가속된 동맥 경화의 토끼 모델: 장 골 동맥 풍선 상해의 방법 론 적 관점

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Published 10/03/2017
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Medicine

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Summary

동맥 경화 증의 동물 모델 메커니즘을 이해 하 고 패 개발 또는 파열, 산업화 된 세계에서 죽음의 주요 원인이 방지 하기 위해 새로운 접근을 조사 하기 위해 필수적입니다. 이 프로토콜 풍선 부상과 콜레스테롤 풍부한 다이어트의 조합을 사용 하 여 토끼 장 골 동맥에 동맥 경 화성 플 라크를 유도.

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Jain, M., Frobert, A., Valentin, J., Cook, S., Giraud, M. N. The Rabbit Model of Accelerated Atherosclerosis: A Methodological Perspective of the Iliac Artery Balloon Injury. J. Vis. Exp. (128), e55295, doi:10.3791/55295 (2017).

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Abstract

급성 관상 동맥 증후군 관상동맥 폐색 동맥 경 화성 플 라크 개발 및 파열에서에서 유래한 공업화 한 세계에서 사망의 주요 원인입니다. 뉴질랜드 화이트 (NZW) 토끼는 동맥 경화 증의 연구를 위한 동물 모델로 서 널리 사용 됩니다. 그들은 개발 atherogenic 다이어트; 먹 일 때 자연 스러운 병 변 그러나,이 4-8 개월의 긴 시간이 필요합니다. 더욱 강화 하 고 가속 atherogenesis, atherogenic 다이어트와 기계적 내 피 상해는 종종 사용 됩니다. 유도 하는 토끼의 동맥 경 화성 플 라크에 대 한 제시 절차 atherogenic 다이어트 먹이 NZW 토끼의 왼쪽된 장 골 동맥에 피를 방해 하는 풍선 카 테 터를 사용 합니다. 풍선 카 테 터로 인 한 이러한 기계적 손상 시간 종속 방식에서 neointimal 지질 축적을 시작 하는 염증 성 반응의 사슬을 유도 합니다. 동맥 경 화성 플 라크 풍선 부상 쇼 neointimal 두껍게 광범위 한 지질 침투와 높은 평활 근 셀 내용, 대 식 세포의 존재에 따라 거품 세포 파생. 이 기술은 간단 하 고, 재현 고 제어 길이 장 골 동맥 내 플 라크를 생성 한다. 모든 절차는 20-30 분 이내 완료 됩니다. 절차는 낮은 사망률과 안전 하며 또한 상당한 내 병 변 취득에 높은 성공. 풍선 카 테 터의 절차 2 주 이내에 동맥 경화 동맥 상해 결과 유도 한다. 질병 병리학을 조사를 위해이 모델을 사용할 수 있습니다 진단 이미징 새로운 치료 전략을 평가 하 고.

Introduction

취약 한 동맥 경 화성 플 라크의 파열1선진국 사망의 주요 원인 중 하나입니다. 지난 수 십년 동안 연구 패 진행에 관련 된 여러 분자 및 세포 메커니즘을 펼쳐는, 뿐만 아니라 질병 진행의 복잡 한 메커니즘을 해명 뿐만 아니라 새로운 테스트 노력 필요 아직도 계속 치료 접근 한다. 여러 동물 모델 연구는 동맥 경화를 제안 되었습니다. 유전자 조작, 콜레스테롤 먹이 또는 기계적 피 상해는 쥐, 토끼 또는 minipigs를 포함 하 여 동맥 경화의 가장 동물 모델에서 공유 하는 표준 전략. 이러한 가운데, NZW 토끼에 민감합니다 콜레스테롤 다이어트 동안 정상적인 쥐와 생쥐 마음이 크게 식이 콜레스테롤2,,34를 흡수 하지 않습니다. 토끼는 저절로 대동맥 병 변 세포 콜레스테롤 풍부한 다이어트5,6먹 일 때 일부 섬유 구성 요소와 함께 풍부한 개발. 그러나, 동맥 경 화성 plaquesby 콜레스테롤 다이어트 혼자6,7 먹이 유도 하기 위해 4-8 개월의 긴 준비 시간 실험 설정의 대부분을 위한 주요 결점은. 상대적으로 짧은 시간에 병 변을 유발에 대 한 추구, 높은 콜레스테롤 다이어트와 풍선 상해의 조합 Baumgarter 및 Studer8에 의해 개발 되었습니다. 이 기술은의 전반적인 목표는 2 주 이내에 콜레스테롤 토끼에 거품 세포 (인간에서 지방 조 흔과 유사)의 구성 된 동맥 경 화성 플 라크를 유도 하는 것입니다. 현재 기술 NZW 노인 토끼의 장 골 동맥으로 고급 풍선 카 테 터를 사용 하 여 Baumgarter의 방법에 따라 동맥 벽 상해의 절차를 설명 합니다.

콜레스테롤 풍부한 음식과 함께 부상 풍선 유도 드 endothelialization에서 동맥 경화 이어질 것입니다. 풍선 부상 동맥 경 화성 병 변 형성을 촉진 하 고 균일 한 크기와 분포의 플 라크를 생성 합니다. 내 두껍게 상해 다음 몇 일 이내에 시간과 내 세포 침투 시작의 기간 동안 증가 합니다. 상당한 대 식 세포와 지방 줄무늬 풍선 상해의 7-10 일 후에 나타나기 시작 하 고 미국 심장 협회에서 분류에 따라 병 변의 유형 II로 표시 됩니다. 토끼 풍선 부상은 종종 플 라크 구성 공부 대동맥에서 수행 됩니다. Neointimal 내 피 세포 접착 분자의 높은 수준의 표현. 플 라크 중간 절 개 및 adventitial 변화에 연관 됩니다. 동맥 경 화성 병 변 지질, 확산 부드러운 근육 세포 (SMCs), 교원 질 섬유 및 재생성된 endothelium 아래에 축적 하 고 자연에서 주로 유형 II는 염증 세포의 구성 됩니다. 토끼 플 라크의 토폴로지 배포 원칙에 인간 aortas 9,10 에 보고 유사 했다, 대동맥 장 골 동맥에 비해 크기가 큰 큰 길이에서 플 라크를 생산할 것 이라고. 그러나, 토끼에 있는 아 테 롬의 사이트로 장 골 동맥을 사용 하 여의 주요 장점은 접근, 인간 관상 동맥11, 균일 한 병 변 개발12, 높은 조직 요소 근육 콘텐츠에서 유사성은 활동13 그리고 형태학 및 angiographic 끝점을 상업적으로 제조 된 소자의 평가 허용 하는 인간의 관상 동맥에 비해 일관 된 배 차원. 침략과 비-침략 적 방법 살아있는 동물에서 토끼 장 골 동맥에 플 라크를 분석 조사 있다. 이전 보고서 자기 공명 또한 2.35 테슬라 미스터 시스템 14 의 도움으로 (MRI를) 영상 사용 설명, 혈관 내 초음파 (IVUS) 또는 광학 일관성 단층 촬영 (OCT) 카 적당 수 이미지에 적용 토끼 장 골 동맥에 동맥 경 화성 플 라크입니다. 장 골 동맥은 초음파 이미징 고해상도 진단법을 사용 하는 경우 그리고 대동맥이 기술 또한 탐험 수 있습니다.

지난 10 년간에서이 토끼 모델 풍선 부상의 더욱 패 진행15, 플 라크 회귀16의 메커니즘을 이해 하 있었습니다. 새로운 치료제 스타 틴, 표준 antiplatelet 에이전트, 항 산화 제17,18 everolimus 같은 약물 방출 스 텐트 등의 영향을 연구 하는 모델 사용 되었습니다 또한, 또는 zotarolimus 방출 스텐19,20 neointimal 두껍게. 이 모델은 또한 혈관 내 영상 카 테 터21이미징 근 적외선 형광의 조사에 사용 되었습니다.

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Protocol

이 실험 프로토콜 Cantonal 수의 사무실, Fribourg는 스위스 연방 수의 사무실, 스위스 (FR 2015/58)에 의해 승인 되었습니다.

참고: 남성 NZW 토끼 2.8 3.2 k g 사이 무게 사용 되었다. 동물 (12 h 빛 및 어두운 주기, ad libitum 물과 식량 제공) 기존의 조건 하에서 보관 되어 있었다. 풍선 노출 전에 동물 1 주 동안 그들은 정상적인 차 다이어트 지 루 했다에 대 한 acclimated 했다. 순응의 1 주 후 토끼 높은 지방 (8.6%)의 구성 하는 atherogenic 다이어트에 전환 했다 하 고 포화 지방산 205 mg/kg (1%) 콜레스테롤 다이어트 전체 연구 기간에 대 한. 왼쪽 장 골 동맥에서 풍선 손상 다이어트 개시 후 1 주 수행 및 동물 풍선 부상 4 주 또는 2 주 후 희생 되었다.

1. 수술 전 절차

  1. 유리 구슬 소독 기 또는 다른 적합 한 악기와 함께 사용 하기 전에 모든 수술 기구를 소독.
  2. 준비 풍선 카 테 터 어셈블리를 확인 하 고.
    1. 첨부 1 mL luer 잠금 주사기 luer 잠금 부분 풍선 카 테 터의 정상적인 염 분으로 가득합니다. 신중 하 게 덫을 놓은 공기의 부재에 대 한 모니터링 합니다. 누수를 확인 하 고 주사기의 플런저를 눌러 적절 한 풍선 인플레이션 확인.
  3. 토끼의 무게 및 37 thermopad 설정 ° c.
  4. Buprenorphine 솔루션을 사용 하 여 0.3 밀리 그램의 농도에 / ml. 0.01 mg/kg의 복용량을 피하 주사 하.
  5. Anesthetize 10-15 분에 대 한 유도 실에서 5 L/분 O 2와 5 %isoflurane 토끼
  6. 외과 플랫폼에 계속 생리대에 마 취 토끼를 놓습니다. 패치 및 온도, 호흡, 심전도 모니터링 하는 클립.
  7. 적합 한 마 취 기계에 연결 된 얼굴 마스크를 토끼의 주 둥이 연결 합니다. 마 취와 isoflurane 2.5 L/min O 2 (4.0%)를 유지 합니다. 적절 한 anesthetization (개 그, pinnae 반사의 손실 및 근육의 부족으로 표시)를 확인 하십시오.
  8. 안과 연 고는 각 막 건조 하지 않도록 두 눈에 적용 됩니다. 노출만 더 낮은 사지와 토끼를 메 마른 외과 시트와 함께 드러 워 진.

2. 수술 프로토콜

  1. 동물 발기를 사용 하 여 무릎 관절 바로 아래 복 부 영역에서 제거.
  2. 적당 한 살 균 제는 피부를 청소 하 고 느슨한 머리를 제거 하는 영역을 면봉.
  3. Saphenous 동맥을 찾아서 메스를 사용 하 여 길이에 약 1.5 ㎝의 작은 피부 절 개를 하 게.
  4. 대 퇴 정 맥, 대 퇴 신경 손상 없이 작은 곡선된 겸 자도 saphenous 동맥의 작은 부분을 노출.
  5. Saphenous 동맥 아래 두 개의 느슨한 합자 루프 (5-0 실크) 놓고 한 합자 루프는 동맥의 말 초 끝을 묶어. 장 골 동맥에서 혈액의 흐름을 막으려고 합자 위에 microvascular 클램프 장소.
  6. Papaverine 동맥 팽창 하 고 vasospasm을 방지 하기 위해 한 방울 몸에 붙이기도 적용.
  7. 묶인된 합자의 도움으로 saphenous 동맥을 올리고 확인 작은 arteriotomy 절 개는 24를 사용 하 여 게이지 바늘.
  8. 미세 집게와 절 개 플랩 상승 하 고 천천히 동맥의 루멘으로 정 맥 선택 또는 지도 바늘을 삽입.
  9. Saphenous 동맥에 2 프랑스어 Fogarty 동맥 embolectomy 카 테 터를 삽입합니다. 정 맥 선택 및 microvascular 클램프 제거.
  10. 6 마크 (20-25 cm)에 해당 하는 위치 약까지 카 테 터를 미리 장 골 분기점 위에 2-5 cm.
  11. 1 mL 주사기를 사용 하 여 0.1 mL 정상적인 염 분 또는 6의 공칭 압력에서 풍선을 부 풀 려 16 , 22에 설명 된 대로 규제 수동 공기 펌프를 사용 하 여 atm.
  12. 집게와 풍선 카 테 터를 누른 테 회전 하는 동안 삽입 지점 장 골 arterytoward 통해 6 cm에 의해 다시 끕니다.
  13. 주사기의 플런저를 후퇴 하 여 풍선을 수축.
  14. 완료 내 피 노출 되도록 단계 2.10 2.13 세 번 반복.
  15. 카 테 터를 제거 하 고 출혈을 멈추게 하는 arteriotomy 사이트의 바로 위에 합자 루프를 즉시 넥타이.
  16. 상처 주위 적합 한 살 균 모두를 적용 하 고 혈 병을 떨어져 면봉. 5-0 봉합, 피부 절 개를 닫고 povidone-요오드 솔루션 수술 사이트 소독.
  17. 2.1에 2.16는 contralateral에 장 골 새로운 카 테 터를 사용 하 여 단계를 반복 하십시오.
  18. 눈에서 안과 연 고를 면봉.

3. 수술 치료

  1. sulfadoxine 관리 40 mg/kg 및 trimethoprim 8 mg/kg 또는 다른 적합 한 항생제는 수술 직후.
  2. 마 취 회복 기간 동안 깨끗 한 압력가 감 금 소에 열 패드를 통해 토끼를 유지.
  3. 모니터링 패치 및 클립 제거.
  4. 복구 후 자신의 집 새를 토끼를 반환. 주사 피하 buprenorphine 0.05-0.1 mg/kg 게시물-operatively 48 헤 또 다른 2 주 또는 4 주에 대 한 계속 atherogenic 다이어트에 대 한 모든 6-12 h.

4. 조직 수확 및 분석의 패 구성

  1. 2 주 (초기 얇은 패)에 대 한 풍선 상해의 3 주 후, 위에서 설명한 대로 isoflurane 비슷한 방식으로 사용 하 여 토끼 anesthetize.
  2. 흉 강 열고 intracardial exsanguination에 의해 토끼를 안락사.
  3. 23에 설명 된 대로 장 골 동맥을 분리.
    1. 짧게, 복 부를 열고는 retroperitoneum 노출. 장 골 분기점 쪽으로 대동맥을 추적 하 고 분기점 위에 그것을 넥타이. 조심 스럽게 노출 하 고 격리 두 장 골 동맥 주위 조직을 제거.
  4. Dissect 두 장 골 동맥과 버퍼링 차가운 인산 염에 그들을 담가. 집게의 도움으로 혈전을 제거 합니다. 각 장 골 동맥 characterise 걸쳐 동맥 플 라크의 두께를 4-6 세그먼트로 분할.
  5. 즉시 형 최적의 절삭 온도 화합물, 포함 된 스냅-동결 액체 질소를 사용 하 여 동맥 세그먼트를 포함 하 고-70 ° C. 준비 5 µ m 24에 설명 된 대로 cryostat를 사용 하 여 두꺼운 섹션에서 그것을 유지.
  6. 수행 조직학, 면역 형광 검사 또는 10 , 25에 설명 된 대로 morphometry, 플 라크 지질 및 세포질 내용에 대 한 얼룩 immunohistochemical
    참고: 짧게, 버퍼링 하는 인산 염 (PBS)와 동맥 섹션 린스 하 고 0.2%를 사용 하 여 permeabilize 트리톤. PBS 가진 섹션 린스를 안티 α-SM 걸 (1: 200) 또는 RAM11 항 체 (1: 200) 37 ° C에서 1 시간에 대 한 섹션 2% 소 혈 청 알 부 민 30 분 품에 대 한 비 특정 사이트를 차단 합니다. PBS 가진 섹션 린스 하 고 PBS 37 ° C. 씻어 다시 30 분에 대 한 적절 한 이차 항 체와 그들을 품 어 Hoechst 추가 (5 µ g/mL) 10 분 핵 감지.

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Representative Results

장 골 동맥의 풍선 부상 합병증 (그림 1) 없이 성공적으로 수행 되었다. 총 수술 시간 30 분 부상에 대 한 20에서 배열 했다 수행 하나의 장 골 동맥, 및 두 동맥에 대 한 35 ~ 45 분. 토끼 풍선 부상 후 1 시간 이내 복구. 모든 동물 상당한 체중 감소 없이 건강 한 나타났다. 아니 감염, 부 종 또는 동맥 혈전 증 발생 했습니다. 상처 영역 봉합 사이트에서 몇 가지 가벼운 섬유 증 외 정상적 이었다. Atherogenic 다이어트 먹이의 4 주, 다음 토끼 전시 콜레스테롤 혈 증 44 ±의 18 m m/l.

그림 2A, 그림 2E, 그리고 그림 2I 표시 오른쪽 손상 되지 않은 장 골 동맥 (풍선 부상 대상이 되지) 정상적인 모습. (그림 2그림 3) 2 주에 동맥 경 화성 플 라크의 개발으로 이어지는 혈관 벽의 구조 변경으로 풍선 부상과 콜레스테롤 dietresulted의 조합입니다. 손상 되지 않은 및 풍선 부상된 장 골 동맥에 대 한 같은 동물에서 분리 했다. 트리거 이벤트로 풍선 부상으로 증식 혈관 응답 결과 광범위 한 지질 침투 (8.7 ± 1.7% 지질 지역) (그림 2그림 3), 부드러운 근육 세포 마이그레이션 및 확산 (그림 4), 또한 (그림 3) 관찰 2 intima-미디어 두께 비율 (1.5 ± 0.2), 그리고 플 라크 지역 (0.8 ± 0.2 m m2)에 증가 하는 수 반하는 선도 하는 대 식 세포 (그림 4)의 채용 감소 루멘 지역 (1.4 ± 0.2 m m2)으로 주 후 풍선 부상. RAM-11는 특별히 토끼 대 식 세포의 세포질에 대 한 대상으로 단일 클론 항 체 이다. Α-SM 걸 근육 걸 하 고 혈관에 혈관 부드러운 근육 세포와 반응 합니다. 이 항 체 이전 대 식 세포 및 토끼의 내 병 변에서 부드러운 근육 세포 연구에 사용 되었습니다. 이러한 변화 진화를 계속 시간과 intima 미디어 두께 (2.6 ± 0.2) 비율과 luminal 축소 (0.7 ± 0.1 m m2)에 더 증가 (그림 2그림 3) 풍선 부상 후 4 주를 지적 했다. 이 기술은 시간이 지남에 개발 하 고 2 ~ 4 주 후 공부 했다 동맥 경 화성 플 라크의 강력한 개발을 리드.

Figure 1
그림 1: 패 진행 풍선 부상 다음의 타임 라인을 보여주는 도식 표현. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

Figure 2
그림 2: 풍선 부상 토끼 장 골 동맥에 동맥 경화를 유발. 유엔 부상에서 섹션 스테인드 Movat pentachrome (A D) 되며 오신 (E-H), 기름 빨간 O (L)의 대표 이미지 (A, E, 난), 2 주 게시물 풍선 부상 (B, F, J) (n = 5) 4 주 게시 풍선 부상 (C, G, K) (n = 3) atherogenic 다이어트의 장 골 동맥 세그먼트 먹이 NZW 토끼. D, H 및 L에 대 한 눈금 막대는 100 µ m. 눈금 막대 다른 이미지에 대 한 = 500 µ m. Labelled B는 이미지에서 루멘, intima, IEL (내부 탄력 있는 lamina)와 장 (외부 탄력 있는 lamina) 어. 미디어는 IEL와 장 어 사이 지역 이다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

Figure 3
그림 3: 플 라크의 형태학 분석. 풍선 2 동맥을 부상 분산형 플롯 쇼 intima 미디어 두께 비율, 플 라크 지역, 루멘 지역 및 취소 부상된 제어에서 장 골 동맥 단원의 % 기름 빨간 O 긍정적인 지역, (n = 5) 4 주 (n = 3). 데이터 평균 ± sd.로 표시 됩니다 * p < 0.05 유엔 부상된 동맥, #p < 0.05 4 주 게시물 풍선 부상. 노스다코타를 발견 하지 나타냅니다. 플 라크 지역 O 긍정적인 지역 전체 횡단면 용기 벽 지역의 %를 나타내는 빨간 기름 동안 IEL 지역에서 루멘 영역을 빼서 계산 됩니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

Figure 4
그림 4: 플 라크 구성의 Immunohistochemical 분석. 대표 이미지 보여주는 α-부드러운 근육 말라 (레드) (A-D)와 대 식 세포 (RAM 11) 긍정적인 세포 (레드) (E-F). 오른쪽 패널 Hoechst (파란색)와 엘라 스 틴 (녹색) 각 병합 된 이미지를 표시합니다. 눈금 막대 = 100 µ m. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

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Discussion

토끼 장 골 동맥 경화 모델은 아 테 롬 연구에서 널리 이용 된다. 이 프로토콜은 토끼 빠르게 자발적인 병 변만 콜레스테롤 다이어트와 함께 개발에 비해 더 심각 하 고 고급 패 개발. 중요 한 것은, 동물 수술에서 신속 하 게 복구합니다.

Atherogenesis 위한 주요 자극은 endothelium 부상 하 고 혈관 벽26distends 풍선 카 테 터로 인 한 기계적 손상 이다. 이 이렇게 대 식 세포 신규 모집 및 지질 축적 때 hypercholestorolemic 다이어트, 혈관 평활 근 세포 이동과 확산, 향상 된 매트릭스와 관련 된 염증으로 특징 개장 응답 유도 합성, 고 시간 종속 패션15,16에 침략 neointima의 설립. 풍선 카 테 터 삽입 절차의 가장 중요 한 부분입니다. 강제로 삽입 풍선 피하기 위해 주의 행사 해야 합니다. 일반적인 장 골 동맥에 액세스 하려면 주변 saphenous 동맥의 사용 기술을 단순화 합니다. 장 골 동맥 경 동맥 컷-다운 앞에서 설명한27,28을 통해 액세스할 수 있습니다. 그러나, 장 골 동맥 경 동맥을 통해 평가 높은 정도의 수술 전문 및 제품은 단위 등 추가 장비 필요 합니다. 그것은 또한 치명적인 출혈29에 지도 하는 경 정 맥에 부상 같은 절차 관련 합병증에 연관 된다. 국 소 vasodilator papaverine 등의 사용 배 팽창 하 여 풍선 카 테 터30에 대 한 동맥 벽의 저항을 줄일 수 있습니다. 인플레이션 압력과 풍선 크기가 neointimal 형성31에 직접 연결을가지고 신중 하 게 고려 되어야 한다. 원하는 수준 보다 더 높은 학위에 풍선의 과도 팽창 혈관 벽의 파열 될 수 있습니다. 이 혈액과 강력한 혈전 형성 두와 외부 표면26루멘에서의 누수 될 수 있습니다.

동물 풍선 부상 그 내 피 부상 되도록 이전 1 또는 2 주에 대 한 풍부한 다이어트 콜레스테롤 설정에서 발생 하는 지질을 먹이 해야 합니다. 그것은 또한 새로운 다이어트에 적응 하는 동물을 돕는다. 이 기술은 유도 토끼에 고급 패, 비록는 플 라크의 형태로 그에 관찰 된 인간에서 다릅니다. 자발적인 인간의 병 변 그대로 내부 탄성 층32하위 내 피 지역으로 제한 됩니다. 여기, 연구 실시 4 주 보였다 아무 거리 코어까지. 동맥 경 화성 병 변 비슷한 상당한 대 식 세포 침투와 지방 조 흔 남아 있습니다.

많은 작고 큰 동물 모델 atherogenesis6를 이해 하는 데 사용 되었습니다. 풍선 부상 토끼 장 골 동맥 모델은 새로운 치료, 새로운 약물 전달 시스템, 플 라크 진화 및 이미징10,,3233의 효과 연구에 사용 되었습니다. 단일 또는 여러 풍선 injurieshave 장 골 동맥34,35, 경 동맥36,37, 그리고 대동맥10,38에서 수행 되었습니다. 경 동맥의 사용에 비해 제시 방법의 장점은 큰 플 라크 볼륨 및 두께의 개발입니다. 또한, contralateral 장 골 수 제어로 사용할 수 및 따라서29간 동물 다양성 감소 시킨다. 토끼 장 골 동맥의 풍선 부상 여기 설명 하는 방법을 사용 하는 안전 하 고 쉽게 수행할 수 있습니다. 플 라크 시간 종속 방식에서 개발 하 고 동맥의 길이 걸쳐 균일입니다. 다른 동맥 경 화성 토끼 모델 또한 와타나베 상속 hyperlipidemic (WHHL) 모델, 저밀도 지 단백질 수용 체 결핍 된 유전자 변형된 동물 모델 같은 개발 되었습니다. 풍선 손상 모델 WHLL 토끼 정의 사이트에서 병 변 생산에 적용할 수 있습니다.

토끼 장 골 동맥과 인간의 관상 동맥 플 라크의 차이점을 확인 하 고 있습니다. 사실, 몇 가지 절차 고급 동맥 경 화성 병 변을 개발 하 고 인간39에 관측 된 플 라크 파열의 모델을 만드는 데 시도에 설립 되었습니다. 예를 들어, 불안정 플 라크 형성 토끼 풍선 부상16수술 8 주 후 콜레스테롤 다이어트를 제거 하 여 유도 했다. 다른 수정된 절차 러셀의 바이퍼 독10 등 후속 반복된 풍선 부상40약리 트리거를 사용 하 여 플 라크 파열의 메커니즘, 동맥 경 화성에 thrombogenesis 및 혈전 증가 평가 하 선박입니다. 러셀의 바이퍼 독 응고 캐스케이드 혈전 증에 지도 활성화 하는 프로 테아 제를 포함 되어 있습니다. 트 롬 빈 패 조직 요인40여 세대에 반복된 풍선 부상 결과. 그것은 토끼 모델을 포함 하 여 동물 모델 결과 인 간에 게 완벽 하 게 추정 하지 않을 수 있습니다 주목 해야한다. 그러나, 이러한 모델 평가 하 고 새로운 약리 개입의 효능을 비교에 대 한 유용한 도구를 수 있습니다. 주의 extrapolations 병 인, 이상, 그리고 인간의 동맥 경화 증의 치료에 대 한 지식을 넓힐 수 콜레스테롤 혈 증 및 패 구성의 정도 관하여 이루어져야 합니다. 모델 제시 여기 패 진화에 관련 된 메커니즘을 연구 하 고 새로운 항 동맥 경 화성 치료 패 안정화/회귀 향한 감독의 효과 조사 하는 데 도움이.

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Disclosures

저자 아무 경쟁 금융 관심사를 선언합니다.

Acknowledgements

이 작품은 스위스 국립 과학 재단 부여 150271에 의해 지원 되었다.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
New Zealand White rabbits Charles River laboratories,France Cre:KBL(NZW)
Cholesterol rich diet Ssniff spezialdiäten Ssniff EF K High Fat and Cholesterol
Glass bead sterilizer-Germinator 500 VWR, Leicestershire, UK 101326-488
Fogarty balloon embolectomy catheters, 2 French Edwards Lifesciences, Switzerland 120602F For single use only
Luer Lock Syringe Becton, Dickinson and Company, USA 309628
Thermopad Type 226 Solis, Switzerland AG 397387
Buprenorphine- Temgesic Reckitt Benckiser AG, Switzerland 7.68042E+12
Isoflurane Piramal Critical Care, Inc, Bethlehem, PA 18017 2667-46-7
Anaesthesia machine-combi-vet Base Anesthesia System Rothacher Medical GmbH, Switzerland CV 30-301-A
Cardell touch veterinary vital signs monitor Midmark, Ohio, USA 8013-001
Ophthalmic ointment-Humigel Virbac, France
Animal hair clippers Aesculap AG, Germany GT420
Disinfectant-Betadine solution MundipharmaMedicalCompany, Switzerland 14671-1203
Dumont #7 Forceps FST Germany 11274-20
Medium and small microscissors Medline International Switzerland Sàrl UC4337
Microvascular clamps FST, Germany 18051-28
Papaverine ESCA chemicals, Switzerland RE 356 803
Vein Pick Harvard Apparatus, Cambridge, UK 72-4169 For single use only
Saline Laboratorium Dr. G. Bichsel AG, , Switzerland 1330055
Polysorb 5-0 suture Covidien AG, Switzerland UL 202 Monofilament
Sulfadoxine and Trimethoprim-Trimethazol Werner Stricker AG, Switzerland Swissmedic Nr. 50'361
Antiseptic- Octenisept Schülke & Mayr AG, Switzerland GTIN: 4032651214068
Phosphate Buffered Saline Roth 1058.1
Isobutanol-2-Methylbutane Sigma-Aldrich, Switzerland M32631-1L
Optimum Cutting Temperature compound-Tissue-Tek VWR Chemicals, Belgium 25608-930
Cryostat Leica, Glattbrugg, Switzerland Leica CM1860 UV
Glass slide- Superfrost Plus Thermo Scientific 4951PLUS4
Mayer's Haematoxylin Sigma-Aldrich, Switzerland MHS32-1L
Eosin 0.5% aq. Sigma-Aldrich, Switzerland HT110232-1L
Oil Red O Sigma-Aldrich, Switzerland O0625-25G
α-smooth muscle actin antibody Abcam, UK. ab7817
Macrophage Clone RAM11 antibody DAKO, Switzerland M063301
Hoechst Abcam, UK. ab145596
Goat polyclonal Secondary Antibody (Chromeo 546) Abcam, UK. ab60316
Alexa Fluor 488/547 Abcam, UK.
Glycergel Mounting Medium, Aqueous DAKO, Switzerland C056330
Hematoxylin for Movat pentachrome staining Sigma-Aldrich, Switzerland H3136-25G
Ferric chloride for Movat pentachrome staining Sigma-Aldrich, Switzerland 157740-100G
Iodine for Movat staining Sigma-Aldrich, Switzerland 207772-100G
Potassium iodide for Movat pentachrome staining Sigma-Aldrich, Switzerland 60400-100G-F
Alcian blue for Movat staining Sigma-Aldrich, Switzerland A5268-10G
Strong Ammonia for Movat pentachrome staining Sigma-Aldrich, Switzerland 320145-500ML
Brilliant crocein MOO for Movat pentachrome staining Sigma-Aldrich, Switzerland 210757-50G
Acid Fuchsin for Movat pentachrome staining Sigma-Aldrich, Switzerland F8129-50G
Sodium Thiosulfate for Movat pentachrome staining Sigma-Aldrich, Switzerland 72049-250G
Phosphotungstic acid for Movat pentachrome staining Sigma-Aldrich, Switzerland 79690-100G
Crocin for Movat pentachrome staining Sigma-Aldrich, Switzerland 17304-5G
EUKITT for Movat pentachrome staining Sigma-Aldrich, Switzerland 03989-100ML

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References

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