Murine पूर्ण मोटाई त्वचा प्रत्यारोपण

* These authors contributed equally
Immunology and Infection

Your institution must subscribe to JoVE's Immunology and Infection section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Murine पूर्ण मोटाई त्वचा प्रत्यारोपण एक alloimmune सेटिंग में अस्वीकृति का अध्ययन करने के लिए एक अच्छी तरह से स्थापित मॉडल है। > C57BL / 6 पूर्ण मोटाई त्वचा प्रत्यारोपण - यहाँ, हम एक BALB / ग प्रदर्शन में शामिल प्रत्येक चरण के एक ट्यूटोरियल प्रदान करते हैं।

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Cheng, C. H., Lee, C. F., Fryer, M., Furtmüller, G. J., Oh, B., Powell, J. D., Brandacher, G. Murine Full-thickness Skin Transplantation. J. Vis. Exp. (119), e55105, doi:10.3791/55105 (2017).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Murine पूर्ण मोटाई त्वचा प्रत्यारोपण alloimmune प्रतिक्रिया और भ्रष्टाचार अस्वीकृति का अध्ययन करने के लिए एक अच्छी तरह से स्थापित विवो में मॉडल है। मनुष्य के लिए अपने सीमित आवेदन के बावजूद, चूहों में त्वचा प्रत्यारोपण के लिए व्यापक रूप से प्रत्यारोपण के अनुसंधान के लिए नियोजित किया गया है। प्रक्रिया जानने के लिए और प्रदर्शन करने के लिए आसान है, और यह नाजुक microsurgical तकनीक है और न ही व्यापक प्रशिक्षण की आवश्यकता नहीं है। इसके अलावा, इस मॉडल में भ्रष्टाचार अस्वीकृति एक बहुत प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया में होता है और आसानी से प्रत्यक्ष निरीक्षण और टटोलने का कार्य द्वारा नजर रखी है। इसके अलावा, दाता मिलान या तीसरे पक्ष त्वचा grafts के साथ माध्यमिक त्वचा प्रत्यारोपण के लिए एक विकल्प और सीधी विधि दाता विशिष्ट सहिष्णुता का आकलन करने के रूप में और अधिक जटिल प्रत्यारोपण मॉडल पर किया जा सकता है। जटिलताओं कम कर रहे हैं और सामान्य संज्ञाहरण अधिक मात्रा या श्वसन संकट प्रक्रिया के बाद करने के लिए सीमित कर रहे हैं। भ्रष्टाचार की विफलता, दूसरे हाथ पर, जीआर के गरीब तैयारी का एक परिणाम के रूप में आमतौर पर तब होता हैभ्रष्टाचार के बिस्तर में पिछाड़ी, गलत स्थिति, या पट्टी के अनुचित नियुक्ति। इस अनुच्छेद में, हम चूहों में पूर्ण मोटाई त्वचा प्रत्यारोपण के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं और एक सफल प्रक्रिया के लिए आवश्यक महत्वपूर्ण कदम का वर्णन है।

Introduction

अंग प्रत्यारोपण के अंत मंच अंग विफलता के साथ रोगियों के लिए पसंद का इलाज है, और परिणाम शल्य चिकित्सा प्रक्रियाओं और प्रतिरक्षादमन प्रोटोकॉल के क्षेत्र में प्रगति के साथ उल्लेखनीय सुधार हुआ है। हालांकि, लंबी अवधि प्रतिरक्षादमन महत्वपूर्ण साइड इफेक्ट के साथ जुड़ा हुआ है, और नई रणनीति है कि सहिष्णुता को बढ़ावा देने के विकास के आधुनिक प्रत्यारोपण शोध का लक्ष्य रहता है।

कई पशु मॉडल प्रत्यारोपण में बुनियादी अनुसंधान के लिए विकसित किया गया है, allograft अस्वीकृति के तंत्र का अध्ययन करने के लिए और प्रतिरक्षादमन भ्रष्टाचार अस्वीकृति को रोकने के लिए और लंबी अवधि सहिष्णुता 1-3 को बढ़ावा देने के लिए दृष्टिकोण का परीक्षण करने के लिए। माउस मॉडल नैदानिक ​​और चिकित्सीय एंटीबॉडी और अच्छी तरह से परिभाषित जन्मजात और ट्रांसजेनिक उपभेदों के अनन्य और विशाल उपलब्धता के कारण प्रतिरक्षा अनुसंधान का मुख्य आधार बन गए हैं। त्वचा प्रत्यारोपण के लिए एक सरल प्रक्रिया है कि विशेष microsurgical कौशल की आवश्यकता नहीं है और कर सकते हैआसानी से नजर रखी जा postoperatively। साथ में ले ली, माउस त्वचा प्रत्यारोपण के प्रतिजन वितरण, सेल की तस्करी, और भ्रष्टाचार अस्वीकृति 4,5 के दौरान ऊतक विनाश सहित alloimmune प्रतिक्रिया में शामिल कई पहलुओं का अध्ययन करने के लिए एक असाधारण उपकरण किया गया है।

यहाँ, हम माउस मॉडल का उपयोग पूर्ण मोटाई त्वचा प्रत्यारोपण के लिए कदम दर कदम प्रक्रिया दिखाने के लिए, और हम प्रत्यारोपित त्वचा के एक सफल engraftment के लिए आवश्यक महत्वपूर्ण कदम का वर्णन है।

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

सभी प्रक्रियाओं की देखभाल और स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थान (एनआईएच) की प्रयोगशाला पशु के उपयोग के लिए गाइड के अनुसार आयोजित किया गया और जॉन्स हॉपकिंस विश्वविद्यालय के पशु की देखभाल और उपयोग समिति (JHUACUC) द्वारा अनुमोदित किया गया। विशिष्ट प्रक्रियाओं को मंजूरी दे दी ACUC प्रोटोकॉल MO13M292 और MO13M370 के तहत प्रदर्शन किया गया।

1. दाता त्वचा हार्वेस्ट

  1. (4% पर प्रेरण vaporizer, 1 पर रखरखाव - माउस शंकु के माध्यम से 2%) isoflurane साथ दाता माउस anesthetize। संज्ञाहरण की गहराई पर नजर रखने के लिए पैर की अंगुली चुटकी वापसी पलटा का प्रयोग करें।
  2. एक बिजली के रेजर का प्रयोग, जानवर की पीठ दाढ़ी और 10% povidone आयोडीन (जैसे, Betadine) के साथ यह कीटाणुरहित।
  3. areolar संयोजी ऊतक के स्तर पर बाँझ कैंची, दस्ताने, और सड़न रोकनेवाला तकनीक, गर्दन को कूल्हे से फसल दाता वापस त्वचा, कुंद विच्छेदन के साथ उपयोग करना।
  4. फसल कटाई के बाद गर्भाशय ग्रीवा अव्यवस्था से पशु euthanizeत्वचा उपरोप।
  5. एक माइक्रोस्कोप के तहत, संयोजी ऊतक, वसा ऊतक, और वापस त्वचा ठीक टीनाटामी कैंची का उपयोग करने से panniculus carnosus अलग। panniculus carnosus एक पतली, पारदर्शी पेशी त्वचा हिल आंदोलनों के लिए जिम्मेदार है।
  6. बाँझ उपकरणों तकनीक का उपयोग करना, 15 मिमी x 15 मिमी भ्रष्टाचार बिस्तर पर एक 10 मिमी x 10 मिमी के लिए वापस त्वचा से 15 मिमी x 15 मिमी ग्राफ्ट बाहर काट दिया।
  7. बर्फ पर एक पेट्री डिश में बाँझ फॉस्फेट बफर खारा (पीबीएस) से लथपथ gauzes पर ग्राफ्ट स्टोर।
    नोट: 8 - 10 ग्राफ्ट एक दाता माउस से प्राप्त किया जा सकता है।

2. प्राप्तकर्ता त्वचा प्रत्यारोपण

  1. (4% पर प्रेरण vaporizer, 1 पर रखरखाव - माउस शंकु के माध्यम से 2%) isoflurane के साथ प्राप्तकर्ता माउस anesthetize। संज्ञाहरण की गहराई पर नजर रखने के लिए पैर की अंगुली चुटकी वापसी पलटा का प्रयोग करें।
  2. पश्चात दर्द से राहत के लिए प्रशासन buprenorphine के 0.02 मिलीग्राम / किग्रा BW।
  3. जानवर की पीठ की ओर दाढ़ी जहां भ्रष्टाचार वाईडालूँगा डाला हो सकता है और 10% povidone आयोडीन के साथ कीटाणुरहित।
  4. कैंची का प्रयोग, 15 मिमी x 15 मिमी त्वचा के वर्ग के एक 10 मिमी x 10 मिमी काटा। दोष आकार भ्रष्टाचार तुलना में थोड़ा बड़ा (10%) होना चाहिए। के रूप में संभव के रूप में अल्पज्ञता कट। panniculus carnosus और जहाजों की रक्षा करने के लिए ध्यान रखना। panniculus carnosus अपनी गतिशीलता और रक्त वाहिकाओं है कि यह करने के लिए सतही चलाने से अंतर्निहित प्रावरणी से प्रतिष्ठित किया जा सकता है।
  5. भ्रष्टाचार के बिस्तर पर भ्रष्टाचार स्थिति, किनारों के साथ परतों से परहेज।
  6. कोनों पर और प्रत्येक धार के बीच में 8 टांके रखें। प्रत्येक सीवन के लिए, भ्रष्टाचार आसपास के प्राप्तकर्ता त्वचा के नीचे बिस्तर से panniculus carnosus के माध्यम से भ्रष्टाचार के माध्यम से सुई गुजरती हैं और फिर।
  7. संवेदनाहारी नकाब हटा और पशु चिपकने वाली पट्टी लागू करने से पहले संज्ञाहरण से आंशिक रूप से वसूली करते हैं।
  8. भ्रष्टाचार से जोड़ धुंध के साथ एक चिपकने वाली पट्टी में प्राप्तकर्ता माउस लपेटें। दो पट्टियों के संयोजन से पट्टी बनाओ, काटनेएक के चिपकने वाला हिस्सा और दो शोषक पैड एक साथ रखकर।
  9. वसूली के दौरान बारीकी माउस मॉनिटर सुनिश्चित करने के लिए कि पट्टी छाती भ्रमण सीमित नहीं है और साँस लेने में। पट्टी हटाये सांस की दर कम हो जाती है या जानवर दम तोड़ देना या उथलेपन सांस के लिए शुरू होता है।

3. पश्चात की देखभाल

  1. संक्रमण रोकथाम के लिए सर्जरी के बाद प्रशासन Enrofloxacin 5 मिलीग्राम / किग्रा।
  2. एक माइक्रोवेव हीटिंग पैड पर एक साफ पिंजरे में प्रत्यारोपित माउस प्लेस जब तक यह पूरी तरह से संज्ञाहरण से ठीक हो जाए।
  3. आवास की सुविधा के लिए यह लौटने के लिए postoperatively से पहले 1 घंटे के लिए माउस का निरीक्षण करें।
  4. सात दिन सर्जरी के बाद, 2.1 चरण में के रूप में माउस anesthetize। पट्टी के उदर पक्ष के माध्यम से ही कटौती करके पट्टी निकालें।
  5. ध्यान से देखें और गद्दारी, संकुचन, या कठोरता के संकेत के लिए अगले दिन पर भ्रष्टाचार टटोलना। अगर मौजूद है, भ्रष्टाचार उचित vasculariza हासिल नहीं हो सकताtion और एक तकनीकी विफलता माना जाना चाहिए।
  6. अस्वीकृति के संकेत के लिए दैनिक मॉनिटर। ग्राफ्ट पर विचार को खारिज कर दिया, जब भ्रष्टाचार के ऊतकों की ≥90% परिगलित हो जाता है।
  7. अस्वीकार कर दिया जानवरों euthanize और विश्लेषण के लिए उन्हें फसल।

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

प्राप्तकर्ता माउस पर पट्टी की नियुक्ति की प्रक्रिया का एक महत्वपूर्ण कदम है। त्वचा भ्रष्टाचार कंधे, कमर, और रीढ़ की हड्डी (चित्रा 1) के बीच प्राप्तकर्ता ट्रंक पर तैनात है। पट्टी मुड़ा धुंध और दो प्लास्टिक चिपकने वाला बैंडेज के संयोजन के साथ बनाया गया है। प्राप्तकर्ता माउस पट्टी के केंद्र पर धुंध से अधिक नीचे भ्रष्टाचार के साथ रखा गया है। दो घुमावदार सूक्ष्म संदंश का प्रयोग, पट्टी के निचले सिरे पहले खींच लिया है, और फिर पट्टी के शीर्ष पेट के लिए माउस पर लपेटा जाता है।

पूरा बेमेल मॉडल में, पूर्ण मोटाई त्वचा grafts आमतौर पर 8 से 12 दिनों में खारिज कर रहे हैं। नाबालिग बेमेल मॉडल में, अस्वीकृति प्रतिक्रियाओं धीमी है, और अधिक चर रहे हैं, और त्वचा भ्रष्टाचार उपस्थिति में इस तरह के संकुचन या बालों की हानि (चित्रा 2) के रूप में कम अलग परिवर्तन, की विशेषता है। एक्यूट भ्रष्टाचार अस्वीकृति पीढ़ीlly सूजन और भ्रष्टाचार के पर्विल के साथ शुरू होता है। इन घटनाओं के भ्रष्टाचार सुखाना, दबाव, और पपड़ी गठन (चित्रा 2 बी और सी) के द्वारा पीछा किया जाता है। एमएचसी बेमेल और प्रतिरक्षादमन प्रोटोकॉल की डिग्री पर निर्भर करता है, अस्वीकृति एक अर्धजीर्ण प्रक्रिया से पाए जाते हैं, इस तरह के बालों के झड़ने, रंजकता, चमड़े का लकीरें, और भ्रष्टाचार मात्रा के रूप में सूक्ष्म परिवर्तन के द्वारा चिह्नित किया जा सकता है। इन मामलों में, एक को अस्वीकार कर भ्रष्टाचार, चमकदार सफेद, और गंजा, असमान किनारों (चित्रा 2 एफ) के साथ 14 प्रकट होता है।

त्वचा प्रत्यारोपण के इस मॉडल का उपयोग, हम एक उपन्यास दृष्टिकोण टी सेल चयापचय भ्रष्टाचार अस्वीकृति 15 को रोकने के लिए लक्षित कर जांच की। यह सर्वविदित है कि चयापचय संकेत दे रास्ते टी सेल प्रतिक्रिया 16 के परिणामों हुक्म में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं। भोले टी कोशिकाओं mitochondrial आक्सीकारक फास्फारिलीकरण पर भरोसा ऊर्जा बुनियादी प्रतिरक्षा निगरानी के लिए आवश्यक उत्पन्न करने के लिए। तथापि,सक्रियण पर, प्रेरक टी कोशिकाओं पाचन एरोबिक ग्लाइकोलाइसिस को reprogram और प्रदर्शन में वृद्धि हुई glutamine चयापचय 16,17। दाताओं के रूप में उपयोग करते हुए Balb / सी और C57BL / 6 प्राप्तकर्ता के रूप में, हमने देखा है कि अकेले बाधा ग्लाइकोलाइसिस और आक्सीकारक फास्फारिलीकरण (2DG + मेटफार्मिन) या glutamine चयापचय (डॉन) लंबे समय तक त्वचा भ्रष्टाचार अस्तित्व है, लेकिन एक साथ तीन रास्ते अवरुद्ध परिणामस्वरूप में काफी वृद्धि हुई है-भ्रष्टाचार अस्तित्व (चित्रा 3 सी)। इसके अलावा, ट्रिपल चयापचय चिकित्सा पारंपरिक Cyclosporine या rapamycin (चित्रा 3 ए और बी) की तुलना में अधिक प्रभावी था। स्थायी स्वीकृति प्राप्त किया गया था नहीं, और कमी चिकित्सा, costimulation नाकाबंदी, या नए चयापचय चिकित्सा सहित आगे की रणनीति, प्रत्यारोपण सहिष्णुता के बेहतर प्रेरण को बढ़ावा देने सकता है। हालांकि, अध्ययन में दो उपन्यास अंतर्दृष्टि प्रदान की: गैर विशिष्ट अवरोधकों का उपयोग बढ़ चयापचय की मांग के साथ चयनात्मक प्रतिरक्षा कोशिकाओं, साथ ही आवश्यकता टी निशाना बनाने के लिए ओ भ्रष्टाचार अस्वीकृति में और अधिक मजबूत प्रतिरक्षादमन प्राप्त करने के लिए एक साथ तीन चयापचय मार्ग ब्लॉक।

Calcineurin अवरोधकों और rapamycin के स्तनधारी लक्ष्य (mTOR) अवरोधकों नैदानिक ​​प्रत्यारोपण में प्रयुक्त परम्परागत immunosuppressive चिकित्सा के सबसे गठन। Balb / सी C57BL / 6 त्वचा Cyclosporine और rapamycin के साथ इलाज किया प्रत्यारोपण के माध्य भ्रष्टाचार जीवित रहने की दर 17 और 16 दिनों क्रमशः थे। इसकी तुलना में, प्राप्तकर्ताओं चयापचय अवरोधकों कि टी सेल ग्लाइकोलाइसिस, mitochondrial आक्सीकारक फास्फारिलीकरण बाधित साथ इलाज किया, और glutamine चयापचय अस्तित्व लंबे समय तक था: मंझला भ्रष्टाचार अस्तित्व 29 दिनों का था। इसके अलावा, चयापचय चिकित्सा समूह से त्वचा grafts के ऊतक विज्ञान अधिक बरकरार ऊतक संरेखण और कम लिम्फोसाईटिक सूजन घुसपैठ (चित्रा 4) का प्रदर्शन किया।

105 / 55105fig1.jpg "/>
चित्रा 1: पट्टी के साथ भ्रष्टाचार के कवर। (ए) त्वचा भ्रष्टाचार सही ट्रंक पर रखा। (बी) के एक जोड़ धुंध और दो प्लास्टिक स्ट्रिप्स पट्टियों के साथ बनाया पट्टी। (सी) प्राप्तकर्ता माउस धुंध पर रखा। (डीएफ) पट्टी माउस के चारों ओर लिपटा। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्र 2
चित्रा 2: तीव्र और जीर्ण अस्वीकृति के दौरान त्वचा भ्रष्टाचार सूरत। (ए) / Balb ग C57BL / 6 (पूरा बेमेल) को अस्वीकृति (8 दिन) के सबूत के बिना पूर्ण मोटाई त्वचा प्रत्यारोपण। (बी) / Balb ग C57BL 6/50% भ्रष्टाचार अस्वीकृति के साथ पूर्ण मोटाई त्वचा प्रत्यारोपण के लिए (13 दिन)। (सी) / Balb ग C57BL / 6 पूर्ण मोटाई पूरा भ्रष्टाचार अस्वीकृति (18 दिन) के साथ त्वचा प्रत्यारोपण के लिए। (डी) syngeneic पूर्ण मोटाई त्वचा प्रत्यारोपण (8 दिन)। (ई) syngeneic पूर्ण मोटाई त्वचा प्रत्यारोपण (दिन 30)। (एफ) C57BL / 10 C57BL / 6 (नाबालिग बेमेल) को पुरानी भ्रष्टाचार अस्वीकृति (दिन 100) के साथ पूर्ण मोटाई त्वचा प्रत्यारोपण। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्र तीन
चित्रा 3: Balb / सी C57BL / 6 त्वचा भ्रष्टाचार के जीवित रहने के लिए। Cyclosporine (25 मिलीग्राम / किग्रा QD) के साथ (ए) उपचार। Rapamycin (3 मिलीग्राम / किग्रा QD) के साथ (बी) के उपचार। (सी) 2-Deoxy-डी ग्लूकोज (2DG) चयापचय अवरोधकों के साथ उपचार, 500मिलीग्राम / किग्रा QD, मेटफार्मिन 150 मिलीग्राम / किग्रा QD, और 6-Diazo-5-ऑक्सो-एल norleucine (डॉन) 1.6 मिलीग्राम / किग्रा QOD। सभी उपचार अस्वीकृति तक प्रत्यारोपण के दिन से दिलाई गई। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्रा 4
चित्रा 4: hematoxylin और eosin दाग (ठीक है, X100; छोड़ दिया, X200) त्वचा के पश्चात 7 दिवस पर मेटाबोलिक थेरेपी के साथ ग्राफ्ट। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Medawar, मानव अध्ययन में पहले और उसके बाद खरगोश और चूहों में से इसकी शुरूआत के बाद, त्वचा प्रत्यारोपण 6.7 एलोजेनिक प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के अध्ययन के लिए एक अमूल्य मॉडल किया गया है। इस पांडुलिपि में, हम ऊपरी और निचले हिस्से में त्वचा का उपयोग बड़े पैमाने पर गैर-vascularized, पूर्ण मोटाई त्वचा प्रत्यारोपण के लिए एक मॉडल प्रस्तुत करते हैं। पूंछ त्वचा या ऊतक भ्रष्टाचार के स्रोत के रूप में माउस के कान त्वचा का उपयोग सहित विभिन्न वैकल्पिक तरीकों, तिथि करने के लिए 8,9 सूचना दी गई है। इन मॉडलों को तकनीकी सादगी के विशिष्ट लाभ के वर्तमान और उच्च मात्रा प्रवाह के लिए अनुमति देते हैं। पूंछ त्वचा grafts में एपिडर्मल Langerhans कोशिकाओं और चमड़े का वृक्ष के समान कोशिकाओं के रिश्तेदार की कमी है, तथापि, देरी अस्वीकृति के रूप में अच्छी तरह से मदद की भ्रष्टाचार स्वीकृति के रूप में मेजबान के द्वारा होता है, विशेष रूप से नाबालिग एमएचसी बेमेल मॉडल 10,11 में। इसलिए, पूर्ण मोटाई के तने त्वचा ग्राफ्टिंग के एक और अधिक मजबूत मॉडल और टी-सेल मीडिया अध्ययन करने के लिए अधिक उपयुक्त माना जाता हैटेड अस्वीकृति 12 तीव्र।

इसके अलावा, हमारे मॉडल सरल तकनीकों को रोजगार और उन्नत microsurgical कौशल की आवश्यकता नहीं है। ऑपरेटिंग समय कम है (~ प्रक्रिया के पूरा होने के लिए संज्ञाहरण के शुरू होने से माउस प्रति 10 मिनट), और पश्चात की रुग्णता और मृत्यु दर नगण्य है। (सर्जरी प्लस मौत पट्टी के हटाने से पहले के बाद मौत के 24 घंटा के भीतर) कुल मिलाकर ऑपरेटिव मृत्यु दर 3.8% 13 होने की सूचना दी गई है। जटिलताओं के अधिकांश संज्ञाहरण अधिक मात्रा या पीढ़ी-प्रतिबंधक पट्टियाँ, जो आसानी से तत्काल पश्चात की अवधि के दौरान और श्वसन संकट 6,17 की जल्द से जल्द संकेत पर पट्टी के तेजी से हटाने से श्वसन समारोह की करीब से निगरानी से रोका जा सकता से उत्पन्न होती हैं।

Engraftment की प्रक्रिया में सबसे महत्वपूर्ण कारक भ्रष्टाचार से 6 मेजबान वाहिकाओं के अंतर्वृद्धि द्वारा भ्रष्टाचार के ऊतकों की revascularization है। काटा त्वचा की आवश्यकता होती हैसावधान तैयारी है, और panniculus carnosus के विच्छेदन के लिए एक महत्वपूर्ण कदम है। हम एक खुर्दबीन के नीचे panniculus carnosus दूर करने के लिए पसंद करते हैं। यह किनारों में से एक से विच्छेदन शुरू करने के लिए और मांसपेशियों को प्रेरित कर रहा है और थोड़ा angled एक घुमावदार टीनाटामी के ब्लेड के साथ त्वचा से अलग करके धीरे-धीरे अग्रिम करने के लिए सिफारिश की है। भ्रष्टाचार के बिस्तर से साइट जोड़ों और रीढ़ की हड्डी से दूर होना चाहिए। प्राप्तकर्ता माउस में चीरों बनाने से पहले, कंधे और कूल्हे त्वचा सिलवटों कि जोड़ों के स्तर हदबंदी करने में मदद कल्पना करने के लिए स्थानांतरित किया जाना चाहिए। जब प्राप्तकर्ता त्वचा को हटाने, यह रक्त वाहिकाओं है कि panniculus carnosus के लिए सतही चलाने को नुकसान पहुँचाए से बचने के लिए महत्वपूर्ण है। खून बह रहा होता है, तो स्थानीय संपीड़न लागू करते हैं और रक्त के थक्के और कि engraftment के साथ हस्तक्षेप कर सकते हैं हटा दें। अंत में, पट्टी कि समझौता वसूली साँस लेने में कठिनाई का कारण नहीं होना चाहिए, हालांकि यह भ्रष्टाचार और ऑटो-म्यू के विस्थापन को रोकने के लिए पर्याप्त होना चाहिए सिकुड़नेवालाrevascularization की प्रक्रिया के दौरान tilation। प्लास्टिक स्ट्रिप्स बैंड एड्स पक्षपाती और इस उद्देश्य के लिए काफी मजबूत कर रहे हैं। हम दो पट्टियों गठबंधन पूरी तरह से माउस कमर पर लपेट के लिए और पट्टी और भ्रष्टाचार (चित्रा 1) के बीच एक मुड़ा धुंध की नियुक्ति की अनुमति देने के लिए। पट्टी यह के उदर पक्ष काटने से निकाल दिया जाता है, और बाकी आदेश भ्रष्टाचार में खलल न डालें मैन्युअल पट्टी को दूर करने की कोशिश कर रहा है, जबकि बचने के लिए, जानवर द्वारा हटा दिया जाता है।

सारांश में, पूर्ण मोटाई त्वचा प्रत्यारोपण के साहित्य में प्रचुर मात्रा में संदर्भ के साथ एक अच्छी तरह से स्थापित मॉडल है। प्रक्रिया का प्रदर्शन करने के लिए आसान है, ऑपरेटिंग समय कम है, और पश्चात की जटिलताओं सीमित हैं। महत्वपूर्ण कदम सावधानीपूर्वक दाता त्वचा फसल और प्राप्तकर्ता पट्टी का सही स्थान से संबंधित हैं। भविष्य biomaterials कि angiogenesis और ऊतकों की मरम्मत को बढ़ावा देने के शामिल अध्ययन आगे की प्रक्रिया की सफलता की दर में सुधार हो सकता।

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

लेखकों के पास खुलासे के लिए कुछ भी नहीं है।

Acknowledgments

यह काम एनआईएच अनुदान R01AI077610 द्वारा वित्त पोषित किया गया था।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Straight micro forceps Sigma F4017
Curved micro forceps Aesculap BD333R
Curved Stevens tenotomy scissors Aesculap BC905R
Mayo dissecting scissors Sigma S3146
Micro needle holder Aesculap BM563R
Sterile gauze Covidien 441218
6-0 Nylon suture MWI 31849
Plastic Strips Band-Aid Johnson & Johnson Obtained from pharmacy
10 cm Petri dish Fisherbrand FB0875712
PBS Quality Biological 119069131
Buprenorphine DEA Number required; Obtained from hospital pharmacy
Enrofloxacin Bayer Health Care 186599

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Furtmuller, G. J., et al. Orthotopic Hind Limb Transplantation in the Mouse. J Vis Exp. (2016).
  2. Oh, B., et al. A Novel Microsurgical Model for Heterotopic, En Bloc Chest Wall, Thymus, and Heart Transplantation in Mice. J Vis Exp. (2016).
  3. Oberhuber, R., et al. Murine cervical heart transplantation model using a modified cuff technique. J Vis Exp. e50753 (2014).
  4. Jones, T. R., Shirasugi, N., Adams, A. B., Pearson, T. C., Larsen, C. P. Intravital microscopy identifies selectins that regulate T cell traffic into allografts. J Clin Invest. 112, 1714-1723 (2003).
  5. Celli, S., Albert, M. L., Bousso, P. Visualizing the innate and adaptive immune responses underlying allograft rejection by two-photon microscopy. Nat Med. 17, 744-749 (2011).
  6. Medawar, P. B. The behaviour and fate of skin autografts and skin homografts in rabbits: A report to the War Wounds Committee of the Medical Research Council. J Anat. 78, 176-199 (1944).
  7. Billingham, R. E., Brent, L., Medawar, P. B., Sparrow, E. M. Quantitative studies on tissue transplantation immunity. I. The survival times of skin homografts exchanged between members of different inbred strains of mice. Proc R Soc Lond B Biol Sci. 143, 43-58 (1954).
  8. Garrod, K. R., Cahalan, M. D. Murine skin transplantation. J Vis Exp. (2008).
  9. Schmaler, M., Broggi, M. A., Rossi, S. W. Transplantation of tail skin to study allogeneic CD4 T cell responses in mice. J Vis Exp. e51724 (2014).
  10. Bergstresser, P. R., Toews, G. B., Gilliam, J. N., Streilein, J. W. Unusual numbers and distribution of Langerhans cells in skin with unique immunologic properties. J Invest Dermatol. 74, 312-314 (1980).
  11. Chen, H. D., Silvers, W. K. Influence of Langerhans cells on the survival of H-Y incompatible skin grafts in rats. J Invest Dermatol. 81, 20-23 (1983).
  12. Chong, A. S., Alegre, M. L., Miller, M. L., Fairchild, R. L. Lessons and limits of mouse models. Cold Spring Harb Perspect Med. 3, a015495 (2013).
  13. Mayumi, H., Nomoto, K., Good, R. A. A surgical technique for experimental free skin grafting in mice. Jpn J Surg. 18, 548-557 (1988).
  14. McFarland, H. I., Rosenberg, A. S. Skin allograft rejection. Curr Protoc Immunol. Chapter 4, (2009).
  15. Lee, C. F., et al. Preventing Allograft Rejection by Targeting Immune Metabolism. Cell reports. 13, 760-770 (2015).
  16. Pollizzi, K. N., Powell, J. D. Integrating canonical and metabolic signalling programmes in the regulation of T cell responses. Nat Rev Immunol. 14, 435-446 (2014).
  17. Pearce, E. L., Poffenberger, M. C., Chang, C. H., Jones, R. G. Fueling immunity: insights into metabolism and lymphocyte function. Science. 342, 1242454 (2013).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics