., et al. DNA-Coated AFM Cantilevers for the Investigation of Cell Adhesion and the Patterning of Live Cells. Angewandte Chemie International Edition. 47, 8473-8477 (2008).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics